食品的检验方法技术

用基于由特定物质的一部分基因得到的信息设计的引物进行ＰＣＲ，用来测定食品中有无特定物质的方法，在检出食品中所含的微量成分和识别有害的特定物质过敏源方面是优异的。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及，特别涉及为了显示出在食品中是否存在有过敏物质，而在食品的整个流通阶段中检出所含微量特定物质的方法。
技术介绍
近年来，为了防止起因于含有过敏物质的食品造成的对健康的危害，对通过标示提供信息的希望日益高涨，伴随着平成13年4月食品卫生法关连法令的修订，对含有过敏物质的标示就成了义务。特别是对于病历数比较多的蛋、奶、小麦和症状比较重的荞麦和花生等5个品种(特定原材料)，在食品的整个流通阶段进行适当的标示已经义务化。由于作为过敏物质的食品是否认为是过敏源，由于个体的差异而有所不同，如果把在食品中所含的极其微量特定物质作出适当的标示，自己就可以知道从食品中摄取的是否含有过敏源。但是，当对食品进行加热等加工来检查有没有极其微量的特定物质时，用历来公知的食品分析方法是很困难的。如果是生产者在本公司使用的特定物质，当然能够在加工的食品中进行标示，可是在使用特定物质作为终端制品的中间原料的情况下，特别是有时不能确认在购入的中间原料中是否含有微量的特定物质。实际上有时是无意混入的。在食品制造商那里，正确地把握加工助剂或夹带物等食品添加物的极微量残留或者在制造线之间的相互污染的情况，做出适当的对策的同时，给消费者提供基于法律是正确的信息是很重要的，因此就希望提供过敏物质的正确分析技术。在我国，荞麦是一种日常的食品，有的患者对荞麦呈现过敏反应。大多数反应是过敏型的反应，最重的病例直至死亡。在标示含有食品卫生法的过敏物质时，荞麦被规定为特定的原材料之一，在食品中有时混入的情况下，对其的标示被义务化。但是没有适当的测定方法，因此希望有微量成分的确实测量方法。因此，在本专利技术中的目的就是提供测定食品中有没有特定物质的方法，以开发正确地分析在食品中有没有混入荞麦的方法为目的，在荞麦中构筑特异的引物并确认其检出界限，以及试图用在加工食品中。专利技术的公开本专利技术基于由特定物质的一部分基因得到的信息，进行设计引物的多聚酶链式反应(PCR)，从而提供测定食品中有无特定物质的方法。为了标示在食品中有无微量成分，提供一种在食品中的标示方法，基于由特定物质的一部分基因得到的信息，进行设计引物的PCR，测定有没有特定物质。为了识别含有对食品摄取者有害的特定物质过敏源的食品，可以提供基于特定物质的一部分基因得到的信息，进行设计引物的PCR，从而测定在食品中有无特定物质的方法、提供在食品中是否含有对过敏患者或其疑似患者有害的过敏源的特定物质的信息的方法，或者在食品中标示这其中的任何一种的方法。食品不仅包括人类的食品，也包括动物的食品(饲料)。在此，优选的方法是，上述特定物质是特定谷类的方法。上述食品可以是经过加工处理的食品，也可以是食品原料。提供上述特定谷类是荞麦的方法。在此，优选上述基因是以序列表的序列号11表示的荞麦基因，上述引物如下的方法①从第121g至第360c的序列中选择的至少5～35个连续的DNA片段的信息中选出的正向引物或反向引物；或者②从第1381t至1680c的序列中选择的至少5～35个连续的DNA片段的信息中选出的正向引物或反向引物。引物是靶基因的互补链，靶基因的N-末端的序列部分和C-末端的序列部分进行成对选择，对的长度可以相同，也可以不同。特别优选在下面表1中表示的FAG3(序列号1)/FAG4(序列号2)、FAG17(序列号5)/FAG18(序列号18)、FAG19(序列号7)/FAG20(序列号8)、FAG19(序列号7)/FAG22(序列号9)、FAG19(序列号7)/FAG24(序列号10)的引物对。