一套月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系及其鉴别方法技术

本发明专利技术公开一套月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系及其鉴别方法。该鉴别寄主体系采用的9份蔷薇属植物寄主材料，均来源于国内，不仅完全具有自主知识产权，且在全国范围内栽培和繁殖均具有适应性，同时具有较强的鉴别能力，能够广适性地鉴别国内的月季黑斑病菌生理小种的类型，共划分为9个月季黑斑病菌生理小种类型。本发明专利技术方法简化了寄主材料发病情况的数据统计方式，该统计数据最终简化为0和1两种整数形式表示，不仅省时省力，而且使得抗/感性评价直观、准确和高效。

A set of differential host system and identification method for a set of physiological races of black spot pathogen in Chinese rose

The invention discloses a set of identification host system and identification method for the physiological races of the black spot pathogen of the Chinese rose. 9 rose by the differential host system of genus host materials, are from China, not only has the independent intellectual property rights, and the cultivation and propagation have adaptability in the country, and has strong ability to identify, widely applicable to identify domestic Ji Heiban races types, divided 9 rose blackspot races type. The method simplifies the statistical way of the occurrence of the host material. The statistical data is simplified to 0 and 1 two integer forms, which not only saves time and effort, but also makes the evaluation of anti / sensibility intuitive, accurate and efficient.

【技术实现步骤摘要】
一套月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系及其鉴别方法
本专利技术属木本花卉抗病育种
，具体涉及月季黑斑病菌生理小种的鉴别。
技术介绍
月季(Rosahybrida)是蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(RosaL.)植物，是目前世界上最流行的庭园植物和重要的盆栽花卉，我国月季的主产区分布在云南省。月季黑斑病是由蔷薇盘二孢(Marssoninarosae)引起的一种病害，是月季露地栽培最严重和最普遍的一种病害。该病是全国乃至全球庭院月季生产的第一大病害，也是野生月季资源和盆花月季的主要病害之一。目前，生产中主要通过反复施用化学药剂来预防和控制月季黑斑病的发生，这样不仅增加了生产成本，还造成了对环境的污染和破坏，同时还严重降低了其观赏价值。为了减轻月季生产商的经济损失和减少农药施用引起的环境污染，国内外研究者都在进行月季抗黑斑病品种的选育科研工作。然而，由于月季黑斑病菌生理小种较多，且存在变种等情况，因此目前国内外尚没有出现具有长效且广谱抗黑斑病菌的月季品种。选育月季抗黑斑病品种的前提，就是要了解当地黑斑病菌的生理小种情况。研究表明国内外月季黑斑病均是由真菌——蔷薇盘二孢(Marssoninarosae)引起的病害，且有多个生理小种。生理小种是指种和变种内形态相同，但致病力等方面均有不同表现的群体，这些群体对不同寄主的致病力存在差异。国外研究者对当地的月季黑斑病菌生理小种的研究起于1980年，研究者在加拿大发现有3个生理小种。最近在2010年，研究者在欧美发现有11个生理小种。迄今为止，国内尚未有月季黑斑病菌生理小种的研究报道。目前，国内外对于植物黑斑病菌的生理小种的传统鉴别方法主要是：将不同地理来源的单孢病菌分别接种到鉴别寄主植物上，经过一定发病周期，结合观察和评价寄主叶片的发病情况，以此鉴别出不同的生理小种。一方面，因为月季黑斑病菌生理小种的划分具有明显的地域性和特异性，所以鉴别寄主植物材料最好选用鉴别地区本土的材料(同一个属但不同种/品种)；另一方面，如果采用国外的鉴别寄主植物材料，那么将涉及到寄主植物的专利费用、引种、驯化、繁殖等步骤和过程，这些程序使得生理小种鉴别工作不仅费时费力费资，而且因为不同地理环境分布的生理小种不同，所以国外的专利品种不一定适合国内的鉴别工作，因此很可能会影响后续鉴别工作的准确性。目前，美洲和欧洲已分别确定了一套适用于该地区进行月季黑斑病菌生理小种鉴别的鉴别寄主体系及方法。然而，国内尚未有月季黑斑病菌生理小种鉴别的相关报道，所以适用于国内进行月季黑斑病菌生理小种鉴别的鉴别寄主体系和方法尚未确定。准确预测月季黑斑病菌的种类，及时检测其生理小种的分化演替，对于防治月季黑斑病、引进抗病材料和选育抗病新品种具有重要意义。鉴于我们国内尚缺乏一套适合国内各个地区用于对月季黑斑病菌生理小种鉴别的鉴别寄主体系，且现有植物抗性鉴别方法中所采用的寄主发病情况统计法，存在耗时费力、鉴别周期较长等技术问题，探索出一套鉴别准确和筛选快速，且适用于国内月季黑斑病菌生理小种鉴别的鉴别寄主体系和方法迫在眉睫。目前，国内的蔷薇属月季野生资源、品种或品系有2万余个，其主栽的蔷薇属月季野生资源、品种或品系有2千余个，如何能从如此多的蔷薇属植物材料中筛选出能广适性地鉴别分布于我国月季主产地区的月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体材料是一难题。现有植物抗性鉴定方法采用病情指数统计对植物抗病级别进行划分和鉴别，其病情指数统计方法主要是：采用寄主叶片的病情指数计算公式，计算出的病情指数以0-1之间的非整数形式表示，再以病情指数值的大小评级寄主材料的抗病级别，分为免疫、高抗、中抗、感、中感、高感5类级别，这种统计不仅费时费力，而且这些0-1之间的非整数数据困扰鉴别，也不适宜植物病菌生理小种的鉴别。
技术实现思路
为解决现有技术缺乏一套适宜国内的月季黑斑病菌生理小种鉴别寄主体系及其鉴别方法，以及现有对植物抗病级别病情指数统计繁琐、不适宜植物病菌生理小种鉴别的技术问题，本专利技术提供一套适用于国内的月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系及其鉴别方法。本专利技术技术方案如下：1.一套月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系，由如下9份活体蔷薇属植物材料组成：木香花、玫瑰、川滇蔷薇、大叶蔷薇、七姊妹、金粉莲、软香红、云玫和浴火凤凰。2.一种月季黑斑病菌生理小种的鉴别方法，包括以下步骤：(1)月季寄主材料的准备以技术方案1所述的月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系中所述的9份活体蔷薇属植物材料为月季黑斑病菌生理小种鉴别的寄主材料，并采集每一份寄主材料枝条从其顶端向下第3～4层的完全展开的含有5片或7片叶的无病虫害的完全叶，经解剖镜镜检，无真菌菌落或菌丝后，用70％v/v乙醇处理1～2min，然后用无菌水清洗3～4次，用无菌的滤纸吸干完全叶表面水分，然后将完全叶叶面朝上平铺在盛有营养基质的培养皿中，每一份寄主材料的完全叶放置在一个培养皿内；(2)接种待鉴别的月季黑斑病菌采用喷雾法将待鉴别的黑斑病菌孢子悬浮液分别接种到步骤(1)中所述每一个培养皿内的叶片上，保证肉眼可见每片叶叶面被待鉴别的月季黑斑病菌孢子悬浮液覆盖，接种完成后，将培养皿在室内光强1800～2600lx、光周期为10～16h光期、14～8h暗期，空气相对湿度75～95％、室温18～28℃的条件下培养7～14d；(3)月季寄主材料的病情观测和统计接种叶片病情划分为2个等级：0级：抗病，用0表示，所述0级是叶片无病斑或叶片发病面积<叶面面积的20％；1级：感病，用1表示，所述1级是叶片发病面积≥叶面面积的20％；(4)月季黑斑病菌生理小种的鉴别将步骤(3)的统计结果与表1月季黑斑病菌生理小种类型对照表进行比对：当表1中9份鉴别寄主材料均表现为抗病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为A型月季黑斑病菌生理小种；当表1中的七姊妹1份鉴别寄主材料为感病，而表1中其余8份鉴别寄主材料均为抗病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为B型月季黑斑病菌生理小种；当表1中的七姊妹和软香红2份鉴别寄主材料均为感病，而表1中其余7份鉴别寄主材料均为抗病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为C型月季黑斑病菌生理小种；当表1中的七姊妹、软香红和浴火凤凰3份鉴别寄主材料均为感病，而表1中其余6份鉴别寄主材料均为抗病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为D型月季黑斑病菌生理小种；当表1中的七姊妹、软香红、浴火凤凰和大叶蔷薇4份鉴别寄主材料均为感病，而表1中其余5份鉴别寄主材料均为抗病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为E型月季黑斑病菌生理小种；当表1中的七姊妹、软香红、浴火凤凰、大叶蔷薇和云玫5份鉴别寄主材料均为感病，而表1中其余4份鉴别寄主材料均为抗病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为F型月季黑斑病菌生理小种：当表1中的木香花、玫瑰和川滇蔷薇3份鉴别寄主材料均为抗病，而表1中其余6份鉴别寄主材料均为感病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为G型月季黑斑病菌生理小种；当表1中的木香花和玫瑰2份鉴别寄主材料均为抗病，而表1中其余7份鉴别寄主材料均为感病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为H型月季黑斑病菌生理小种；当表1中的木香花1份鉴别寄主材料为抗病，而表1中其余8份鉴别寄主材料均为感病时，则该待鉴别的月季黑斑病菌为I型月季黑斑病菌生理小种；表1月季黑斑病菌生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一套月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系，其特征在于：所述鉴别寄主体系由如下9份活体蔷薇属植物材料组成：木香花、玫瑰、川滇蔷薇、大叶蔷薇、七姊妹、金粉莲、软香红、云玫和浴火凤凰。

