回收稀有细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种回收稀有细胞的方法。本发明专利技术提供一种能够从含有目标细胞和非目标细胞的待测体中以高纯度回收目标细胞的方法。涉及一种稀有细胞回收方法，包括：通过能够捕获目标稀有细胞的过滤器来过滤含有所述目标稀有细胞和非目标细胞的待测体的步骤；在所述过滤器上对通过过滤步骤被所述过滤器捕获的稀有细胞和非目标细胞中的所述非目标细胞进行标记的步骤；从标记步骤后的过滤器回收含有所述稀有细胞和标记的非目标细胞的溶液，从所述溶液中去除所述标记的非目标细胞，回收含有所述稀有细胞的溶液的步骤；以及从含有所述稀有细胞的溶液中捕获所述稀有细胞的步骤。

Recovery of rare cells

The invention relates to a method for the recovery of rare cells. The present invention provides a method for recovering target cells from a target cell with a target cell and a non target cell in a high purity. Relates to a rare cell recovery method, including: by being able to capture the target rare cell filter to filter the measured body comprising the steps of target rare cells and non target cells; in the filter for filtering through the filter step is to capture rare cells and non target cells in the non the target cells were labeled steps; solution of non target cells containing the rare cells and markers from the filter recovery marking step after the removal of the non target cells from the solution marker, recovering solution containing the rare cell steps; and from the solution containing the rare cells in capture the rare cell steps.

