一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法技术

本发明专利技术公开一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法，该方法将小麦胚芽采用微波真空干燥并进行超微粉碎，加入碱性盐溶液对小麦胚芽蛋白进行提取；提取后将提取液和提余物分离，对提取液进行超滤浓缩，浓缩液采用胃蛋白酶进行酶解得到小麦胚芽活性肽溶液，灭酶并二次浓缩后，得到小麦胚芽肽浓缩液，以葡聚糖凝胶层析、离子交换剂层析进行分离纯化，干燥后得到纯化的小麦胚芽抗氧化肽。本发明专利技术方法中小麦胚芽的蛋白提取率高，小麦胚芽抗氧化肽具有良好的活性和应用价值。 1

【技术实现步骤摘要】
一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法
本专利技术涉及食品加工
，特别提供了一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法。
技术介绍
小麦胚芽是小麦加工业的主要副产品之一，也是小麦营养最多的部分，占小麦籽粒的2～3％，富含蛋白质，碳水化合物，脂肪，灰分和氨基酸以及一些维生素等生理活性成分，被称为小麦的精华和营养宝库。小麦胚芽蛋白含量高，达30％左右，仅次于大豆，含有清蛋白、麦醇溶蛋白和麦谷蛋白等，水溶性蛋白质占30％以上。小麦胚芽的蛋白酶解后最有益的成分为生物活性肽，它是对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物，又称功能肽。活性肽由人体的20种不同氨基酸以不同种类和不同数量排列形成，再加上还可能有二级、三级结构，其种类十分庞大，每一种活性肽都具有独特的组成结构，不同活性肽的组成结构决定了其不同的生物活性功能。生物活性肽的吸收机制优于氨基酸，具有氨基酸不可比拟的生物活性功能，目前主要包括类吗啡样、激素和调节激素、调节和抑制酶、免疫调节、抗血栓、抗高血压、降胆固醇抗癌、抗氧化和清除自由基、改善元素吸收和矿物质运输、促进生长等生物活性肽。目前小麦胚芽未被充分利用，具有潜在的精深加工价值。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提出一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法，该方法采用碱性盐法超声辅助提取小麦胚芽蛋白，蛋白提取率高；综合筛选不同的酶对小麦胚芽蛋白进行酶解，优选出胃蛋白酶作为酶源，在模拟人体胃酸条件下进行多肽的制备，在提取与酶解中综合优化各项工艺参数，提高了小麦胚芽的利用率。具体技术方案如下：一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将小麦胚芽进行微波真空干燥、超微粉碎后，得到小麦胚芽超微粉；采用碱性盐法，结合超声辅助法提取小麦胚芽粉，得到小麦胚芽蛋白溶液；(2)固液分离，取上清液，即为小麦胚芽蛋白提取液；(3)对步骤(2)的小麦胚芽蛋白提取液进行超滤浓缩，得到小麦胚芽蛋白浓缩液；(4)在上述浓缩液中加入胃蛋白酶，进行蛋白的酶解，酶解后灭酶，得到胚芽蛋白肽溶液；(5)将小麦胚芽蛋白肽溶液进行超滤浓缩、层析过滤和干燥，得到纯化的小麦胚芽抗氧化肽。进一步地，所述的步骤(1)所述的浸提过程具体为：采用碱性盐溶液与小麦胚芽粉的液料体积比为5～15：1，水浴加热，浸提时间30-120min，浸提次数2～3次。进一步地，所述的步骤(1)中碱性盐法所采用的碱性盐溶液的pH值范围为8-11，盐浓度为0.2-1.2mol/L。进一步地，所述的步骤(1)中的超声波功率为30W-5KW，超声时间为30-120min。进一步地，所述的步骤(2)采用的是离心或者板框压滤的方法进行固液分离。进一步地，所述的步骤(3)、(5)的超滤浓缩的操作压力为0.1-0.7MPa，超滤膜孔径为10-200nm。进一步地，所述的步骤(4)中酶解温度为30-60℃，酶解时间1-6h，酶添加比例为步骤(3)浓缩液的0.1-1％。进一步地，所述的步骤(4)中的灭酶条件为80-100℃保温5-20min。进一步地，所述的步骤(5)中的层析过滤，采用的是凝胶过滤或者离子交换层析法过滤，或者两者的组合。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术采用碱性盐法超声辅助提取小麦胚芽蛋白，蛋白提取率高，综合筛选了不同蛋白酶，并对蛋白酶的效果进行了综合比较，筛选获得胃蛋白酶，在模拟人体胃酸条件下进行抗氧化肽的制备，在提取与酶解中综合优化的工艺参数，提高了小麦胚芽的利用率，具有良好的应用价值；并系统集成超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析的方法得到了目标产物抗氧化肽溶液。附图说明图1是本专利技术的工艺流程图；图2为实施例1的酶解优化工艺参数交互作用图。图3为实施例1分离所得的抗氧化肽的凝胶色谱图；图4为实施例2离子交换色谱图；图5为实施例2分离后多肽的分子量质谱图；图6为实施例4分离后多肽的分子量质谱图。具体实施方式下面根据附图和优选实施例详细描述本专利技术，本专利技术的目的和效果将变得更加明白，以下结合附图和实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1如图1所示，本专利技术的小麦胚芽抗氧化肽的制备方法具体如下：(1)将小麦胚芽进行微波真空干燥、超微粉碎后，得到小麦胚芽超微粉，取过60目筛的样品50g，采用0.5mol/L氯化钠，pH值10，料液比1：10，对样品采用超声辅助法进行浸提60min，超声波采用40W，浸提两次，合并浸提液，得到小麦胚芽蛋白溶液；(2)采用10000rpm离心30min进行固液分离，取上清液，即为小麦胚芽蛋白提取液；(3)取步骤(2)得到的小麦胚芽蛋白提取液900mL进行超滤浓缩，温度40℃，操作压力为0.1MPa，超滤膜孔径为200nm，浓缩至260mL，得到小麦胚芽蛋白浓缩液；(4)取50mL小麦胚芽蛋白浓缩液，加入占浓缩液质量比为1％的胃蛋白酶，调节pH值为1.1，温度为60℃，保温酶解73.8min，酶解后测定上清液的抗氧化活性，并100℃灭酶5min，得到胚芽蛋白肽溶液；(5)将步骤(4)获得溶液进行超滤浓缩，操作压力为0.4MPa，超滤膜孔径为200nm，并采用SephadexG-75凝胶层析过滤，分离得到具有抗氧化活性的多肽部分，进行红外真空冷冻干燥，得到纯化的小麦胚芽抗氧化肽。对比例1具体步骤和实施例相同，仅将步骤(4)中的胃蛋白酶换成1％的木瓜蛋白酶，调节pH值7，温度为60℃，保温酶解2h。对比例2具体步骤和实施例相同，仅将步骤(4)中的胃蛋白酶换成1％纤维素酶，调节pH值为4.5，温度为60℃，保温酶解2h。对比例3具体步骤和实施例相同，仅将步骤(4)中的胃蛋白酶换成1％碱性蛋白酶，调节pH值为9，温度为60℃，保温酶解2h。对比例4具体步骤和实施例相同，仅将步骤(4)中的胃蛋白酶换成1％复合蛋白酶，调节pH值为7.0，温度60℃，保温酶解2h。酶解后离心测定上清液的抗氧化活性，结果如下表1所示。从表1中可以看出，胃蛋白酶酶解后自由基的清除率远高于其他几种酶，对胃蛋白酶的使用量和条件进行优化，得到酶解过程中的最优参数，如图2所示，可以看出酶解时间、温度和pH值三个因素相互之间的交互作用，对最佳酶解参数的选择有益。将样品分步进行SephadexG-75凝胶过滤层析，如图3所示，可以看出凝胶层析后的各部分样品中，其吸光度差异表明肽含量的差别，对收集的不同样品进行抗氧化活性分析，合并抗氧化活性高的各组样品，进行红外真空冷冻干燥，得到多肽样品。表1不同酶对羟基自由基清除率的影响酶种类清除率(％)胃蛋白酶40.0木瓜蛋白酶12.8纤维素蛋白酶0碱性蛋白酶9.88复合蛋白酶13.75实施例2(1)将小麦胚芽进行微波真空冷冻干燥、超微粉碎后，得到小麦胚芽超微粉，取过60目筛的样品50g，采用0.8mol/L氯化钠，pH值10，料液比1：8，对样品采用超声辅助法进行提取100min，超声波采用60W，重复浸提1次，得到小麦胚芽蛋白溶液；(2)采用10000rpm离心60min进行固液分离，取上清液，即为小麦胚芽蛋白提取液；(3)取步骤(2)得到的小麦胚芽蛋白提取液800mL进行超滤浓缩，温度40℃，操作压力为0.7MPa，超滤膜孔径为10nm，浓缩至30本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

