用于检测FVIII抑制剂的新型自动筛选方法的研究技术

本文公开了用于确定患者中凝血抑制剂的存在的方法。生成与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线和与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，并比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值。Ps/Cs平行度比值小于预定比值表示患者样本中存在凝血抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测FVIII抑制剂的新型自动筛选方法的研究相关申请的交叉引用本申请要求于2015年5月6日提交的美国临时申请No.62/157,709的权益。
本公开总体涉及血液凝固领域，更具体地涉及患者样本中凝血抑制剂的鉴定。
技术介绍
通过以下方式确定因子VIII(FVIII)活性：直接测量患者血浆样本的活化部分凝血活酶时间(APTT)，并且通过凝血时间(以秒为单位)的半对数级相对于在几个特定稀释点的标准已知活性百分比绘制标准曲线，由该曲线确定活性百分比。然后将患者血浆与等量的缺乏待测因子的血浆混合以进行稀释，并进行患者样本的因子VIII活性测量，并且由标准曲线计算患者血浆中的因子百分比，其中该标准曲线是通过对于患者样本的特定稀释液而观察到的凝血时间绘制的。在本公开之前，为了最大程度地将少报活性水平或者遗漏抑制剂的存在的可能性降至最低，对患者曲线与标准曲线相比的平行度进行主观评估。在没有抑制剂的情况下，标准曲线和患者曲线彼此平行，患者曲线的斜率(Ps)与标准曲线的斜率(Cs)相似。在具有抑制剂的患者中，凝血时间延长。此外，随着每次随后的稀释，抑制剂的量被稀释，导致随后的稀释液的凝血时间更短。实际上，这使得患者曲线斜率(Ps)小于标准曲线斜率(Cs)，因此它们是非平行线。平行度测定目前是一个主观评估，其导致报告错误增加，并导致潜在的抑制剂评估遗漏和潜在的不必要的抑制剂测试。
技术实现思路
本文公开了解决本领域的缺点的方法，并且可以提供众多的额外或替代优点，例如提供评价平行度的主观的自动化工具，以作为增加的因子VIII抑制剂存在评价的筛选工具。本专利技术的某些实施方案包括确定患者样本中是否存在因子VIII抑制剂的方法。该方法包括以下步骤：生成与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线；生成与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，并比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值，其中小于0.45的Ps/Cs平行度比值表明患者样本中存在因子VIII抑制剂。该方法还包括通过绘制患者样本和对照样本的一系列稀释液的凝血时间点与FVIII凝血活性的曲线，从而生成Ps曲线和Cs曲线。利用与凝血检测机进行电子通信的微处理器确定Ps/Cs平行度比值。在某些实施方案中，该方法进一步包括确定Ps/Cs平行度比值小于0.45，并向患者施用用于治疗与因子VIII抑制剂的存在相关的病症的至少一种药剂。在某些实施方案中，该病症是血友病A。在某些实施方案中，该病症是自身免疫性疾病。在某些实施方案中，该药剂是以下药剂中的一种或多种：人因子VIII、猪因子VIII和FVIII旁路剂。在某些实施方案中，该方法还包括由微处理器产生输出，该输出能够由人类用户通过视觉或听觉感知，或者该输出能够为计算机可读的数字信息，其中输出包括指标Ps/Cs比。本专利技术的某些实施方案包括确定患者体液中凝血抑制剂的存在的方法。该方法包括以下步骤：通过生成与患者样本相关并且具有患者斜率(Ps)的患者曲线、并生成与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，从而检测患者样本中是否存在凝血抑制剂(CS)。Ps曲线和Cs曲线是通过绘制患者样本和对照样本的一系列稀释液的多个凝血时间点与凝血活性的活性而生成的。该方法包括比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值的步骤，其中Ps/Cs平行度比值小于预定比值表明患者样本中存在凝血抑制剂。在某些实施方案中，预定比值为约0.45。在某些实施方案中，凝血抑制剂是达比加群。在某些实施方案中，凝血抑制剂是因子VIII抑制剂。在某些实施方案中，凝血剂是哺乳动物因子VIII。本专利技术的某些实施方案包括确定患者的体液中抗凝化合物的存在，并对该患者进行治疗的方法。该方法包括获得患者体液样本的步骤；检测患者样本中是否存在抗凝化合物；并且当Ps/Cs平行度比值小于预定比值时，向患者施用有效量的凝血剂。Ps/Cs平行度比值通过以下方式确定：生成与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线；生成与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，其中Ps和Cs曲线是通过绘制患者样本和对照样本的一系列稀释液的多个凝血时间点与凝血活性的曲线而生成的；并且比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值。在某些实施方案中，预定比值为约0.45。在某些实施方案中，抗凝化合物是因子VIII抑制剂。在某些实施方案中，凝血剂是哺乳动物因子VIII。在某些实施方案中，抗凝化合物是达比加群。在某些实施方案中，抗凝化合物是利伐沙班。从下面结合附图的详细描述可以清楚本公开的许多其他方面、特征和益处。本文所述的检测和治疗方法可以包括取决于所需预防和治疗目的的本文所述的化合物、其他组分或成分。应当进一步理解，上述一般描述和以下详细描述都是示例性和说明性的，并且旨在提供对所要求保护的本专利技术的进一步说明。