miR-582在制备前列腺癌骨转移的诊断、预后试剂盒及药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miR‑582在制备前列腺癌骨转移的诊断、预后试剂盒及药物中的应用。发明专利技术人意外地发现miR‑582‑3p和miR‑582‑5p在骨转移的前列腺癌组织中低表达，并且miR‑582‑3p或miR‑582‑5p低表达预示着更低的无骨转移生存率；此外，体内体外实验均证实pri‑miR‑583过表达能上调miR‑582‑3p和miR‑582‑5p，并通过TGF‑β信号通路抑制前列腺癌骨转移，及前列腺癌骨转移细胞系的迁移和侵袭。因此，基于上述发现，能将miR‑582应用于制备前列腺癌骨转移诊断、预后试剂盒，并且有望开发出抑制前列腺癌骨转移的药物。

Application of miR-582 in the diagnosis, prognosis kit and drug preparation of prostate cancer with bone metastasis

The invention discloses the application of miR 582 in the diagnosis, prognosis kit and medicine for preparing prostate cancer bone metastasis. The inventors were surprised to find that miR 582 3P and miR 582 5p were low expression in the bone metastases of prostate cancer, and the low expression of miR 582 3P or miR 582 5p indicated lower bone free metastatic survival. In addition, in vitro and in vitro experiments proved that pri miR 583 overexpression could increase miR 3P and 582 TGF - beta signaling pathway inhibits prostate cancer bone metastasis and migration and invasion of prostate cancer bone metastasis cell lines. Therefore, based on the above findings, miR 582 can be used to prepare the kit for the diagnosis and prognosis of bone metastasis of prostate cancer, and it is expected to develop drugs to inhibit bone metastasis of prostate cancer.

