miR-106a-5p抑制骨关节炎软骨基质降解制造技术

本发明专利技术公开了miR‑106a‑5p抑制骨关节炎软骨基质降解。本发明专利技术提供了miR‑106a‑5p以及用于表达miR‑106a‑5p的物质在如下任一中的应用：(a)抑制骨关节炎发生和/或发展；(b)制备用于抑制骨关节炎发生和/或发展的产品。本发明专利技术采用骨关节炎模型小鼠，发现关节腔内注射miR‑106a‑5p能够显著改善骨关节炎的发生发展。并且，miR‑106a‑5p在骨关节炎患者软骨中发现为低表达。这表明，miR‑106a‑5p可以成为一种新型的抑制骨关节炎病情进展的靶标。 1

MiR-106a-5p inhibition of cartilage matrix degradation in osteoarthritis

The invention discloses miR 106A 5p inhibiting cartilage matrix degradation of osteoarthritis. The invention provides the miR 106A 5p and the application of the substance used to express the miR 106A 5p in any of the following applications: (a) inhibiting the occurrence and / or development of osteoarthritis; (b) a product for inhibiting the occurrence and / or development of osteoarthritis. The invention uses osteoarthritis model mice to discover that miR 106A 5p can significantly improve the development of osteoarthritis. Moreover, the expression of miR 106A 5p was found to be low in cartilage of osteoarthritis patients. This indicates that miR 106A 5p can be a new target for inhibiting the progression of osteoarthritis. One

【技术实现步骤摘要】
miR-106a-5p抑制骨关节炎软骨基质降解
本专利技术属于生物
，涉及miR-106a-5p抑制骨关节炎软骨基质降解，特别涉及miR-106a-5p在制备用于抑制骨关节炎软骨基质降解的产品中的应用。
技术介绍
骨关节炎以软骨基质降解为主要特征，是目前最普遍的一种关节炎。关节软骨基质降解以及其自身修复的局限性导致了关节整体性的破坏和进展性不可逆的功能变化，最终导致世界范围内的关节功能障碍。由此，各种治疗技术和药物随之研发而治疗骨关节炎。虽然骨关节炎基因组学已经取得一些成就，但是临床应用效果却未有很大改善。因此，识别骨关节炎更有效的靶标迫在眉睫，进而促进骨关节炎的临床治疗。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类大小约19-25个核苷酸(nt)的内源性非蛋白编码调控单链小分子RNA，具有高度保守性，一般来源于染色体的非编码区域，能够调节基因合成以及其他重要的生物功能。目前，研究报道，miRNAs能够在骨关节炎中发挥重要角色。miRNAs的异常表达能够影响机体的正常功能。最近，一些miRNAs，如miR-29、miR-105等已经被报道参与骨关节炎的进展和炎症过程中。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供miR-106a-5p及其相关生物材料的新用途。第一方面，本专利技术要求保护如下(1)-(4)所示物质中的任一种在如下(a)或(b)中的应用：(1)成熟miR-106a-5p；(2)前体miR-106a-5p；(3)编码(1)中所述成熟miR-106a-5p或(2)中所述前体miR-106a-5p的DNA分子；(4)含有(3)中所述DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞；(a)抑制骨关节炎发生和/或发展；(b)制备用于抑制骨关节炎发生和/或发展的产品。第二方面，本专利技术要求保护如下(1)-(4)所示物质中的任一种在如下(c)或(d)中的应用：(1)成熟miR-106a-5p；(2)前体miR-106a-5p；(3)编码(1)中所述成熟miR-106a-5p或(2)中所述前体miR-106a-5p的DNA分子；(4)含有(3)中所述DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞；(c)抑制骨关节炎软骨基质降解；(d)制备用于抑制骨关节炎软骨基质降解的产品。第三方面，本专利技术要求保护如下(1)-(4)所示物质中的任一种在如下(e)-(h)至少一种中的应用：(1)成熟miR-106a-5p；(2)前体miR-106a-5p；(3)编码(1)中所述成熟miR-106a-5p或(2)中所述前体miR-106a-5p的DNA分子；(4)含有(3)中所述DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞；(e)促进关节软骨体积增大；(f)制备用于促进关节软骨体积增大的产品；(g)促进关节软骨表面覆盖区域增大；(h)制备用于促进关节软骨表面覆盖区域增大的产品。第四方面，本专利技术要求保护能够促进如下(1)或(2)或(3)表达的物质在如下(a)-(h)至少一种中的应用：(1)成熟miR-106a-5p；(2)前体miR-106a-5p；(3)编码(1)中所述成熟miR-106a-5p或(2)中所述前体miR-106a-5p的DNA分子；(a)抑制骨关节炎发生和/或发展；(b)制备用于抑制骨关节炎发生和/或发展的产品；(c)抑制骨关节炎软骨基质降解；(d)制备用于抑制骨关节炎软骨基质降解的产品；(e)促进关节软骨体积增大；(f)制备用于促进关节软骨体积增大的产品；(g)促进关节软骨表面覆盖区域增大；(h)制备用于促进关节软骨表面覆盖区域增大的产品。在上述四方面所述的应用中，所述成熟miR-106a-5p具体为人源成熟miR-106a-5p；所述前体miR-106a-5p具体为人源前体miR-106a-5p。进一步地，所述成熟miR-106a-5p具体为SEQIDNo.1所示的RNA分子；所述前体miR-106a-5p具体为SEQIDNo.2所示的RNA分子。第五方面，本专利技术要求保护miR-106a-5p在作为用于治疗和/或预防骨关节炎的靶标中的应用。其中，所述miR-106a-5p具体为人源miR-106a-5p。进一步地，所述miR-106a-5p具体为SEQIDNo.1所示的人源成熟miR-106a-5p或者为SEQIDNo.2所示人源前体miR-106a-5p。采用骨关节炎模型小鼠，发现关节腔内注射miR-106a-5p能够显著改善骨关节炎的发生发展。并且，miR-106a-5p在骨关节炎患者软骨中发现为低表达。这表明，miR-106a-5p可以成为一种新型的抑制骨关节炎病情进展的靶标。附图说明图1为各组小鼠关节软骨的μCT分析结果。A为膝关节的冠状面、矢状面的扫描图；B为膝关节软骨表面覆盖区域以及软骨体积。图2为各组小鼠关节软骨的组织病理学检测结果。图3为各组小鼠的关节软骨评级结果。图4为各组小鼠的旋转实验结果。图5为骨关节炎病人关节软骨中miR-106a-5p表达情况检测结果。各图中，*表示P<0.05；**表示P<0.01。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中，统计计算采用SPSS17.0软件进行。所有体外实验均均重复三次以上。数据以均值±标准差(SD)表示。P<0.05被认为具有统计学意义。实施例1、miR-106a-5p抑制骨关节炎软骨基质降解本专利技术所涉及的miR-106a-5p为人源miR-106a-5p。成熟miR-106a-5p的核苷酸序列具体为SEQIDNo.1；前体miR-106a-5p的核苷酸序列具体为SEQIDNo.2。一、小鼠骨关节炎模型的制备对8周龄的C57BL/6小鼠(雄性)采用经典的骨关节炎造模手术—前交叉韧带切除术(ACLT)制造骨关节炎模型。具体实验步骤如下：8周龄C57BL/6小鼠，采用3％异氟烷对鼠进行麻醉；取小鼠右腿，在膝关节周围1.5cm处备皮，碘伏消毒，手术刀纵向切开皮肤，使膝关节暴露；继而剥离结缔组织并暴露关节腔，手术针挑拨分离前交叉韧带后，采用小型手术剪将前交叉韧带切断；对照组仅打开关节腔，并不剪断前交叉韧带，其他操作与实验组一致；然后依次缝合膝关节韧带及表面皮肤。8周后进行观测分析(CT检测、OARSI评级、病理检测等)，确定实验组骨关节炎小鼠模型构建成功。二、关节强注射miR-106a-5p于步骤一建模成功2周后，采用3％异氟烷对鼠进行麻醉。对小鼠采用33号针头(HamiltonCompany)和25μlCASTIGHT注射器(HamiltonCompany)分别注射miRNA对照(5nmol，每只小鼠用量)和miR-106a-5p(5nmol，每只小鼠用量)。其中，miRNA对照为SEQIDNo.3所示的RNA分子；miR-106a-5p为SEQIDNo.1所示的成熟miR-106a-5p。三、效果检测共三组小鼠：miR-106a-5p组、对照组和正常组。其中，miR-106a-5p组即步骤一实验组小鼠建模成功2周后关节强注射miR-106a-5p；对照组即步骤一实验组小鼠建模成功2周后关节强注射miRNA对照；正常组为未本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如下(1)‑(4)所示物质中的任一种在如下(a)或(b)中的应用：

