一种超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法，所述有效成分为精油，其中包括对提取温度、压力、物料粒径三个因素的优化，三个因素对精油提取率均有显著的影响。所述柴胡疏肝散精油提取优化工艺，通过对提取率方程的优化拟合，得到相关系数很高的拟合方程，对以后类似提取方法精油产率的计算具有很大的促进作用。所述精油提取物具有很好的抗炎活性作用。

A supercritical CO2 extraction method for effective components in Chaihu Shugan powder

The invention relates to a method of supercritical CO2 extraction of effective components of Chaihu Shugan powder. The effective component is essential oil, including the optimization of three factors: extraction temperature, pressure and material particle size. Three factors have significant influence on the extraction rate of essential oil. The optimum extraction process of essential oil from Chaihu Shugan powder is obtained. By optimizing the extraction rate equation, the fitting equation with high correlation coefficient is obtained, which has a great effect on the calculation of the yield of essential oil after the similar extraction method. The essential oil extract has good anti-inflammatory activity.

【技术实现步骤摘要】
一种超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法
本专利技术属于中草药的提取
，具体地，涉及一种超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法。
技术介绍
柴胡疏肝散，中医方剂名，出自《景岳全书》，原方用于治疗“胁肋疼痛、寒热往来”，其临床疗效显著，应用范围较广，是疏肝解郁的良方，由陈皮、柴胡、川芎、香附、枳壳、芍药、甘草组成。具有疏肝理气，活血止痛之功效。主治肝气郁滞证。胁肋疼痛，胸闷善太息，情志抑郁易怒，或嗳气，脘腹胀满，脉弦。临床常用于治疗慢性肝炎、慢性胃炎、肋间神经痛等属肝郁气滞者。目前，从中药中提取挥发性/半挥发性生物活性成分的方法有很多，包括水蒸气提取法，有机溶剂萃取，醇提取，超声提取，微波辅助萃取等等。然而，上述方法存在着明显的缺陷，如常大量使用易燃的有机溶剂、工艺步骤繁杂、耗费时间长、易造成热敏性成分的降解和挥发成分的损失以及有机溶剂残留问题。从中药中提取挥发油的传统方法为水蒸汽蒸馏法、有机溶剂萃取法和压榨法，其中以水蒸汽蒸馏法最为常用。传统的提取方法不仅收率很低，而且由于芳香性成分的大量损失及某些成分的分解变化使最终产品质量较差。中药挥发油沸点较低，摩尔质量不大，极性小，在超临界CO2流体中具有良好的溶解性能，因此是一类适于用超临界CO2流体提取的成分。由CO2的压力-密度等温线（对比压力与对比密度的关系线）可知，在稍高于临界点温度的区域内，压力稍有变化，就会引起流体密度的很大变化，且超临界流体的密度接近流体的密度。所以，超临界流体对液体、固体的溶解度与流体溶解度比较接近。超临界流体与待分离组分的化学性质越接近，溶解度越大。在高密度条进下（低温、高压）去萃取溶质组分，然后稍微提高温度或降低压力使萃取剂与溶质分离。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种超临界CO2流体萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法，本专利技术通过采用该工艺方法，能最大程度的提取柴胡疏肝散中的有效成分。本专利技术的超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法中，柴胡疏肝散的组成为：陈皮30g，柴胡22.5g，川芎22.5g，香附22.5g，枳壳22.5g，芍药22.5g，甘草7.5g，共计150g每份。本专利技术的超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的萃取工艺如下：（1）备料：将原料组分于40℃鼓风干燥机干燥5小时，粉碎过20,40,60,80目筛，取筛下物，按比例要求混合颗粒。（2）萃取：采用超临界萃取设备装置，将150g混合的干草药装入1L高压萃取釜中，并用液体CO2萃取精油。萃取温度为：40-60℃，萃取压力为：150-350bar，物料粒径为（取平均粒径）：0.15-0.6mm。萃取时间为2小时。分离器I的温度为40℃，压力为8Mpa；分离器II的温度为35℃，压力为4Mpa．萃取物进入分离器减压分离后，从气态CO2中完全分离。收集分离器流出的精油，即为所需提取物。本专利技术还提供了上述超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法所得有效成分的抗炎制药用途。本专利技术还提供一种采用测定特定细胞因子分析药物抗炎性效果的方法。