【技术特征摘要】
1.一种小麦胚芽抗氧化肽的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将小麦胚芽进行微波真空干燥、超微粉碎后，得到小麦胚芽超微粉；采用碱性盐法，结合超声辅助法提取小麦胚芽粉，得到小麦胚芽蛋白溶液；(2)固液分离，取上清液，即为小麦胚芽蛋白提取液；(3)对步骤(2)得到的小麦胚芽蛋白提取液进行超滤浓缩，得到小麦胚芽蛋白浓缩液；(4)在上述浓缩液中加入胃蛋白酶，进行蛋白的酶解，酶解后灭酶，得到胚芽蛋白肽溶液；(5)将小麦胚芽蛋白肽溶液进行超滤浓缩、层析过滤和干燥，得到纯化的小麦胚芽抗氧化肽。2.根据权利要求1所述的小麦胚芽抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)所述的浸提过程具体为：采用碱性盐溶液与小麦胚芽粉的液料体积比为5～15：1，水浴加热，浸提时间30-120min，浸提次数2～3次。3.根据权利要求1或2所述的小麦胚芽抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)中碱性盐法所采用的碱性盐溶液的pH值范围为8-11，盐浓度为0.2-1.2mol/L。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡成岗，邬大江，毛建卫，李建华，沙如意，蔡海莺，余波，
申请(专利权)人：杭州恒天面粉集团有限公司，浙江科技学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33