【技术实现步骤摘要】
回收稀有细胞的方法
本公开涉及细胞回收或检测方法、以及回收系统。本公开尤其涉及回收或检测血液中的稀有细胞的方法、以及其中使用的稀有细胞回收系统。
技术介绍
血液中含有红细胞、白细胞和血小板等各种各样的成分。以疾病的早期发现和诊断等为目的，进行着对血液中所含的这些成分的检查。血液中含有血中循环肿瘤细胞/CirculatingTumorCell(CTC)和免疫细胞等稀有细胞，它们是医学上重要的细胞。CTC是从原发肿瘤组织或转移肿瘤组织游离，沿着血流循环的癌细胞(肿瘤细胞)。据信，CTC通过沿着血流循环，运输到其他脏器等，由此引起转移。因此，血液中的CTC由于被认为作为转移性的癌的治疗效果的判定或预后预测的因子有用，因此积极进行CTC的解析。WO2011/108454中公开了如下方法：用过滤器处理血液，使过滤器捕获血液中的稀有细胞(CTC)，对其进行分析。PLOSONE，April2013，Volume8，Issue4，e61770中公开了如下方法：制备含有白细胞和稀有细胞的细胞悬浮液，将该细胞悬浮液中所含的全部细胞在设置了多个孔的观察区域中展开，基于光学拍摄而得到的图像来检测稀有细胞。
技术实现思路
但是，上述的方法中存在如下问题：由于非目标细胞(例如，白细胞)的分离不充分，残留很多非目标细胞，因此目标细胞(例如，稀有细胞)的分析中需要花费很多时间和劳动力。另外，存在如下问题：由于非目标细胞来源的噪音，不能正确得到目标细胞的分析结果。进一步，存在如下问题：在进行稀有细胞的分析时，由于待测体中的稀有细胞的浓度非常稀薄，因此需要处理几ml的待测体，但是在之后的分析中处理少数的细胞时，需要用少量来进行处理。另外，存在如下问题：由于待测体中的稀有细胞的浓度稀薄，因此不能正确得到目标细胞的分析结果。稀有细胞的基因解析中存在需要以高纯度回收少量且不妨碍基因解析的状态的样品的问题。本公开在一个或多个实施方式中，能够提供一种能够从含有目标细胞和非目标细胞的待测体中以高纯度回收目标细胞的方法和其中使用的系统。本公开在一种方式中，涉及一种回收待测体中的稀有细胞的方法：包括：通过能够捕获目标稀有细胞的过滤器来过滤含有所述目标稀有细胞和非目标细胞的待测体的步骤(过滤步骤)；在所述过滤器上对通过过滤步骤被所述过滤器捕获的稀有细胞和非目标细胞中的所述非目标细胞进行标记的步骤(标记步骤)；从标记步骤后的过滤器回收含有所述稀有细胞和标记的非目标细胞的溶液，从所述溶液中去除所述标记的非目标细胞，回收含有所述稀有细胞的溶液的步骤(分离回收步骤)；以及从含有所述稀有细胞的溶液中捕获所述稀有细胞的步骤(捕获步骤)根据本公开，在一个或多个实施方式中，能够提供一种能够从含有目标细胞和非目标细胞的待测体中以高纯度且少量的液量回收目标细胞的方法。即，根据本专利技术，能够以足以进行基因检查的水平的纯度和液量来获得目标细胞。另外，根据本专利技术，在一个或多个实施方式中，能够在不进行核酸精制步骤的情况下，仅通过最少四个步骤(过滤步骤、标记步骤、分离回收步骤和捕获步骤等)，即可得到上述效果。附图说明图1是示出本公开的回收方法的一个实施方式中的动作例的例子的流程图；图2是实施例中使用的细胞捕获/染色装置的结构示意图；图3是实施例中使用的磁分离装置的结构示意图；图4是实施例中使用的介电泳装置的结构示意图；图5是示出实施例的结果(检测稀有细胞和白细胞的结果)的例子的图像；图6是示出实施例的结果(检测EGFR的基因突变的结果)的例子的图表。具体实施方式为了正确分析待测体中的目标细胞，要求从待测体以高纯度回收目标细胞。在一般的细胞的情况下，由于待测体中含有较多的目标细胞，因此通过反复进行纯化步骤，能够提高目标细胞的纯度。然而，在CTC等稀有细胞的情况下，由于血液等的待测体中所含的量非常少(例如，血液8mL中含有数个左右)，除此之外，还含有大量的非目标细胞(例如，白细胞等)。因此，在反复进行纯化步骤的情况下，即使能够去除非目标细胞，也存在稀有细胞损失的风险。因此，在稀有细胞的回收中，不光要求纯度，还要求减少目标稀有细胞的损失。另外，由于稀有细胞的分析通过显微镜等观察或通过PCR等基因解析等来进行，因此，要求纯化步骤后回收的液量为少量。本公开在一个方式中，基于如下见解：通过一系列的流程进行以下至少三个步骤，来从含有目标稀有细胞(以下也称目标细胞)、以及含有比目标细胞多的非目标细胞(例如，白细胞)的待测体回收目标细胞，能够以高纯度且少量回收目标细胞；纯化步骤和浓缩步骤(例如，过滤器过滤步骤)；增加的纯化和增加的浓缩步骤(例如，分离回收步骤和捕获步骤)；以及在全部步骤中的任意步骤中(优选，过滤步骤后)，为了在该步骤之后进行的纯化或浓缩步骤而对细胞进行的标记步骤。这里，本公开的回收方法中，至少包含两次“纯化步骤和浓缩步骤”的步骤对，且也可以含有其他的处理步骤，上述的“全部步骤”是指该回收方法中进行的任何步骤，是指在这样的全部步骤中的任一步骤中进行上述标记处理。即，上述标记处理的实施可以在所述纯化步骤和浓缩步骤中进行，也可以在除此之外的步骤中进行。作为纯化步骤和浓缩步骤，在一个或多个实施方式中，可举出根据利用目标稀有细胞和非目标细胞的物理特性的差异的方法而进行的处理，例如，可举出使用过滤器的物理分离、以及使用密度梯度的分离等。作为增加的纯化步骤和浓缩步骤，在一个或多个实施方式中，可举出根据利用目标稀有细胞和非目标细胞的生物学特性的差异的方法和/或利用目标稀有细胞和非目标细胞的物理特性的差异的方法而进行的处理，例如，可举出磁分离、吸引、流式细胞仪和介电泳等。作为增加的浓缩步骤，在一个或多个实施方式中，可举出介电泳、磁分离、吸引和流式细胞仪等。但是，本公开不限定于上述例子。另外，本公开在一个方式中，基于以下本专利技术的专利技术人发现的新的见解：如前述那样从含有目标细胞、以及含有比目标细胞多的非目标细胞(例如，白细胞)的待测体中回收目标细胞，并且，通过在所述过滤器上进行针对被过滤器捕获的细胞中的非目标细胞标记的所述标记处理，能够以高纯度回收目标细胞。本公开在一个方式中，基于如下本专利技术的专利技术人发现的新的见解：将含有目标稀有细胞和非目标细胞的待测体通过能够捕获所述目标稀有细胞的过滤器来过滤，在捕获了稀有细胞和非目标细胞的过滤器上对非目标细胞进行标记，从过滤器回收标记的非目标细胞和稀有细胞，使用该标记选择性分离非目标细胞和稀有细胞并回收含有稀有细胞的溶液，接着捕获该溶液中的稀有细胞，由此能够大幅度减少处理中的损失并能够以高纯度且高残留率回收待测体中仅以微量含有的稀有细胞理。此外，在本公开中，作为“在过滤器上标记”，是指在不从上述的过滤器回收通过过滤器过滤而捕获的细胞的情况下(稀有细胞实质上被过滤器捕获的状态下)，进行非目标细胞标记。通过本公开的方法，能够从上述待测体以高纯度回收目标细胞的机理不明，但是可以如下推测。通过进行如下原理不同的至少两阶段的纯化步骤，能够提高目标细胞和非目标细胞的分离效率：过滤器过滤等、利用目标细胞和非目标细胞的物理性质的差异而去除待测体中的非目标细胞的一部分来进行纯化的纯化步骤和浓缩步骤；以及通过磁分离和介电泳等、利用目标稀有细胞和非目标细胞的生物学特性的差异的方法和/或利本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稀有细胞回收方法，包括：通过能够捕获目标稀有细胞的过滤器来过滤含有所述目标稀有细胞和非目标细胞的待测体的步骤；在所述过滤器上对通过过滤步骤被所述过滤器捕获的稀有细胞和非目标细胞中的所述非目标细胞进行标记的步骤；从标记步骤后的过滤器回收含有所述稀有细胞和标记的非目标细胞的溶液，从所述溶液中去除所述标记的非目标细胞，回收含有所述稀有细胞的溶液的步骤；以及从含有所述稀有细胞的溶液中捕获所述稀有细胞的步骤。

【技术特征摘要】
2016.10.06 JP 2016-198422;2017.10.04 JP 2017-194021.一种稀有细胞回收方法，包括：通过能够捕获目标稀有细胞的过滤器来过滤含有所述目标稀有细胞和非目标细胞的待测体的步骤；在所述过滤器上对通过过滤步骤被所述过滤器捕获的稀有细胞和非目标细胞中的所述非目标细胞进行标记的步骤；从标记步骤后的过滤器回收含有所述稀有细胞和标记的非目标细胞的溶液，从所述溶液中去除所述标记的非目标细胞，回收含有所述稀有细胞的溶液的步骤；以及从含有所述稀有细胞的溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：高木英纪，小塚昌弘，伊藤博史，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP