一种从产毒藻类中提取纯化贝类毒素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从产毒藻类中提取纯化贝类毒素的方法，主要包括提取、萃取和柱层析三个步骤。提取液包括甲醇和氯仿，萃取剂包括正己烷、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇，柱层析包括正反相硅胶柱层和高效液相色谱，通过优化工艺流程，合理选择洗脱剂、提取液和萃取剂，各步骤协同增效，最终得到高纯度和高产量的贝类毒素，产量达到4.58g，纯度达到99％。该方法简洁高效，节省成本，产量较高，有利于工业上的大规模应用。

A method for extraction and purification of shellfish toxin from poisonous algae

The invention relates to a method for extraction and purification of shellfish toxin from poisonous algae, which mainly consists of three steps, extraction, extraction and column chromatography. The extract including methanol and chloroform extraction agent including hexane, chloroform, ethyl acetate and n-butanol, column chromatography and silica gel column including layer and high performance liquid chromatography, through process optimization, reasonable choice of the eluent, extract and extraction agent, each step is synergistic, finally get the high purity and high yield shellfish toxins, production reached 4.58g, the purity reached 99%. This method is simple, efficient, cost saving and high production, and is beneficial to large-scale application in industry.

【技术实现步骤摘要】
一种从产毒藻类中提取纯化贝类毒素的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种从产毒藻类中提取纯化贝类毒素的方法。
技术介绍
海洋毒素是由海洋中的有毒藻类通过食物链传递给藻食性的鱼、虾及贝类等生物，并在其体内蓄积形成的有毒高分子化合物。海洋毒素种类繁多，其中贝类毒素是危害较大者之一。贝类毒素包括麻痹性贝类毒素、腹泻性贝类毒素、神经性贝类毒素和健忘性贝类毒素。贝类毒素危害具有突发性和广泛性，具有强毒性和不可预见性等特点，由于其毒性大、反应快、无适宜解毒剂，给防治带来了许多困难，贝类毒素对消费者健康安全和近海生态带来严重威胁，是国际社会共同关注的生态灾害和重大海洋环境问题，因此，贝类毒素的研究具有重要意义。目前，贝类毒素也是海洋生物活性物质中研究、开发进展最为迅速的领域之一，部分贝类毒素在开发抗癌、镇疼、麻醉、抗病毒、抗菌等各种治疗药物方面有着非常广阔的应用前景。但是，由于自然环境中的贝类毒素的密度非常低，其毒素主要是通过贝类或鱼类的摄食富集达到一定浓度而成，因而，毒素原材料的来源困难极大程度地制约了毒素的进一步深入研究。目前，获得大量贝类毒素的途径之一是从天然环境中分离产毒藻种，并在实验本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从产毒藻类中提取纯化贝类毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取：将产毒藻类扩大培养后进行离心，离心得到的藻细胞反复冻融后加入氯仿和甲醇的混合液浸泡，超声破碎、减压蒸发得到总浸膏；(2)萃取：向总浸膏加入去离子水溶解，萃取静置，得到萃取物；(3)柱层析：将萃取物进行柱层析，取目标流份色谱分离得到贝类毒素。

【技术特征摘要】
1.一种从产毒藻类中提取纯化贝类毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取：将产毒藻类扩大培养后进行离心，离心得到的藻细胞反复冻融后加入氯仿和甲醇的混合液浸泡，超声破碎、减压蒸发得到总浸膏；(2)萃取：向总浸膏加入去离子水溶解，萃取静置，得到萃取物；(3)柱层析：将萃取物进行柱层析，取目标流份色谱分离得到贝类毒素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述氯仿和甲醇的混合液的添加量为藻细胞体积的3-6倍，优选为5倍；优选地，所述氯仿和甲醇的体积比(1-10):1，优选为1:1。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心的条件为2000-8000rpm，优选为5000rpm；优选地，所述冻融次数为1-5次，优选为2次；优选地，所述浸泡时间为20-60min，优选为30min；优选地，所述超声破碎的强度为10-30％，优选为20％。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述去离子水的添加量为总浸膏体积的2-4倍，优选为3倍；优选地，步骤(2)所述萃取采用萃取剂萃取；优选地，所述萃取剂的添加量为总浸膏体积的2-4倍，优选为3倍；优选地，所述萃取剂为正己烷、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇中的任意一种或至少两种的组合，优选为正己烷、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述萃取具体包括如下步骤：向溶解的总浸膏中加入第一种萃取剂混合后静置，再加入下一种萃取剂混合静置，依次加入所有萃取剂后最终得到萃取物；优选地，所述静置时间为10-30min，优选为20min。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述柱层析为正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、离子交换柱层析或吸附柱层析中的任意一种或至少两种的组合，优选为正相硅胶柱层析和反相硅胶柱层析的...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢应波，张庆，张华，徐肖冰，罗桂云，张维燕，
申请(专利权)人：上海泰坦科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31