胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用技术

本发明专利技术涉及胃癌的诊断技术领域，公开了一种胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用，利用高效液相色谱‑质谱联用仪测定胃癌患者和健康人唾液样本中的代谢氨基酸，并筛选出与胃癌相关的代谢氨基酸作为胃癌氨基酸标志物组合；所述胃癌氨基酸标志物组合包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。与现有技术相比，本发明专利技术中胃癌氨基酸标志物组合在胃癌诊断中应用之后，不仅能够简单快速地检测出被测试者是否患有胃癌，还能够确定胃癌的进展期，诊断无创友好，简便迅速，准确率高，有利于确定临床治疗方案，提高治愈率。

【技术实现步骤摘要】
胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用
本专利技术涉及胃癌的诊断
，特别涉及一种胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用。
技术介绍
胃癌是当今最常见的恶性癌症之一，其在中国的发病率和死亡率分别排在所有癌症中的第二位和第三位。目前，对胃癌治疗的最好办法只有早期诊断。统计表明早期胃癌的术后5年生存率可达90％，而晚期胃癌却低于24％。然而，80％胃癌在早期时症状十分不明显，易被忽略或漏诊。当临床上能够得到确诊时，胃癌往往已经发展到了中晚期，导致患者错过了最佳的治疗时机。随着胃镜检查的普及，胃癌的早期诊断率得到了一定的提升，但是胃镜检查为有创性，检查过程中患者较痛苦，而且价格昂贵，单纯胃镜检查无法进行胃癌分期，必须通过活检或术后病理检查，过程较长，这些原因导致其无法成为胃癌人群筛查的理想方法。因此，通过检测生物样本中特定癌症相关标志物早期诊断癌症是最有价值的方法。所述生物样本包括各种体液。对于许多主要的癌症，体液中蛋白类标志物存在灵敏度和特异性不足的问题。例如，对于胃癌患者体液中最常用的蛋白类标志物cal9-9、ca72-4和癌胚抗原(CEA)只能检测出约15-50％的任一阶段的胃肿瘤，对于早期疾病，降至大约2-11％。而在各种体液中，唾液能以无创方式进行采集，方便、准确且无任何的伦理和医学风险。其次，唾液中所含有的多种氨基酸与胃癌有着密切的关联，这些氨基酸种类众多且化学性质稳定，可作为可靠的胃癌标志物用于反映出早期胃癌和晚期胃癌的差异，因此可以能最大程度消除个体间差异，适合于建立一种通用且可靠的胃癌诊断方法，快速实验现胃癌的早期诊断。目前尚无利用唾液中的氨基酸作为标志物对胃癌进行诊断。如果能及时诊断胃癌所处的阶段，将有利确定临床治疗方法，对症下药，提高治愈率。然而，现有的利用唾液诊断胃癌方法也无法对早期和晚期胃癌进行有效区分。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用，本专利技术中的胃癌氨基酸标志物可用于通过对人体唾液的检测快速诊断出被测试者是否患有胃癌，并能够确定胃癌病毒的发展阶段，诊断无创友好，简便迅速，准确率高，有利于确定临床治疗方案，提高治愈率。技术方案：本专利技术提供了一种胃癌氨基酸标志物组合，包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。本专利技术还提供了一种胃癌氨基酸标志物组合的筛选方法，利用高效液相色谱-质谱联用仪测定胃癌患者和健康人唾液样本中的代谢氨基酸，并筛选出与胃癌相关的代谢氨基酸作为胃癌氨基酸标志物组合；所述胃癌氨基酸标志物组合包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。优选地，所述高效液相色谱的条件为：选用C18色谱柱，流动样为98％的水和2％的乙腈，均为体积百分比，进行梯度活化；流速为0.8mL/min，柱温为室温。最初平衡时间为5min，分析运行时间为25min，室温条件下进行。优选地，所述梯度活化按照以下条件任意进行：(1)98％的水和2％的乙腈为9.5min；(2)76％的水和24％的乙腈为1.5min；(3)20％的水和80％的乙腈2min；(4)20％的水和80％的乙腈5min；(5)98％的水和2％的乙腈9min。优选地，所述质谱的条件为：70eV正离子模式，室温条件下进行。本专利技术还提供了一种胃癌氨基酸标志物组合在胃癌诊断中的应用，胃癌氨基酸标志物组合包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。优选地，若在所述牛磺酸、所述甘氨酸、所述谷氨酰胺、所述乙醇胺、所述组氨酸、所述丙氨酸、所述谷氨酸、所述脯氨酸和所述酪氨酸中，在被测试者的唾液样本中至少有7种氨基酸标志物的浓度大于50μM，则所述被测试者患有胃癌。优选地，若所述甘氨酸、所述丙氨酸、所述谷氨酸或所述脯氨酸在被测试者的唾液样本中的浓度均大于100μM，则所述被测试者处于胃癌早期。