一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法技术

本发明专利技术公开了一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法，是取木芙蓉腋芽作为外植体，进行表面消毒；然后将消毒后的外植体置于愈伤组织诱导培养基上，进行培养获得愈伤组织；再进行细胞预培养、细胞悬浮培养和细胞继代培养，获得大量的悬浮培养细胞。本发明专利技术通过对木芙蓉进行细胞的悬浮培养，可实现大规模快速生产出有效成分含量高的木芙蓉细胞培养物，为木芙蓉细胞悬浮培养生产次生代谢产物奠定了良好的基础。

A suspension culture method of Hibiscus cell

The invention discloses a suspension culture method of Hibiscus Hibiscus cells, which is to take the axillary bud of Hibiscus Hibiscus as an explant to sterilize the surface. Then the explant after the disinfection is placed on the callus induction medium for culture to obtain callus, and then cell preculture, fine cell suspension culture and cell subculture are obtained. A large number of suspension cultures were obtained. By suspension culture of Hibiscus Hibiscus cell, the culture of Hibiscus Hibiscus cells with high content of effective components can be produced on a large scale. It lays a good foundation for the suspension culture of Hibiscus cells to produce secondary metabolites.

【技术实现步骤摘要】
一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法(一)
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法。(二)
技术介绍
木芙蓉(HibiscusmutabilisLinn.)是锦葵科木槿属多年生小乔木或落叶灌木。在我国南北都有栽培分布。木芙蓉既是重要的观赏园林花卉，同时更是一种重要的药用植物，木芙蓉的叶、花、根均可入药，具有重要医药价值。木芙蓉细胞组织内含有富含黄酮酣、金丝桃甙、菊糖甙、酚类、还原糖等药物成分，木芙蓉有清热解毒，消肿排脓，凉血止血和调经止血作用。研究表明，木芙蓉的醇浸出物对金黄色葡萄球菌，溶血性链球菌有较强的抑制作用，对木芙蓉的各种细胞次生代谢物的开发也愈加重视。目前木芙蓉人工种植主要采用扦插繁殖，木芙蓉容易遭受病毒的侵染而在扦插繁殖中又易传播病毒，从而使优良性状的遗传资源得不到保护，细胞次生代谢活性物质产量也无法得到保证，而种子繁殖生产周期又很长，最重要的是受季节变化和耕地逐渐减少的影响，导致无法满足木芙蓉的市场需求。因此迫切需要找到一种能安全、快速而大量生产木芙蓉细胞培养物的途径和方法。而采用组织培养技术不仅能解决木芙蓉品种的繁殖变异问题，还可以通过细胞培养大量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法，其特征在于包括如下步骤：(1)无菌外植体的获取：选取生长健康、无病虫害的木芙蓉腋芽作为外植体，用自来水冲洗30～60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2～5min，用无菌水冲净，在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用质量浓度0.1％HgCl2消毒液浸泡8～12min，再用无菌水冲洗3～5遍，在灭菌的滤纸上吸干水分；(2)木芙蓉愈伤组织的诱导培养：将消毒后的腋芽接入愈伤组织诱导培养基中，先在23～28℃下，暗培养10～15天，然后每天光照8～12小时、光照强度为1000～1500lx的条件下进行培养，所述的愈伤组织诱导培...

【技术特征摘要】
1.一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法，其特征在于包括如下步骤：(1)无菌外植体的获取：选取生长健康、无病虫害的木芙蓉腋芽作为外植体，用自来水冲洗30～60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2～5min，用无菌水冲净，在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用质量浓度0.1％HgCl2消毒液浸泡8～12min，再用无菌水冲洗3～5遍，在灭菌的滤纸上吸干水分；(2)木芙蓉愈伤组织的诱导培养：将消毒后的腋芽接入愈伤组织诱导培养基中，先在23～28℃下，暗培养10～15天，然后每天光照8～12小时、光照强度为1000～1500lx的条件下进行培养，所述的愈伤组织诱导培养基为添加KT(即6-糠基氨基嘌呤)0.1～0.5mg/L、6-BA(即6-苄氨基腺嘌呤)0.1～1.0mg/L、2，4-D(即2,4-二氯苯氧基乙酸)1.0～3.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6.0g/L的MS固体基本培养基,培养基的pH值为5.8；(3)细胞的预培养：将步骤(2)中获得的无褐化的黄白色愈伤组织转接入预培养液体培养基中进行5～9天的预培养，所述的预培养液体培养基为添加KT0.1～0.5mg/L、6-BA0.5～1.5mg/L、2，4-D1.0～4.0mg/L、蔗糖30g/L的MS液体基本培养基,培养基的pH值为5.8；(4)细胞的悬浮培养：选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的木芙蓉单个细胞或疏松...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军，谢丹，
申请(专利权)人：杭州纽贝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33