一种一步检出唾液中毒品四项的方法技术

现有的检测唾液中毒品四项的方法由于制备的胶体金标记物的质量不够稳定、抗体蛋白质发生器壁的吸附损耗等原因，在实际进行检测时，容易发生特异度和敏感度方面的偏差，检测结果中出现假阳性和假阴性的比例较高。并且现有技术中对唾液进行毒品检测时一般需要对唾液进行预处理，不便于现场快速进行毒品检测。本发明专利技术提供了一种一步检测唾液中毒品四项的方法，可以快速、准确地检测出唾液中的毒品，具有很高的检测准确度和检测稳定性，并且不需要对待检测唾液进行预处理。

【技术实现步骤摘要】
一种一步检出唾液中毒品四项的方法
本专利技术涉及毒品检测领域，尤其涉及一种一步检测唾液中毒品四项的方法。
技术介绍
现有的检测唾液中毒品四项的方法由于制备的胶体金标记物的质量不够稳定、抗体蛋白质发生器壁的吸附损耗等原因，在实际进行检测时，容易发生特异度和敏感度方面的偏差，检测结果中出现假阳性和假阴性的比例较高。现有技术中对唾液进行毒品检测时一般需要对唾液进行预处理，不便于现场快速进行毒品检测。为了解决上述问题，本专利技术提出一种一步检测唾液中毒品四项的方法，可以快速、准确地检测出唾液中的毒品，具有很高的检测准确度和检测稳定性，并且不需要对待检测唾液进行预处理。
技术实现思路
本专利技术提出一种一步检测唾液中毒品四项的方法，具体通过以下方案实现：采用苯胺还原法制备胶体金颗粒，分别标记MET抗体、COC抗体、MOP抗体、KET抗体后混合，稀释混匀并均匀涂布于胶金垫上，作为示踪标记物。在硝酸纤维素膜上，四个不同浓度的BSA-MET偶联物、BSA-COC偶联物、BSA-MOP偶联物、BSA-KET偶联物固定于四个检测线（即T1、T2、T3、T4线），羊抗鼠二抗固定于质控线（即C线）。依次将样本垫、样品处理垫、胶金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装，剪成胶体金试纸并装入检测卡中。金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据T线、C线显色与否来判断检测结果。本专利技术方法包括以下步骤：一、胶体金溶液的配制1、配制0.25%氯金酸溶液；2、配制1%-2%苯胺溶液；3、配制3%-5%十二烷基硫酸钠(SDS)；4、将100ml0.25%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1%-2%的苯胺溶液1ml以及20μL3%-5%的十二烷基硫酸钠；5、溶液由浅蓝色，深蓝，再加热出现酒红色，继续煮沸20min；停止加热，继续搅拌至室温。二、胶体金标记物的制备1、取八个1.5mL试管，分别加入1mL胶体金溶液；2、加入适量K2CO3把pH调整为8.0；3、其中两个管各加入5μg/mLMOP抗体、两个管各加入12μg/mLMET抗体、两个管各加入8μg/mLKET抗体、两个管各加入9μg/mLCOC抗体，抗体混匀，振荡30min；4、加入10-15μL1%的甘油，混匀，振荡30min；5、8000rpm离心5min，轻轻吸除上清；6、用100mL胶体金复溶液重悬浮胶体金沉淀制成浓缩液；7、用复溶液将上述浓缩液稀释到适当的比例；8、玻璃纤维素膜点样，形成胶金垫，真空冻干3小时。三、在硝酸纤维素膜上划线1、T1线用浓度为0.5mg/mL的MET-BSA偶联物划线，用于检出1000ng/ml的的甲基安非他明（冰毒）；2、T2线用浓度为0.8mg/mL的COC-BSA偶联物划线，用于检出300ng/mL的可卡因；3、T3线用浓度为0.75mg/mL的的MOP-BSA偶联物划线，用于检出300ng/mL的吗啡；4、T4线用浓度为0.5mg/mL的的KET-BSA偶联物划线，用于检出1000ng/mL的氯胺酮（K粉）；5、C线用2.0mg/mL羊抗鼠多克隆抗体划线；6、将硝酸纤维素膜置于40℃烘箱干燥4h。四、样品垫的处理制备1、配制PH8的硼酸盐冲液；2、在硼砂硼酸缓冲液中加入NACl、Tween20、tritonX-100、酪蛋白钠、使其终浓度分别为0.9%、0.2%、0.2%、0.2%；3、将上述溶液按照一定比例铺在样品垫上，40℃烘箱干燥8h。五、胶体金试纸条的组装1、将样品垫、胶金垫、NC膜和吸收垫4部分按顺序组装；2、将其组装好后用剪刀剪成4mm/条后进行检测。六、检测试纸平放，将样品加到检测条的样本垫上，由于毛细效应，液体的层析方向向前，与固定在T线、C线上的物质发生结合被截留而显色。5min后，根据T线、C线的显色情况判定阴阳性结果。C线与T1、T2、T3、T4线均出现红色指示线表明唾液样本中冰毒、可卡因、吗啡、和K粉水平均小于其对应的最低检出量；C线出现红色指示线，T1、T2、T3、T4线不显色表明唾液样本中冰毒、可卡因、吗啡、和K粉水平均高于其对应的最低检出量；C线出现红色指示线，T1线均不显色，T2、T3、T4线出现红色指示线，表明样本中的冰毒大于最低检出量1000ng/mL，而可卡因、吗啡、K粉均小于其对应的最低检出量；C线出现红色指示线，T1、T2线均不显色，T3、T4线出现红色指示线，表明样本中的冰毒大于最低检出量1000ng/mL，样本中可卡因大于最低检出量300ng/mL，而吗啡、K粉均小于其对应的最低检出量；C线出现红色指示线，T1、T2、T3线均不显色，T4线出现红色指示线，表明样本中的冰毒大于最低检出量1000ng/mL，样本中可卡因大于最低检出量300ng/mL，样本中吗啡大于最低检出量300ng/mL，而K粉均小于其对应的最低检出量；C线、T1线出现红色指示线，T2、T3、T4线均不显色，表明样本中的冰毒低于最低检出量1000ng/mL，样本中可卡因低于最低检出量300ng/mL，而样本中吗啡大于最低检出量300ng/mL，而K粉均大于其对应的最低检出量1000ng/ml；C线、T1、T2、T3、T4线均不显色或者仅C线不显色、仅T线出线，表明试纸无效。本专利技术的有益效果在于：采用苯胺还原法制备胶体金颗粒，将一定浓度的氯金酸溶液与苯胺反应，并加入SDS作为稳定剂，通过动态光散射法测定，采用苯胺还原法制备的胶体金颗粒多分散指数HI值控制在0.17以内，颗粒的单分散性好，经统计胶体金颗粒平均粒径为30nm左右，85%以上的粒子粒径分布在宽度30-35nm的范围内，形成的胶体粒子粒径均一，体系稳定，胶体金标记物的质量稳定性能够得到显著提高；在制备胶体金标记物时，胶体金与抗体蛋白质偶联后加入甘油，能够提高抗体蛋白质非极性表面的稳定性，避免蛋白质在容器表面的吸附以及凝集，通过以上制备手段得到的胶体金标记物用于检测毒品，灵敏度和特异度均在96%以上，假阳性率和假阴性率控制在2%以下，并且在常温下放置6个月后假阳性率和假阴性率能够控制在3%以下，相较于现有技术产品，通过本专利技术的方法所制得的产品具有高检出灵敏度和特异度，产品检出准确性以及稳定性得到了明显提高。并且本专利技术所制备产品在检测前不需要对待检测唾液进行预处理，能更加方便、迅捷地适用于现场检测。具体实施方式在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详细描述的部分，可以参见其他实施例的相关描述。实施例1一、胶体金溶液的配制1、配制0.25%氯金酸溶液；2、配制1%苯胺溶液；3、配制3%十二烷基硫酸钠(SDS)；4、将100ml0.25%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1%的苯胺溶液1ml以及20μL3%的十二烷基硫酸钠；5、溶液由浅蓝色，深蓝，再加热出现酒红色，继续煮沸20min；停止加热，继续搅拌至室温。二、胶体金标记物的制备1、取八个1.5mL试管，分别加入1mL胶体金溶液；2、加入适量K2CO3把pH调整为8.0；3、其中两个管各加入5μg/mLMOP抗体、两个管各加入12μg/mLMET抗体、两个管各加入8μg/mLKET抗体、两个管各加入9μg/mLCOC抗体，抗体混匀，振荡30min；4、加入10μL1%的甘油，混匀，振荡30min；5、8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种一步检测唾液中毒品四项的方法，其特征在于，采用苯胺还原法制备胶体金颗粒，标记冰毒抗体、可卡因抗体、吗啡抗体、K粉抗体并均匀涂布于胶体金垫上，作为示踪标记物；在硝酸纤维素膜上，分别将特定浓度的MET‑BSA、COC‑BSA、MOP‑BSA、KET‑BSA偶联物固定于四个检测线，即T1、T2、T3、T4线，羊抗鼠二抗固定于质控线，即C线；依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装，剪成胶体金试纸并装入检测卡中；金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据T线、C线显色与否来判断检测结果。

