复合佐剂及含有该复合佐剂的疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种免疫复合佐剂及其制备方法，以及该免疫复合佐剂增强疫苗免疫作用的用途。本发明专利技术还涉及包含该免疫复合佐剂的疫苗组合物，以及该疫苗组合物在治疗相关疾病中的用途。

Compound adjuvant and vaccine containing the compound adjuvant

The invention discloses an immune complex adjuvant and a preparation method thereof, and the use of the immune complex adjuvant to enhance the immune function of the vaccine. The invention also relates to a vaccine composition containing the immune complex adjuvant and the use of the vaccine composition in treating related diseases.

【技术实现步骤摘要】
复合佐剂及含有该复合佐剂的疫苗
本专利技术涉及一种复合佐剂及其制备方法。相对于单一佐剂，该复合佐剂诱导Th1型免疫反应漂移，以及该复合佐剂增强针对胞内菌例如结核分枝杆菌等以及病毒的免疫应答。
技术介绍
第一代疫苗一般为减毒活疫苗或灭活全菌体疫苗，这类疫苗免疫原性强，但除了诱导保护性免疫反应外，还诱导免疫病理反应。而今研究的新疫苗主要为保护性抗原或抗原表位，相对于第一代疫苗，这些抗原免疫原性相对较弱，需要佐剂增强其免疫原性。佐剂作为疫苗组成部分增强抗原在体内诱导的免疫应答。蛋白疫苗因其成份清楚，其安全性已得到认可，但由于抗原本身免疫原性较弱，一般需要佐剂(adjuvant)进行辅助。因此，蛋白疫苗一般由佐剂和抗原组成，佐剂与抗原一起注射或将佐剂预先注入机体增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂种类很多，按其成份可分为无机佐剂(如氢氧化铝、明矾等)、有机佐剂(如微生物及其成份，包括卡介苗、短小棒状杆菌、胞壁酰二肽、BCGCpG、卡介菌多糖核酸等)和合成佐剂(如抗菌肽、人工合成的TLR激动剂等)。但批准进入临床研究的佐剂数量非常有限，MF59、AS03、AS04和脂质体是继铝佐剂后批准用于人体的佐剂[MbowML等，CurrOpinImmunol,2010,22:411-416.]。2010年出版的《中华人民共和国药典》第三部记载的预防类疫苗所用佐剂基本为氢氧化铝(国家药典委员会编，《中华人民共和国药典》，P21-132,化学工业出版社，2010)。氢氧化铝是铝佐剂的一种，它主要增强抗原诱导体液免疫应答，而对于胞内菌，例如结核杆菌，机体主要通过细胞免疫应答清除。铝佐剂作为像结核蛋白疫苗这样的胞内菌蛋白疫苗的佐剂，其效果难以达到人们的要求。水油微球通过独特方式增强天然免疫反应。MF59是一种水包油纳米级乳剂，该佐剂与抗原组成的疫苗主要采用肌肉注射免疫，MF59佐剂调节肌肉细胞暂时表达与免疫激活相关的基因和诱导的内源性ATP短暂释放促进细胞募集，迅速募集中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、CD11b+细胞到注射部位形成一个免疫增强微环境，同时募集的抗原提呈细胞摄取抗原并运送到引流淋巴结提呈给T细胞启动获得性免疫反应[SeubertA等,JImmunol,2008,180:5402-5412；VonoM等,ProcNatlAcadSciUSA,2013,110:21095-21100]，MF5为佐剂的疫苗诱导的细胞免疫一般以Th2型免疫为主，表现为血清以IgG1抗体为主、脾细胞中抗原特异的IL-4+IL-13+CD4+T细胞含量升高[CaproniE等,JImmunol,2012,188:3088-3098]。而MF59佐剂人16型乳头瘤病毒高剂量抗原E2腹腔注射则产生Th1型免疫反应漂移和细胞毒活性[HeinemannL等,ViralImmunol,2008,21:225-233]。虽然有实验证明TLR4激动剂E6020、TLR9激动剂CpGODN分别与MF59组成复合佐剂可增强Th1型免疫反应漂移[BaudnerBC,等,PharmRes,2009,26:1477-1485；SinghM,等，HumVaccinImmunother,2012,8:486-890；YangM,等,IntImmunopharmacol,2012,13:408-416]，但也有实验证明MF59与TLR激动剂组合只提高体液免疫反应，如MF59/CpG/HIV多价疫苗只提高体液免疫反应[BurkeB,等,Virology,2009,387:147-156]。GLA-SE与MF59-E6020组成相似，同时辅佐性也很相似，SE作为结核分枝杆菌重组蛋白ID93的佐剂主要诱导Th2型免疫反应，同一蛋白以GLA-SE或GLA-SE/CpG为佐剂诱导Th1型免疫反应和保护性免疫反应，但两者通过不同的信号通路启动天然免疫[BertholetS,等,SciTranslMed,2010,2:53ra74；OrrMT,等,PLoSONE,2014,9:e83884；DesbienAL,等,EurJImmunol,2015,45:407-417；OrrMT,等,EurJImmunol,2013,43:2398-2408]。