【技术特征摘要】
1.一套月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系，其特征在于：所述鉴别寄主体系由如下9份活体蔷薇属植物材料组成：木香花、玫瑰、川滇蔷薇、大叶蔷薇、七姊妹、金粉莲、软香红、云玫和浴火凤凰。2.一种月季黑斑病菌生理小种的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)月季寄主材料的准备以权利要求1所述的月季黑斑病菌生理小种的鉴别寄主体系中所述的9份活体蔷薇属植物材料为月季黑斑病菌生理小种鉴别的寄主材料，并采集每一份寄主材料枝条从其顶端向下第3～4层的完全展开的含有5片或7片叶的无病虫害的完全叶，经解剖镜镜检，无真菌菌落或菌丝后，用70％v/v乙醇处理1～2min，然后用无菌水清洗3～4次，用无菌的滤纸吸干完全叶表面水分，然后将完全叶叶面朝上平铺在盛有营养基质的培养皿中，每一份寄主材料的完全叶放置在一个培养皿内；(2)接种待鉴别的月季黑斑病菌采用喷雾法将待鉴别的黑斑病菌孢子悬浮液分别接种到步骤(1)中所述每一个培养皿内的叶片上，保证肉眼可见每片叶叶面被待鉴别的月季黑斑病菌孢子悬浮液覆盖，接种完成后，将培养皿在室内光强1800～2600lx、光周期为10～16h光期、14～8h暗期，空气相对湿度75～95％、室温18～28℃的条件下培养7～14d；(3)月季寄主材料的病情观测和统计接种叶片病情划分为2个等级：0级：抗病，用0表示，所述0级是叶片无病斑或叶片发病面积<叶面面积的20％；1级：感病，用1表示，所述1级是叶片发病面积≥叶面面积的20％；(4)月季黑斑病菌生理小种的鉴别将步骤(3)的统计结果与表1月季黑斑病菌生理小种类型对照表进行比对：当表1中9份鉴别寄主材料均表现为抗病时，则该待鉴别的月...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱显钦，陈敏，张颢，晏慧君，唐开学，王其刚，蹇洪英，李淑斌，周宁宁，张婷，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53