【技术特征摘要】
1.如下(1)-(4)所示物质中的任一种在如下(a)或(b)中的应用：(1)成熟miR-106a-5p；(2)前体miR-106a-5p；(3)编码(1)中所述成熟miR-106a-5p或(2)中所述前体miR-106a-5p的DNA分子；(4)含有(3)中所述DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞；(a)抑制骨关节炎发生和/或发展；(b)制备用于抑制骨关节炎发生和/或发展的产品。2.如下(1)-(4)所示物质中的任一种在如下(c)或(d)中的应用：(1)成熟miR-106a-5p；(2)前体miR-106a-5p；(3)编码(1)中所述成熟miR-106a-5p或(2)中所述前体miR-106a-5p的DNA分子；(4)含有(3)中所述DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞；(c)抑制骨关节炎软骨基质降解；(d)制备用于抑制骨关节炎软骨基质降解的产品。3.如下(1)-(4)所示物质中的任一种在如下(e)-(h)至少一种中的应用：(1)成熟miR-106a-5p；(2)前体miR-106a-5p；(3)编码(1)中所述成熟miR-106a-5p或(2)中所述前体miR-106a-5p的DNA分子；(4)含有(3)中所述DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞；(e)促进关节软骨体积增大；(f)制备用于促进关节软骨体积增大的产品；(g)促进关节软骨表面覆盖区域增大；(h)制备用于促进关节软骨表面覆盖区域增大的产品。4.能够促进如下(1)或(...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀全博，徐亚梦，王岩，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11