本发明专利技术公开了竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗肾炎或肾纤维化药物中的新应用。竹节参皂苷Ⅳa为太白楤木的提取物，发明专利技术人研究发现竹节参皂苷Ⅳa具有肾保护作用。竹节参皂苷Ⅳa提取方法简单，可抑制TGF‑β1诱导的NRK‑49F细胞的MCP‑1、TNF‑α，IL‑6炎症因子的表达，降低UUO小鼠的肾间质纤维化，可治疗各种原因引起的肾炎及肾纤维化，效果显著。
【技术实现步骤摘要】
竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗肾炎或肾纤维化药物中的应用
本专利技术涉及竹节参皂苷Ⅳa用于预防和治疗肾炎或肾纤维化的新用途。
技术介绍
慢性肾功能衰竭（CRF）已成为影响全球人类健康的重大疾病之一。肾间质纤维化是CRF的中医病理特征之一。如何利用药物干预肾间质纤维化的发展是防治CRF的关键。肾纤维化是CRF的必经途径，各种肾脏疾病发展至终末期肾脏病的共同通路。目前认为，终末期肾脏病的病理改变是不可逆的，因此，控制肾纤维化的发生发展至关重要。肾纤维化的发病机制极其复杂，是多环节、多因素间相互作用的缓慢过程，主要机制包括：炎症反应、氧化应激、细胞凋亡、肌成纤维细胞的活化与增殖、细胞外基质的合成与降解失衡等。目前临床上对于肾纤维化的治疗主要包括：原发病的治疗(如梗阻性肾病等)、相关危险因素的消除和干预(如感染、药物等)及针对发病机制的治疗(如非甾体类抗炎药物、降压药物)。尽管上述治疗方法能够对肾纤维化起到一定的治疗作用，但并不能完全阻止慢性肾病向终末期逐渐进展。由于纤维化疾病的发病机制复杂、涉及因素多，为此需要寻找一种能对抗肾炎和肾纤维化的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供竹节参皂苷Ⅳa的新用途，该新用途是竹节参皂苷Ⅳa用于制备治疗肾炎或肾纤维化的药物。本专利技术实现过程如下：如下结构式（I）所示的竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗肾炎或肾纤维化药物中的应用，（I）。上述的治疗肾纤维化药物可以是常规的胶囊剂、片剂或丸剂。上述的竹节参皂苷Ⅳa通过以下方法制备得到：（1）20kg太白楤木药粉加入质量体积比10倍量80%乙醇，在80℃下回流提取60min，回流提取3次，过滤、合并，浓缩回收乙醇得粗浸膏；（2）将步骤（1）的粗浸膏用蒸馏水分散，分别用3倍体积的氯仿萃取除去脂溶性杂质，再用3倍体积的水饱和的正丁醇萃取3次，合并3次萃取液，60℃下减压回收，在60℃水浴上蒸干；（3）将步骤（2）得到的正丁醇萃取物利用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、ODS反相柱色谱、Lobar柱色谱和反相HPLC制备手段进行分离，得到竹节参皂苷Ⅳa；（4）太白楤木皂苷分子量较大，结构较为复杂。利用1DNMR(1H和13CNMR)、2DNMR(DQCOSY、TOCSY、HMQC、HMBC、NOESY和ROESY)和MS(ESI-MS)等波谱技术对分离得到的皂苷成分进行结构解析，并结合化学手段（酸水解、碱水解、酶解、甲基化和乙酰化等）确定了其平面及立体化学结构。太白楤木(AraliataibaiensisZ.Z.WangetH.C.Zheng)特产于我国中西部秦巴山区及其余脉，其主要化学成分为三萜皂苷，苷元为齐墩果酸，主要以成苷的形式存在。竹节参皂苷Ⅳa为太白楤木的提取物，专利技术人经过研究，意外发现竹节参皂苷Ⅳa具有肾保护作用。竹节参皂苷Ⅳa提取方法简单，可抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞的MCP-1、TNF-α，IL-6炎症因子的表达，降低UUO小鼠的肾间质纤维化，治疗各种原因引起的肾炎及肾纤维化，效果显著。附图说明图1为各组动物肾功能指标的柱状图；图2为各组动物肾功能指标的柱状图；图3为各组动物的肾组织HE染色切片的显微照片，包括假手术组，模型组，低剂量组，中剂量组，高剂量组；图4为各组动物的肾组织Masson染色切片的显微照片，包括假手术组，模型组，低剂量组，中剂量组，高剂量组；图5为TGF-β1诱导的NRK-49F细胞的MCP-1、TNF-α，IL-6炎症因子的表达水平的柱状图。具体实施方式实施例1(制备竹节参皂苷Ⅳa)取20kg太白楤木加入10倍量体积浓度为80％乙醇回流提取3次，在80℃下回流提取60min，60℃减压浓缩至相对密度为1.01-1.05太白楤木粗提物；将粗提物用蒸馏水分散，分别用氯仿1:3(v/v)萃取除去脂溶性杂质，用水饱和的正丁醇萃取3次(1:3,v/v)，合并3次萃取液，用旋转蒸发仪在60℃下减压回收，在60℃水浴上蒸干。