具体步骤为：通过巨噬细胞抗炎模型实验确定具有抗炎作用的活性成分，其中所述巨噬细胞抗炎模型实验包括：（1）将目标中药组分针对巨噬细胞分别进行细胞毒评估，确定无显著细胞毒的目标中药成分的浓度。（2）将目标巨噬细胞分组培养，每组的培养液中加入一种已确定无显著细胞毒的浓度的目标中药成分以及指定炎症诱导剂，培养结束后，确定各培养液上清液中的IL-6和TNF-α的含量，并根据其含量确定目标中药成分对巨噬细胞的IL-6和TNF-α的抑制率。（3）应用具有抗炎效果的Celebrex代替步骤（2）中的目标中药成分，重复执行步骤（2）部分的操作，确定目标中药成分具有抗炎活性。相较于现有技术，本专利技术提供的超临界CO2萃取柴胡疏肝散精油的最优工艺具有以下有益效果：1、以柴胡疏肝散为原料，本专利技术提供的萃取工艺条件下能够得到最高的精油提取率；2、萃取得到的柴胡疏肝散精油具有一定的优点，其抗炎药效较好，提取率较高，环保。本专利技术方法工艺简单，操作方便，提取率远远高于传统水煮和有机溶剂萃取，且整个工艺对人体无毒，适合药物有效成分的提取。本专利技术方法所制得的复方精油具有较好的抗炎活性。附图说明图1为超临界CO2流体萃取柴胡疏肝散中精油的工艺流程图。图2为精油萃取率预测值和实验值对比图。图3为柴胡疏肝散提取精油细胞活性。图4为Celebrex阳性对照组细胞活性。图5为柴胡疏肝散提取精油细胞IL-6含量。图6为Celebrex阳性对照组细胞IL-6含量。图7为柴胡疏肝散提取精油细胞TNF-α含量。图8为Celebrex阳性对照组细胞TNF-α含量。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例1超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的工艺优化采用响应面方法分析三个因素（提取温度，提取压力和粒度）对EY的影响，其他变量为固定值，如提取时间为120分钟，二氧化碳流量为43.67L/h，CSS粉末重量为150g。为了减少实验次数和降低成本，本实验采用小面中心组合设计（SFCCD）进行实验方案的设计。如表1所示，实验根据SFCCD推荐的15组操作参数进行，包括四个阶乘点，六个轴向点和5个中心点。实验结果采用方差分析方法（AOV）对三个自变量和EY的相互影响进行分析，运用F-值检验法和P-值分析每项系数对响应值的统计显著性，并采用非线性拟合的方法，建立二次多项回归拟合方程，用此统计模型来预测最高产率。超临界CO2萃取装置HA121-50-01，如图1所示，由华安超临界流体萃取有限公司（南通，中国）提供。提取装置主要由一个1升的萃取釜和两个分离器组成。在专利技术中，将150g混合的干草药混合物装入1L高压萃取釜中，并用液体CO2萃取精油。二氧化碳气体在带有冷凝器的压缩泵进行液化，并且通过泵将输出压力增加到所需的压力后进入萃取釜。随后，萃取物和液态CO2进入到分离器I中，解析温度为40℃，压力为8Mpa，通过压力调节CO2的密度和精油的溶解度使萃取物和CO2进行分离。在分离器II中进一步解析，温度为35℃，压力为4Mpa，调节压力低于超临界流体的压力使液态CO2变成气态，液体油从气态CO2中完全分离。分离器II流出气体流入净化器进行循环使用。分离器I和分离器II中每隔六十分钟取一次样，最终产率由多次取样的累积量进行计算。称重后的精油储存于-20℃进行进一步分析。各组实验萃取釜中的温度、压力、物料粒径以及精油萃取率如表1所示：表1各组实验萃取釜中的温度、压力、物料粒径以及精油萃取率分析各变量之间的相互影响是超临界流体萃取研究中的重要一步。初步研究是基于压力（P），温度（T）和粒度（PS）三个独立变量而开展的。由AOV获得的F值和p值用来判断各系数的显著性，其中，F值本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法，其特征在于：所述柴胡疏肝散的组成为：陈皮30g，柴胡22.5g，川芎22.5g，香附22.5g，枳壳22.5g，芍药22.5g，甘草7.5g，共计150g每份；萃取工艺如下：（1）备料：将原料组分于40℃鼓风干燥机干燥5小时，粉碎过20,40,60,80目筛，取筛下物，按比例要求混合颗粒；（2）萃取：采用超临界萃取设备装置，将150g混合的干草药装入1L高压萃取釜中，并用液体CO2萃取精油，萃取温度为：40‑60℃，萃取压力为：150‑350bar，物料粒径为：0.15‑0.6mm，萃取时间为：2小时，分离器I的温度为40℃，压力为8Mpa；分离器II的温度为35℃，压力为4Mpa，萃取物进入分离器减压分离后，从气态CO2中完全分离，收集分离器流出的精油，即得。

【技术特征摘要】
1.一种超临界CO2萃取柴胡疏肝散中有效成分的方法，其特征在于：所述柴胡疏肝散的组成为：陈皮30g，柴胡22.5g，川芎22.5g，香附22.5g，枳壳22.5g，芍药22.5g，甘草7.5g，共计150g每份；萃取工艺如下：（1）备料：将原料组分于40℃鼓风干燥机干燥5小时，粉碎过20,40,60,80目筛，取筛下物，按比例要求混合颗粒；（2）萃取：采用超临界萃取设备装置，将150g混合的干草药装入1L高压萃取釜中，并用液体CO2萃取精油，萃取温度为：40-60℃，萃取压力为：150-350bar，物料粒径为：0.15-0.6mm，萃取时间为：2小时，分离器I的温度为40℃，压力为8Mpa；分离器II的温度为35℃，压力为4Mpa，萃取物进入分离器减压分离后，从气态CO2中完全分离，收集分离器流出的精油，即得。2.根据权利要求1所述的一种超临界CO2萃取...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺敏，杨天标，洪亮，杨智玉，
申请(专利权)人：湘潭大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43