本发明专利技术提供一种竹节参总皂苷在制备预防及治疗肝脏衰老的药物上的应用。竹节参总皂苷在制备预防及治疗肝脏衰老表现在随着年龄的增长，降低IL‑1β、TNF‑α蛋白和IL‑1β、IL‑6、1L‑12、IL‑17α、TNF‑α、IFN‑γmRNA的表达。所述的竹节参总皂苷包括人参皂苷Re、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV、竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷2。本发明专利技术的竹节参总皂苷对自然衰老大鼠肝脏有保护作用，可能与其对抗肝脏炎症有关。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供一种竹节参总皂苷在制药中的应用，具体为制备预防及治疗肝脏衰老的药物上的应用。
技术介绍
衰老是生物体普遍的生理现象，是一个及其复杂和多因子的过程，以许多器官渐进的退行性变化为其主要特征。研究显示随着衰老的进行体内稳态并不能良好维持，而肝脏是最容易受到影响的器官之一。在人和实验动物肝脏中，与衰老相关的形态学和功能学的变化包括肝血流量，脂质积累，储存脂肪和产生细胞外基质的肝星状细胞的减少、肿胀以及炎性因子的增加。慢性炎症已经被提议作为潜在的衰老以及与衰老相关的疾病的主要分子机制，炎症细胞因子在肝脏疾病中的作用受到密切关注。其中包括Th1类炎症因子：IL-1β、IL-12、IL-6、TNF-α、IFN-γ和Th17类炎症因子：IL-17α，这些炎症因子直接反映了肝脏内的炎症状态。竹节参为五加科人参属植物竹节参Panaxjaponicas C.A.Mey的干燥呈竹鞭状根茎，具有滋补强壮、散瘀止痛、止血祛痰的功效。竹节参总皂苷是从竹节参块根中提取分离而得，是竹节参的主要活性成分之一。竹节参总皂苷(total saponins ofPanax japonicas，TSPJ)包括人参皂苷Re、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV、竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷2等，多以齐墩果烷型五环三萜为主，达玛烷型四环三萜(原人参二醇、原人参三醇型)相对较少。现代药理学研究显示，竹节参总皂苷具有抗炎、抗肿瘤、降血脂等多种药理活性。前期研究显示，竹节参总皂苷可以保护异烟肼、利福平、酒精以及四氯化碳所致的小鼠肝损伤，竹节参对D-半乳糖所致的衰老具有保护效应。基于此，本研究建立大鼠自然衰老模型，初步探讨竹节参总皂苷对自然衰老大鼠肝脏炎症的干预作用。
技术实现思路
本专利技术提供一种探讨竹节参总皂苷干预自然衰老大鼠肝脏炎症作用的实验研究。以自然衰老大鼠为对象，将SPF级SD大鼠按月龄分为3月龄组(3M组)、9月龄组(9M组)、15月龄组(15M组)、24月龄组(24M组)、及24月龄的竹节参总皂苷(TSPJ)低、中、高剂量组，每组12只大鼠。TSPJ低、中、高剂量组的大鼠从18M开始，分别给予竹节参总皂苷10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg灌胃至24个月，每周停药一天，连续6个月。
采用HE染色观察病理形态学变化，肝脏生化指标检测，Western Blotting检测肝脏白介素1-β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的蛋白表达，RT-PCR检测肝脏IL-1β、白介素-6(IL-6)、白介素-12(1L-12)、白介素17α(IL-17α)、TNF-α、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA的表达。随着大鼠年龄的逐渐增长，HE染色观察发现肝组织中肝索及肝血窦的排列紊乱加重，脂肪空泡和炎症细胞增多，血清ALT、胆固醇、甘油三酯明显增高，TSPJ(10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg)各剂量组均能在一定程度上改善其病变情况，恢复肝功能，降低血糖血脂；IL-1β、TNF-α蛋白和IL-1β、IL-6、1L-12、IL-17α、TNF-α、IFN-γmRNA的表达随着年龄的增长逐渐升高，TSPJ各剂量组均在一定程度上的降低其表达。竹节参总皂苷对自然衰老大鼠肝脏有保护作用，与其对抗肝脏炎症有关。因此本专利技术提供一种竹节参总皂苷在制备预防及治疗肝脏衰老的药物上的应用。所述的竹节参总皂苷包括人参皂苷Re、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV、竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷2。