正丁醇萃取物利用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、ODS反相柱色谱、Lobar柱色谱和反相HPLC制备等手段进行分离。利用1DNMR(1H和13CNMR)、2DNMR(DQCOSY、TOCSY、HMQC、HMBC、NOESY和ROESY)和MS(ESI-MS)等波谱技术对分离得到的皂苷成分进行结构解析，并结合化学手段（酸水解、碱水解、酶解、甲基化和乙酰化等）确定了其平面及立体化学结构，得到化合物竹节参皂苷Ⅳa。实施例2(胶囊剂)称量实施例1制备的竹节参皂苷Ⅳa粉末10mg，淀粉50-100mg,微晶纤维素50-70mg，内加糊精70mg，乳糖70mg，羧甲基纤维素钠7mg，过60目筛，混合均匀，用85％乙醇为润湿剂制软材，过40目筛，60℃烘箱干燥5h，40目筛整粒，60目筛筛去细粉，即得40-60目颗粒。颗粒的临界相对湿度在78％以下，选择1号胶囊（0.50ml）进行填充，即得。实施例3(片剂)采用湿法制粒的工艺，称量实施例1制备的竹节参皂苷Ⅳa粉末，乳糖，微晶纤维素，羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁的质量比为：10：25:83:6:0.8。将竹节参皂苷Ⅳa粉末过100目筛，将乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁分别过60目筛，得到的均匀粉末分别置洁净容器中。75％乙醇制软才，软才用18-24目筛制粒，颗粒置60℃干燥2-4h，18-24目筛整粒，外加微粉硅胶及硬脂酸镁混匀，压片，即得片芯。实施例4(丸剂)筛选的处方为：药物：基质质量比为1：150，PEG4000:PEG6000质量比为2︰1，料温85℃，滴距5cm，冷却温度10℃，冷凝液为植物油。按处方量精密称取实施例1制备的竹节参皂苷Ⅳa于适量纯化水中，溶解后，加入PEG4000和PEG6000的混合物，置于80℃以上的磁力搅拌器水浴锅中，加热搅拌至全部熔融后，两者混合均匀。用滴管滴入滴丸装置中，控制合适的滴速，使其沉降于冷凝液中，待其冷却成型，取出滴丸，用滤纸除去冷却剂，自然晾干，选丸。即得。实施例5(效果实验)野生型、雄性C57BL/6，18-20g，适应性喂养一周，随机分为假手术组，模型组，低剂量组，中剂量组，高剂量组，每组均8只大鼠。除假手术组外，其余四组行左侧输尿管结扎术(UUO)构造肾纤维化模型。术前禁食12h，不禁水，以3.5%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉后，俯卧位固定于手术板上，背部右肋下备皮，常规碘伏消毒手术野皮肤，脊柱右侧旁开0.5cm，沿肋缘下行纵行切口，逐层切开皮肤肌肉，暴露并分离右侧输尿管，用4-0缝线行两次结扎，观察手术视野无出血现象，逐层缝合皮下组织及皮肤。假手术组仅游离输尿管，不结扎，其余手术操作相同。竹节参皂苷Ⅳa干预组术后半小时开始给予竹节参皂苷Ⅳa10 mg/kg/d、20 mg/kg/d和40 mg/kg/d灌胃，连续14天。假手术及模型组给予等体积溶剂灌胃，各组小鼠分别按要求于术后第14天处死。造模成功后第14天，处死各组小鼠，分别收集双侧肾组织样本。以3.5%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉小鼠后固定。使用采血针颈动脉采血，每次1ml，离心后备用。腹部正中线位置逐层剖开胸腔、腹腔，暴露心脏及双侧肾脏。眼科剪侧剪开右心房，灌注针穿入左心室并固定，用预本文档来自技高网...
【技术保护点】
结构式（I）所示的竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗肾炎或肾纤维化药物中的应用，
【技术特征摘要】
1.结构式（I）所示的竹节参皂苷Ⅳa在制备治疗肾炎或肾纤维化药物中的应用，（I）。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的治疗肾纤维化药物是常规的胶囊剂、片剂或丸剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述的竹节参皂苷Ⅳa由以下方法制得：（1）20kg太白楤木药粉加入质量体积比10倍量80%乙醇，在80℃下回流提取60min，回流提取3次，过滤、合...
【专利技术属性】
技术研发人员：窦芳，文爱东，丁一，顾向锋，许航，刘文星，刘天龙，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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