【技术特征摘要】
1.一种一步检测唾液中毒品四项的方法，其特征在于，采用苯胺还原法制备胶体金颗粒，标记冰毒抗体、可卡因抗体、吗啡抗体、K粉抗体并均匀涂布于胶体金垫上，作为示踪标记物；在硝酸纤维素膜上，分别将特定浓度的MET-BSA、COC-BSA、MOP-BSA、KET-BSA偶联物固定于四个检测线，即T1、T2、T3、T4线，羊抗鼠二抗固定于质控线，即C线；依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装，剪成胶体金试纸并装入检测卡中；金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据T线、C线显色与否来判断检测结果。2.根据权利要求1中的方法，其特征在于胶体金标记物通过以下步骤进行制备：先配制胶体金溶液，再制备胶体金标记物。3.根据权利要求2中的方法，其特征在于胶体金溶液的配置通过以下步骤进行：（1）配制0.25%氯金酸溶液；（2）配制1%-2%苯胺溶液；（3）配制3%-5%十二烷基硫酸钠；（4）将100ml0.25%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1%-2%的苯胺溶液1ml以及20μL3%-5%的十二烷基硫酸钠；（5）溶液由浅蓝色，深蓝，再加热出...

【专利技术属性】
技术研发人员：司英杰，史晋海，王少雄，王兴和，刘伟，向荣，
申请(专利权)人：成都中昆德润科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51