原位生物定向分离培养植物根际促生菌的装置及方法制造方法及图纸

本发明专利技术提供了一种原位生物定向分离培养植物根际促生菌的装置及方法。本发明专利技术的方法包括：提供微孔板；高温高压灭菌微孔板、固体培养基和微孔滤膜；无菌水稀释根际土样品，得稀释液；将稀释液和经过高温高压灭菌后温度降低至55‑45℃的培养基迅速混合均匀，将微孔板浸没；在无菌环境中，待培养基凝固后取出，将灭菌滤膜覆盖在微孔板微孔区域两侧，再以两块微孔板将浸没过培养基的微孔板夹在中间，固定，放到植物根附近培养；在无菌环境中，取出培养后的微孔板微孔中的固体培养基柱、切碎，涂布观察、检查验纯；对培养物以液体培养基扩繁、保菌和分类鉴定。本发明专利技术的技术可分离获得大量针对既定植物的根际促生菌。

Device and method for in situ biological directional isolation and cultivation of plant growth promoting rhizosphere bacteria

The invention provides a device and a method for in situ biological directional isolation and cultivation of plant growth promoting rhizosphere bacteria. The methods of the invention include: providing microporous plate, microporous plate, solid medium and microporous filter membrane for high temperature and high pressure sterilization; diluting the sample of Rhizosphere Soil by aseptic water and obtaining the diluent; the medium of diluent and temperature after sterilization by high temperature and high pressure is rapidly mixed and evenly mixed, and the microplates are soaked in a sterile environment. After the medium is solidified, the sterilization filter film is covered on both sides of the microporous plate area, and then the microporous plates of the submerged medium are sandwiched in the middle with two microporous plates, fixed, and cultured near the root of plant. In the aseptic environment, the solid culture base column in the micropore of the microporous plate is removed, the cutting, the coating observation, and the coating are taken out. Inspection and purification; liquid culture medium for propagation, preservation and classification of culture. The technology of the invention can be separated to obtain a large number of rhizosphere growth promoting bacteria for the established plants.

【技术实现步骤摘要】
原位生物定向分离培养植物根际促生菌的装置及方法
本专利技术是关于一种筛选植物根际促生菌的装置及方法，具体地说，是关于一种原位生物定向高通量分离培养植物根际促生菌的装置，以及利用该装置筛选植物根际促生菌的方法。本专利技术涉及农业环境和资源微生物

技术介绍
微生物在生物地球化学循环中的作用举足轻重。分离培养微生物是认识其多样性并加以利用的最基础和最主要的方式。目前，微生物分离培养的常规方法为涂布划线分离纯化、培养。但是，自然环境中大多数的微生物以此方法不能获得纯培养物。现在，科学研究中也采用了一些其它方法来获得传统涂布划线方法难以获得一些细菌，如利用流式细胞仪分选、微囊包埋等可以获得；但这些方法普遍存在需要特殊设备、成本高、不宜操作等缺点，未能被广泛使用。植物根际促生菌(plantgrowth-promotingrhizobacteria，PGPR)是指在植物根际或根面和根内存在的可以促进植物生长的细菌的总称。现在普遍利用固氮和溶磷选择性培养基、以传统涂布划线进行PGPR的分离培养。这样揭示出的PGPR多样性非常有限，比基于分子生物学方法揭示的多样性要低很多。这就意味着有非常多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种原位生物定向分离培养植物根际促生菌的方法，该方法包括步骤：(1)制备微孔板；所述微孔板为设置微孔区的基板，微孔区设有多个贯穿基板的微孔；(2)微孔包含单细胞：高温高压灭菌微孔板、固体培养基和微孔滤膜；无菌水稀释根际土样品，得稀释液；在无菌环境中，将稀释液和经过高温高压灭菌后温度降低至55‑45℃的培养基混合均匀，将微孔板浸没入；(3)微孔板封闭和培养：在无菌环境中，待培养基凝固后取出，将灭菌滤膜覆盖在微孔板微孔区域两侧，再以两块微孔板将浸没过培养基的微孔板夹在中间，固定，得三块一体的微孔板，将该三块一体的微孔板放到植物根附近培养；(4)微孔内微生物的涂布划线分离：在无菌环境中，取出培养后的...

【技术特征摘要】
1.一种原位生物定向分离培养植物根际促生菌的方法，该方法包括步骤：(1)制备微孔板；所述微孔板为设置微孔区的基板，微孔区设有多个贯穿基板的微孔；(2)微孔包含单细胞：高温高压灭菌微孔板、固体培养基和微孔滤膜；无菌水稀释根际土样品，得稀释液；在无菌环境中，将稀释液和经过高温高压灭菌后温度降低至55-45℃的培养基混合均匀，将微孔板浸没入；(3)微孔板封闭和培养：在无菌环境中，待培养基凝固后取出，将灭菌滤膜覆盖在微孔板微孔区域两侧，再以两块微孔板将浸没过培养基的微孔板夹在中间，固定，得三块一体的微孔板，将该三块一体的微孔板放到植物根附近培养；(4)微孔内微生物的涂布划线分离：在无菌环境中，取出培养后的微孔板微孔中的固体培养基柱、切碎，涂布观察、检查验纯；对培养物以液体培养基扩繁、保菌和分类鉴定。2.根据权利要求1所述的方法，该方法还包括步骤：(5)具多种促生属性分离物确定：将步骤(4)中得到的纯培养物分别涂布于固氮、溶磷和溶钾培养基中培养；观察是否能生长和/或其生长速率；在某种培养基上可以生长的判断为该菌种具有相应促生属性，生长较迅速的判断为该菌具有较强的相应促生能力的植物根际促生菌；优选地，进一步分析具有固氮和溶磷能力菌种的产激素能力和/或产ACC脱氨酶能力，确定是否具多种促生属性。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤(1)中，所述微孔板基板厚度为2～4mm，微孔体积15～30μL；优选地，微孔直径为1～3mm。4.根据权利要求1或2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯福应，贾丽娟，张凯帅，唐凯，梁允刚，王宇，袁博，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15