附图说明图1为不同年龄段及不同处理的大鼠肝脏图。图2为不同年龄段及不同处理的大鼠肝脏重量图。图3为TSPJ对自然衰老大鼠肝脏HE染色的影响。图4为TSPJ对自然衰老大鼠肝脏IL-1β、TNF-α蛋白表达的影响。图5为TSPJ对自然衰老大鼠炎症因子基因的影响。具体实施方式实施例1实验动物SPF级雄性SD大鼠，购自三峡大学实验动物中心，动物分笼饲养于空调室内，室温(22±2)℃，湿度(60±5)％，喂标准颗粒饲料，自由饮水和摄食。实验药物和试剂竹节参的块根购于湖北省恩施椿木营竹节参种植基地，经湖北省天然产物研究与开发重点实验室邹坤教授鉴定其为五加科人参属植物竹节参Panaxjaponicas C.A.Mey。竹节参总皂苷(total saponins ofP.japonicas，TSPJ)是由本研究团队提取分离，其提取分离方法参照前期研究方法(袁丁,张长城,何毓敏,王洪武,胡远浪,孙志伟,赵海霞,李玉洲.一种竹节参皂苷和多糖的提取分离方法[P].湖北：CN101838338A,2010-09-22.)；总RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒和PCR扩增试剂盒，大连宝生物科技有限公司；PCR引物，生工生物工程(上海)股份有限公司；羊抗β-actin、白介素-1β(IL-1β),兔抗肿瘤坏死因
子-α(TNF-α)抗体，美国Santa Cruz公司，批号依次为：sc-4778，sc-13968，sc-1351。羊抗兔及兔抗羊IgG-HRP，武汉科瑞有限公司；化学发光剂ECL，碧云天生物技术研究所。仪器AL104型电子分析天平(梅特勒-托利多国际贸易有限公司)；TP1020脱水机(Leica公司)；ZB-J0020样品旋转浸透器(北京中兴百瑞技术有限公司)；ULTRACUTR型超薄切片机(奥地利莱卡公司)；CS-V1型摊片烤片机(孝感市宏业医用仪器有限公司)；DMIRB荧光倒置生物显微镜(德国Leica公司)；CT15RT高速冷冻离心机(上海天美生化仪器设备工程有限公司)；HH.S21-6-S恒温水浴锅(上海新苗医疗器械制造有限公司)；WD-9405D脱色摇床(北京市六一仪器厂)；DYY-6C电泳仪(北京市六一仪器厂)；902PCR扩增仪(新加坡AB Applied Biosystems)；Gene Genius凝胶分析系统(美国SYNGNE公司)。方法 分组和给药不同时间点购买3M大鼠，在三峡大学实验动物中心常规喂养至不同月龄进行实验。其中3M大鼠12只、9M大鼠12只、15M大鼠12只、18M大鼠48只，将18M大鼠分为4组，每组12只，分别是衰老对照组，竹节参总皂苷(TSPJ)低、中、高剂量组。18M衰老对照组每天灌胃生理盐水，每周灌六天停一天至24个月；TSPJ低、中、高剂量组分别给与竹节参总皂苷10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg灌胃至24个月，每周灌六天停一天。实验前12小时禁食，饮水不限制。实验过程、实验研究均遵循中国实验动物学会动物伦理委员会制定的指导原则和要求。血清生化指标测定：全自动生化仪测定肝脏HE染色大鼠处死后，完整取出肝脏组织，称重后用0.9％氯化钠注射液冲洗，予滤纸尽量沾干，快速切取肝中叶标本，置入4％多聚甲醛中固定，统一进行脱水，石蜡包埋、切片，按标准操作进行HE染色，光镜下观察结果。肝脏电镜观察取新鲜大鼠肝组织，放入装有预冷的生理盐水的玻璃培养皿中，经漂洗，除去肝脏表面血液，用手术刀片迅速在肝右页距边缘1cm处，切取两块肝组织，大小为1×1×1mm，迅速放入装有3％戊二醛固定液的玻璃小瓶中，4℃固定，于12h内送至三峡大学医学院电镜室做进一步处理，制作成电镜观察标本，在H-7500型投射电镜(日立公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种竹节参总皂苷在制备预防及治疗肝脏衰老的药物上的应用。
【技术特征摘要】
1.一种竹节参总皂苷在制备预防及治疗肝脏衰老的药物上的应用。2.权利要求1所述的应用，其特征在于，竹节参总皂苷在制备预防及治疗肝脏衰老表现在随着年龄的增长，降低IL-1β、TNF-α蛋白和IL-1β、IL...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁丁，张长城，刘朝奇，王婷，周志勇，顿耀艳，赵海霞，何毓敏，向婷婷，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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