技术实现思路
本专利技术涉及以下项：1.一种免疫复合佐剂，其包含去水山梨糖醇三油酸酯、角鲨烯、表面活性剂和热灭活卡介苗(hBCG)或高压匀质破碎BCG。2.项1的复合佐剂，其中所述山梨糖醇三油酸酯的量为0.1％至1％(w/v)。3.项1或2的复合佐剂，其中所述角鲨烯为1-10％(v/v)。4.项1-3任一项的复合佐剂，其中所述表面活性剂为非离子型表面活性剂；优选吐温；更优选吐温80。5.项1-4任一项的复合佐剂，其还包含缓冲液；优选该缓冲液为枸橼酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液；更优选所述缓冲液的浓度为5-10mM，pH为6-7。6.项1-5任一项的复合佐剂，其中所述山梨糖醇三油酸酯的量为0.3％至0.7％；优选0.4-0.6％，更优选0.5％。7.项1-6任一项的复合佐剂，其中所述角鲨烯为3-7％；优选4-6％；更优选5％。8.项1-7任一项的复合佐剂，其中所述表面活性剂的浓度为0.3-0.7％(w/v)；优选0.4-0.6％％；更优选0.5％。9.项1-8任一项的复合佐剂，其中所述热灭活卡介苗(hBCG)或高压匀质破碎BCG的量为5-500μg，更优选25-500μg；更优选50-500μg；更优选50-450μg；更优选50-400μg；更优选50-400μg；更优选50-300μg；最优选50-250μg。10.制备项1-9任一项的复合佐剂的方法，包括1)向缓冲液中加入表面活性剂，搅拌均匀，作为水相；2)称取去水山梨糖醇三油酸酯，加入角鲨烯充分混匀，作为油相；3)向水相中加入油相，并充分混匀；4)充分乳化，形成160-220nm、优选170-210nm、更有选180-200nm的水油微球，除菌后加入热灭活卡介苗(hBCG)或高压匀质破碎BCG。11.项10的方法，其中所述山梨糖醇三油酸酯的量为0.1％至1％(w/v)。12.项10或11的方法，其中所述角鲨烯为1-10％(v/v)。13.项10-12任一项的方法，其中所述表面活性剂为非离子型表面活性剂；优选吐温；更优选吐温80。14.项10-13任一项的方法，其还包含缓冲液；优选该缓冲液为枸橼酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液；更优选该缓冲液的浓度为5-10mM，pH为6-7。15.项10-14任一项的方法，其中所述山梨糖醇三油酸酯的量为0.3％至0.7％；优选0.4-0.6％，更优选0.5％。16.项10-15任一项的方法，其中所述角鲨烯为3-7％；优选4-6％；更优选5％。17.项10-16任一项的方法，其中所述表面活性剂的浓度为0.3-0.7％(w/v)；优选0.4-0.6％％；更优选0.5％。18.项10-17任一项的方法，其中所述热灭活卡介苗(hBCG)或高压匀质破碎BCG的量为5-500μg，更优选25-500μg；更优选50-500μg；更优选50-450μg；更优选50-400μg；更优选50-400μg；更优选50-300μg；最优选50-25本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫复合佐剂，其包含去水山梨糖醇三油酸酯、角鲨烯、表面活性剂和热灭活卡介苗(hBCG)或高压匀质破碎BCG。

【技术特征摘要】
1.一种免疫复合佐剂，其包含去水山梨糖醇三油酸酯、角鲨烯、表面活性剂和热灭活卡介苗(hBCG)或高压匀质破碎BCG。2.权利要求1的复合佐剂，其中所述山梨糖醇三油酸酯的量为0.1％至1％(w/v)。3.权利要求1或2的复合佐剂，其中所述角鲨烯为1-10％(v/v)。4.权利要求1-3任一项的复合佐剂，其中所述表面活性剂为非离子型表面活性剂；优选吐温；更优选吐温80。5.权利要求1-4任一项的复合佐剂，其还包含缓冲液；优选该缓冲液为枸橼酸钠缓冲液；优选该缓冲液的浓度为5-10mM，pH为6-7。6.权利要求1-5任一项的复合佐剂，其中所述山梨糖醇三油酸酯的量为0.3％至0.7％；优选0.4-0.6％，更优选0.5％。7.权利要求1-6的任一项复合佐剂，其中所述角鲨烯为3-7％；优选4-...

【专利技术属性】
技术研发人员：何秀云，黄香玉，庄玉辉，张春青，宋庆德，朱传智，邵进士，李军丽，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三零九医院，
类型：发明
国别省市：北京,11