【技术实现步骤摘要】
miR-582在制备前列腺癌骨转移的诊断、预后试剂盒及药物中的应用
本专利技术属于生物医学领域，更具体地涉及miR-582在制备前列腺癌骨转移的诊断、预后试剂盒及药物中的应用。
技术介绍
在世界范围内，前列腺癌(ProstateCancer、PCa)是男性最常见的恶性肿瘤之一，也是癌症死亡的第二大因素，仅次于肺癌。前列腺癌的主要死因是肿瘤发生远处转移，特别是骨转移，尽管原发性前列腺癌可以通过手术、激素治疗、放疗等手段得到有效控制，但是骨转移前列腺癌却仍然无法治愈，患者的生存率极低。因此，骨转移的早期诊断对于前列腺癌的预后及诊疗来说非常关键，同时，针对前列腺癌骨转移的治疗药物的开发对于提高患者生存率也大有帮助。近年来，前列腺癌骨转移相关的特异性miRNA的发现为其诊断和治疗打开了新局面，miRNA可以通过与mRNA的3’未翻译区域(3’-UTR)结合，抑制mRNA的翻译或促进mRNA的降解，从而调节基因的表达。越来越多证据表明，miRNA在肿瘤转移中发挥着重要的作用，对于特定癌种而言，某些miRNA能够抑制肿瘤转移，某些miRNA能够促进肿瘤转移，在恶性肿瘤中的miRNA的表达谱各异，因此，挖掘和探究新的miRNA在前列腺癌骨转移中的分子机制，对前列腺癌骨转移的预防和靶向性治疗将提供新的思路。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR-582在制备前列腺癌骨转移的诊断、预后试剂盒及药物中的应用。本专利技术所采取的技术方案是：检测miR-582和/或其编码基因的试剂在制备前列腺癌转移诊断试剂盒中的应用。作为优选的，所述试剂选自引物、探针、芯片中的一种或多种。作为优选的，所述miR-582选自pri-miR-582、pre-miR-582、miR-582-3p、miR-582-5p及其片段或变体中的一种或几种。作为优选的，所述转移包括骨转移、脑转移和淋巴结转移。检测miR-582和/或其编码基因的试剂在制备前列腺癌预后试剂盒中的应用。作为优选的，所述miR-582选自pri-miR-582、pre-miR-582、miR-582-3p、miR-582-5p及其片段或变体中的一种或几种。作为优选的，所述预后的指标为无转移生存时间/生存率，其中，转移包括骨转移、脑转移和淋巴结转移。以下物质中的一种或多种在制备抑制前列腺癌骨转移药物中的应用：1)能上调miR-582表达量的物质；2)能增强miR-582活性的物质；3)能增长miR-582有效作用时间的物质；4)能增强miR-582稳定性的物质。作为优选的，所述能上调miR-582表达量的物质选自：1)miR-582分子；2)miR-582修饰物；3)miR-582模拟物；4)编码miR-582的DNA；5)表达miR-582载体或病毒。作为优选的，所述miR-582选自pri-miR-582、pre-miR-582、miR-582-3p、miR-582-5p及其片段或变体中的一种或几种。本专利技术的有益效果是：专利技术人意外地发现miR-582-3p和miR-582-5p在骨转移的前列腺癌组织中低表达，并且miR-582-3p或miR-582-5p低表达预示着更低的无骨转移生存率；此外，体内体外实验均证实pri-miR-583过表达能上调miR-582-3p和miR-582-5p，并通过TGF-β信号通路抑制前列腺癌骨转移，及前列腺癌骨转移细胞系的迁移和侵袭。因此，基于上述发现，能将miR-582应用于制备前列腺癌骨转移诊断、预后试剂盒，并且有望开发出抑制前列腺癌骨转移的药物。附图说明图1：miR-582-3p和miR-582-5p的表达情况；其中，图A和图B分别为TCGA数据库中正常组织和前列腺癌组织中miR-582-3p和miR-582-5p的表达情况；图C和图D分别为前列腺癌骨转移组织和无骨转移组织中miR-582-3p和miR-582-5p的表达情况；图E和图F分别为miR-582-3p和miR-582-5p的表达量与骨转移状态的病例统计图，图中，组别标记带L为低表达组，带H为高表达组，nBM表示无骨转移，BM表示骨转移，ANT表示正常组织，Tumor表示肿瘤组织；图2：前列腺癌细胞系中miR-582-3p和miR-582-5p的相对表达量；图3：miR-582-3p和miR-582-5p的表达量与前列腺癌的生存分析，其中，图A和图B为前列腺癌无骨转移生存率曲线，图C和图D为前列腺癌总生存率曲线；图中，组别标记带L为低表达组，带H为高表达组；图4：转染pri-miR-582过表达载体的三组前列腺癌细胞系中miR-582-3p和miR-582-5p的表达量，组别标记中，vector表示转染了对照质粒，pri-miR-582表示转染了pri-miR-582过表达载体；图5：pri-miR-582过表达在体内抑制前列腺癌骨转移结果；其中，图A为BLI成像示意图，图B为骨X射线图，图C为骨HE染色图，图D为骨转移评分结果；图E为BLI信号结果图；图F为总生存曲线，图G为无骨转移生存曲线，组别标记中，vector表示接种了转染有对照质粒的PC-3细胞，pri-miR-582表示接种了转染有pri-miR-582过表达载体的PC-3细胞；图6：miR-582-3p模拟物和miR-582-5p模拟物对三组前列腺癌细胞系的迁移和侵袭的影响，其中，图A为miR-582-3p模拟物和miR-582-5p模拟物在三组前列腺癌细胞系中对miR-582-3p或miR-582-5p的表达量；图B和图C分别为miR-582-3p模拟物和miR-582-5p模拟物对三组前列腺癌细胞系的迁移和侵袭的能力的抑制，组别标记中，vector表示转染了对照质粒，miR-582-3p表示转染了miR-582-3p模拟物，miR-582-5p表示转染了miR-582-5p模拟物；图7：miR-582-3p、miR-582-5p、miR-582对TGF-β转录活性的影响，组别标记中，vector表示转染了荧光素酶标记的对照质粒，miR-582表示转染了荧光素酶标记的miR-582表达载体，miR-582-3p表示转染了荧光素酶标记的miR-582-3p表达载体，miR-582-5p表示转染了荧光素酶标记的miR-582-5p表达载体，TGF-β表示转染了TGF-β/Smad荧光素酶报告质粒；图8：miR-582-3p和miR-582-5p生物信息学靶向预测结果；图9：荧光素酶验证miR-582-3p、miR-582-5p、miR-582靶向结果；图10：TGF-β信号通路解除pri-miR-582抑制的前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力，其中，+表示添加有该物质，-表示未添加该物质。具体实施方式下面结合实验，进一步阐述本专利技术，但并不局限于此。下述实验例中所使用的实验方法或实验条件，如无特殊说明，均按常规方法或厂家说明书进行，下述实验例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。样本来源实验例所用的细胞系包括人前列腺癌细胞系(22Rv1、PC-3、VCaP、DU145、LNCaP)和正常前列腺上皮细胞RWPE-1，均从中科院上海细胞库获得；人前列腺癌细胞C4-2B购自MD安德森癌症中心；其中，RWPE-本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测miR‑582和/或其编码基因的试剂在制备前列腺癌转移诊断试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测miR-582和/或其编码基因的试剂在制备前列腺癌转移诊断试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂选自引物、探针、芯片中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述miR-582选自pri-miR-582、pre-miR-582、miR-582-3p、miR-582-5p及其片段或变体中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述转移包括骨转移、脑转移和淋巴结转移。5.检测miR-582和/或其编码基因的试剂在制备前列腺癌预后试剂盒中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述miR-582选自pri-miR-582、pre-miR-582、miR-582-3p、miR-582-5p及其片段或变体中的一种或几种。7.根据权利要求5所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄帅，唐欲博，郭远清，瓦庆德，廖壮文，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：广东,44