优选地，若在所述牛磺酸、所述甘氨酸、所述谷氨酰胺、所述乙醇胺、所述组氨酸、所述丙氨酸、所述谷氨酸、所述脯氨酸和所述酪氨酸中，在被测试者的唾液样本中至少有7种氨基酸标志物的浓度在50～100μM之间，则所述被测试者处于胃癌晚期。优选地，若在所述牛磺酸、所述甘氨酸、所述谷氨酰胺、所述乙醇胺、所述组氨酸、所述丙氨酸、所述谷氨酸、所述羟赖氨酸、所述脯氨酸和所述酪氨酸中，在被测试者的唾液样本中至少有8种氨基酸标志物的浓度小于50μM，则所述被测试者没有胃癌。原理及有益效果：根据唾液中的代谢物小分子与癌症之间的关系选择一种最恰当的代谢小分子作为标志物，是利用唾液进行胃癌早期筛查和诊断的关键。相对于其他小的代谢物，唾液中的氨基酸是人体自身生成的物质，不易受到饮食的影响，同时种类较少且浓度较大，化学性质稳定；最为重要的是，唾液中的氨基酸可以在胃癌组织中生成，并通过确定的细胞内和细胞旁的传递路径由胃癌组织进入到唾液中。因此，在早期胃癌和晚期胃癌的诊断中，唾液中的氨基酸是理想的生物标志物，具有很高的准确性。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：1、样本收集和检测方法更方便、简单、快速。唾液的采集量及采集时间上可控、方便、无创友好，不存在任何的伦理和医疗风险，检测过程不超过2个小时。2、所筛选出唾液中的胃癌氨基酸标志物种类多，与胃癌的关联性好，通过检测多个胃癌氨基酸标志物可有效提高胃癌诊断的准确率。3、可以区别早期胃癌和进展期胃癌，有利于确定临床治疗方案，提高治愈率。附图说明图1为早期胃癌患者、晚期胃癌患者与健康者提供的唾液样本中氨基酸标志物浓度关系示意图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术进行详细的介绍。唾液样本的采集：唾液样本按以下三个标准进行收集：(1)胃癌的临床诊断结果，包含有年龄、性别、胃癌分期的信息；(2)提供唾液样本的志愿者不得患有其他恶性肿癌或血液疾病；(3)提供唾液样本的志愿者不得患有各种代谢系统疾病，主要包括糖尿病等。本研究中，共有135名志愿者，包括12名早期胃癌患者，50名晚期胃癌患者和73名健康人提供了唾液样本。所有样本中的胃癌分期信息由临床医生根据临床检查和癌症分期手册(AJCCCancerStagingManual)进行判断。整个唾液样本采集过程如下：在样本采集之前，所有的志愿者都必须在1h内禁止摄入任何食物以保持口腔清洁。采样开始前，先用纯水漱口，5min后开始收集，每名志愿者需要采集4mL唾液样本。所得到的唾液样本在离心机中以12000rpm、4℃条件下离心30min。然后，小心的取出2mL上层清液并转入离心管，储存在-70℃条件中，以进行下一步的分析检测。胃癌氨基酸标志物组合的筛选：为了筛选出唾液中可靠的氨基酸作为胃癌标志物。不同来源的唾液样本利用TRAQTM试剂盒(ABSCIEX，美国)、高效液相色谱-质谱联用技术(Highperformanceliquidchromatography-massspectrometry，HPLC-MS，ABSCIEX，美国)进行分析。其中，高效液相色谱系统主要包括氨基酸分析仪、AB3200QTRA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胃癌氨基酸标志物组合，其特征在于，包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种胃癌氨基酸标志物组合，其特征在于，包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。2.一种胃癌氨基酸标志物组合的筛选方法，其特征在于，利用高效液相色谱-质谱联用仪测定胃癌患者和健康人唾液样本中的代谢氨基酸，并筛选出与胃癌相关的代谢氨基酸作为胃癌氨基酸标志物组合；所述胃癌氨基酸标志物组合包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。3.根据权利要求2所述的胃癌氨基酸标志物组合的筛选方法，其特征在于，所述高效液相色谱的条件为：选用C18色谱柱，流动样为98％的水和2％的乙腈，均为体积百分比，进行梯度活化；流速为0.8mL/min，柱温为室温，最初平衡时间为5min，分析运行时间为25min，室温条件下进行。4.根据权利要求3所述的胃癌氨基酸标志物组合的筛选方法，其特征在于，所述梯度活化按照以下条件任意进行：(1)98％的水和2％的乙腈为9.5min；(2)76％的水和24％的乙腈为1.5min；(3)20％的水和80％的乙腈2min；(4)20％的水和80％的乙腈5min；(5)98％的水和2％的乙腈9min。5.根据权利要求2至4中任一项所述的胃癌氨基酸标志物组合的筛选方法，其特征在于，所述质谱的条件为：70eV正离子模式，室温条件下进行。6.一种胃癌氨基酸标志物组合在胃癌诊断...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘党培，刘岩磊，陈云生，杨蒙，
申请(专利权)人：苏州纳葛诺斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32