在PCR中使用的引物，如果作为模板的DNA(如以荞麦举例的话，可以举出序列号11的序列)的该区域是同样的区域，那么引物的各个序列的5’-上游侧、3’-下游侧的碱基的位置在对应的同一模板上，或者即使剪切几个碱基到十几个碱基也具有同样的机能，已知得到同样的结果(PCR产物)。从而，优选的引物对，并不限于如上表1中的，实际上能够在PCR时达到与上述表1的引物对同样功能的，也包括在优选的引物对中。关于上述引物，是各个引物中缺失、置换、添加和/或插入一个或几个碱基的引物，在成为模板的DNA的该区域中杂交的引物，实质上与上述引物是同样的。具体说，比如，关于序列号1～10的各引物，是在与对应的模型DNA相对的5’-上游侧和/或3’-下游侧剪切1个或几个乃至十几个碱基的引物，在序列号1～10的序列中，包括连续的至少80％，更优选90％以上，特别优选95％以上序列的引物等，包括在本专利技术优选的引物中。提供一种方法，使用上述引物进行基因扩增反应，在包括苦荞麦和/或荞麦的(不包括荞麦蔓)蓼科荞麦属被检测体中，在电泳图像中辨认出明确的扩增带，而在包括荞麦蔓(Fallopia)(不包括苦荞麦和/或荞麦)的荞麦属以外的蓼科被检测体、含有荞麦以外的动植物(源于食品原料)中则不能辨认出。提供一种基于由特定物质的一部分基因得到的信息设计的PCR用的引物，和含有这些引物，用来测定在食品中有无特定物质和/或其浓度的试剂盒。附图的简单说明附图说明图1a是表示荞麦的检出引物，FAG19/22的荞麦特异性结果的电泳图象；图1b是表示FAG5/FAG6特异性的电泳图象。图2是表示通过PCR进行检出的荞麦检出系统检出限的电泳图象。图2a是DNA水平的模拟混入试样的测定结果的电泳图象；图2b是表示粉末水平的模拟混入试样测定结果的电泳图象。图3是表示由PCR从加工食品中进行荞麦检出结果的电泳图象，图3a和图3b是分别测定的加工食品每个泳道是不同的。实施专利技术的最佳形态下面详细地说明本专利技术。本专利技术是进行基于由特定物质的一部分基因得到的信息设计的引物进行PCR反应来测定食品中有无特定物质的方法。作为检测体而被测定的食品，可以是原材料，也可以是在任何加工阶段，还可以是加工以后的食品。本专利技术的方法用来检出在食品中有无微量特定物质的存在，检出量是在DNA水平的体积比或者相对于全部食品中特定物质的质量比，优选在0.1％以下，100ppm以下，特别是50ppm以下，10ppm以下，在食品中含有特定物质基因的情况下，也能够检出并非生产者有意放入，而是作为调味品或添加剂的一部分微量存在的特定物质。DNA与蛋白质等来自生物的其他物质相比，对于加热等食品加工是比较稳定的，能够检出经过加热、调理等加工的食品中微量的存在。特定物质的基因序列，在未知的情况下也可以由公知的基因检出法来检出，当前能够使用很多的已知基因信息。比如，由国立遗传学研究所(DDBJ)等数据库能够得到特定物质基因全序列的信息，由一部分序列信息就能够选择适合于PCR反应的正向引物和反向引物对组成引物(探头)。引物的设计，在考虑本专利技术的检测方法时要注意以下的事项。首先，(i)引物的气相色谱含量为40～60％；(ii)引物的熔点(下面记做Tm值)为55～70℃；(iii)两个引物对的Tm值相近；(iv)在两个引物的3’-末端之间不保有互补的序列；(v)引物本身不形成发夹式的高次结构；(vi)引物的全长取15～35mer；(vii)引物的3’-末端的气相色谱含量低；(viii)在引物内要回避同一核苷酸多数连续的序列；(ix)没有必要与引物扩增的模板DNA片侧一根链的序列完全一致，但在3’-末端的互补性要高；(x)在本文档来自技高网...

【技术保护点】
用基于由特定物质的一部分基因得到的信息设计的引物进行ＰＣＲ，来测定在食品中有无特定物质的方法。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：山川宏人，铃木江里子，宫武圣子，早川克志，
申请(专利权)人：日清制粉集团本社股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]