附图说明通过参考以下附图来更好地理解本公开，这些附图说明了本公开内容的某些原理。图1是通过对从没有抑制剂的患者得到的生物样本进行分析而获得的具有平行曲线的平行度曲线的实例。图2是通过对从具有抑制剂的患者得到的生物样本进行分析而获得的具有非平行曲线的平行度曲线的实例。图3是根据实施方案生成的钟形曲线的实例。具体实施方式现在将参考附图中所示的示例性实施方案，并且本文中将使用具体语言来描述这些示例性实施方案。然而，应当理解，在此不意图限制本专利技术的范围。本文所示的专利技术特征的变化和进一步的修改以及本文中所示的本专利技术的原理的另外的应用被认为是在本专利技术的范围内的，并且这些原理和应用对于相关领域的技术人员是显而易见的。为了解释本说明书，以下定义将适用，并且适当时，单数使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。如果以下列出的任何定义与通过引用并入本文的任何文献相冲突，以下列定义为准。如在本说明书和所附权利要求书中所使用的，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一”，“一个”和“该”包括复数形式。因此，例如，提及“一种蛋白质”或“一种抗体”分别包括多种蛋白质或多种抗体；提及“一个细胞”时包括细胞的混合物等。样本是指来自患者或健康个体的体液或作为本文公开方法的对照物的液体样本。样本的非限制性实例包括血液、血浆、血清、血液提取物或其他血液制品。预定比值是指针对本专利技术的特定实施方案标准化的平行度比值，并且在许多情况下通过标准化试剂、反应条件和仪器来评估样本从而确定。本文的公开内容涉及用于鉴定患者样本中的凝血抑制剂的改进的自动化方法，所述凝血抑制剂特别为因子VIII(FVIII)抑制剂。因此，本公开提供了用于确定患者样本是否含有FVIII抑制剂的方法和系统，并且因此可用于诊断、或辅助诊断与FVIII抑制相关的个体的疾病或其他状况。简而言之，因子VIII是众所周知的具有约0.0007μmol/L的非常低的正常血浆浓度的凝血因子。它以大量不同的片段种类在与血管性血友病因子(vonWillebrandfactor)紧密相关的复合物中作为无活性血浆蛋白循环。血液中的因子VIII的激活通常发生在对血管损伤的应答时。激活包括FVIII在其A1区和A2区之间断裂，产生不稳定的异源三聚体因子VIIIa分子。因子VIIIa与因子IX相互作用，后续的充分表征的一系列反应导致血块形成。本公开部分涉及抑制剂的检测，该抑制剂限制了FVIII参与到最终本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种确定患者样本中因子VIII抑制剂的存在的方法，该方法包括以下步骤：生成与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线；生成与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，以及所述Ps曲线和Cs曲线是通过绘制所述患者样本和所述对照样本的一系列稀释液的多个凝血时间点与FVIII凝血活性的曲线而生成的；比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值，其中Ps/Cs平行度比值小于0.45表示患者样本中存在因子VIII抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.06 US 62/157,7091.一种确定患者样本中因子VIII抑制剂的存在的方法，该方法包括以下步骤：生成与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线；生成与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，以及所述Ps曲线和Cs曲线是通过绘制所述患者样本和所述对照样本的一系列稀释液的多个凝血时间点与FVIII凝血活性的曲线而生成的；比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值，其中Ps/Cs平行度比值小于0.45表示患者样本中存在因子VIII抑制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述Ps/Cs平行度比值由与凝血检测机进行电子通信的微处理器确定。3.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：确定所述比值<0.45，并且向患者施用至少一种用于治疗与因子VIII抑制剂的存在相关的病症的试剂。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述病症是血友病A。5.权利要求3的方法，其中所述病症是自身免疫性疾病。6.权利要求3的方法，其中所述试剂是以下中的一种或多种：人因子VIII、猪因子VIII和FVIII旁路试剂。7.根据权利要求2所述的方法，还包括：由微处理器产生输出，该输出能够由人类用户通过视觉或听觉方式感知，或者该输出能够作为计算机可读的数字信息，其中所述输出包括指标Ps/Cs比值。8.一种确定患者样本中凝血抑制剂的存在的方法，所述方法包括：通过如下方法检测患者样本中凝血抑制剂的存在：产生与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线；产生与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，以及所述Ps曲线和Cs曲线是通过绘...

【专利技术属性】
技术研发人员：马修·史蒂芬·埃文斯，凯里·乔恩·唐纳森，玛莉·伊莱恩·戴伊，迈克尔·H·克里尔，
申请(专利权)人：普雷西恩医药控股有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US