一种大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法技术

本发明专利技术涉及一种大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，配制指标成分溶液为对照品溶液；配制供试品溶液；对供试品溶液和对照品溶液进行测定；计算指标成分的含量；根据指标成分的含量折算供试品溶液中大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量。本发明专利技术提供的含量测定分析方法适用于对大叶蒟提取物、药材及其相关产品中多种抗抑郁有效成分的总含量进行测定，并可同时进行有效的定性和定量分析，该测定方法操作简便、快捷、准确、分离效果好，且精密度、重复性、稳定性良好。

【技术实现步骤摘要】
一种大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法
本专利技术属于医疗领域中的分析方法，特别是涉及一种大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法。
技术介绍
大叶蒟PiperlaetispicumC.DC,为胡椒科胡椒属植物，主要分布在我国广东、广西、云南及海南省。民间用于活血、消肿、止痛，主治跌打损伤、淤血肿痛。申请人经过多年系统研究，动物实验及临床实验发现其有关提取物具有显著的抗抑郁活性，以及一定的抗焦虑、镇痛、镇静等生物活性，并且已经申请了两项与大叶蒟相关的中国专利技术专利及多项国际专利，其中第一项中国专利技术专利(专利号：ZL03115911.7)公开了一种大叶蒟有效部位提取物的制备方法，利用该方法制备得到的大叶蒟提取物可以用于抑郁症或其它情感障碍性疾病的治疗或预防等，第二项中国专利技术专利(专利号：ZL200410084791.7)公开了另外一种大叶蒟有效部位提取物的制备方法、利用该方法制备得到的大叶蒟提取物抗抑郁药理活性更佳。同时，申请人自主研发的大叶蒟相关产品正在进行临床试验中。大叶蒟抗抑郁物质基础研究已经取得了显著的进展，大量文献报道大叶蒟中含有的多种酰胺类生物碱成分正是大叶蒟抗抑郁的物质基础。分析方法的建立有助于加快大叶蒟及其相关产品抗抑郁物质基础的进一步研究，也为今后大叶蒟相关产品的质量研究提供技术支持。但是由于大叶蒟中生物碱成分种类繁多，结构及理化性质均比较相近，分离难度较大，因此有关大叶蒟及其相关产品有效成分含量测定分析方法鲜见报道。中国专利CN2011110318120.2同时检测大叶蒟中12个酰胺类生物碱的液相分析方法，虽然其公开了一种液相分析方法，但是该方法只是针对该专利中所涉及的12个酰胺类生物碱类化合物，并不能很好的分离大叶蒟中其它生物碱类成分以及其它非生物碱类成分。同时，由于大叶蒟中酰胺类生物碱种类繁多，涉及众多对照品，且研究发现，有的对照品如N-异丁基癸-反-2-反-4-二烯酰胺在固态极易分解，有的对照品如5’-甲氧基-3’,4’亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺在溶液状态下极不稳定，所以每次含量测定时采用常规的外标法或者标准曲线法测定总含量，使用所有的对照品同时测定太过繁杂，基本没有可行性，导致相关产品工业化生产的质量标准控制也是非常困难的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种操作简便快捷的大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法。为解决以上技术问题，本专利技术采取如下技术方案：本专利技术的一个目的是提供一种大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，包括如下步骤：(1)、配制指标成分溶液作为对照品溶液；(2)、配制大叶蒟提取物、药材及其相关产品溶液作为供试品溶液；(3)、利用高效液相色谱对所述的供试品溶液和所述的对照品溶液进行测定；(4)、计算所述的指标成分的含量；(5)、根据所述的指标成分的含量折算所述的供试品溶液中抗抑郁有效成分的含量。优选地，所述的指标成分为5’-甲氧基-3’,4’-亚甲基二氧基桂皮酸四氢吡咯、3’,4’-亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺、5’-甲氧基-3’,4’亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺、1-[(2E)-5-(3,4-亚甲基二氧苯基)]四氢吡咯、4,5-二氢荜拨明宁碱、芝麻素、(2E,6E)-N-异丁基-7-(3，4-次甲二氧苯基)七碳二烯酰胺、(2E,4E,7E)-N-异丁基-9-(3，4-次甲二氧苯基)九碳二烯酰胺、N-异丁基癸-反-2-反-4-二烯酰胺、1-[(2E,4E)-2,4-癸二烯酰]四氢吡咯、(2E,4E,9E)-N-异丁基-11-(3，4-次甲二氧苯基)十一碳二烯酰胺、(2E,4E)-N-异丁基十二碳-2，4-二烯酰胺、(2E,4E)-N-异丁基-13-苯基-2，4-二烯酰胺、(2E,4E)-N-异丁基-15-苯基-2，4-二烯酰胺、(2E,4E,14Z)-N-异丁基二十烷-2,4,14-三烯酰胺中的一种或多种。进一步优选地，所述的指标成分为3’,4’-亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺和/或5’-甲氧基-3’,4’亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺。最为优选地，所述的指标成分为3’,4’-亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺。本专利技术中，大叶蒟提取物、大叶蒟药材、或者大叶蒟的相关产品以甲醇进行超声溶解、过滤得到所述的供试品溶液。本专利技术中，大叶蒟提取物包括大叶蒟粗提物和大叶蒟精提物，当采用大叶蒟粗提物配制所述的供试品溶液时，所述的供试品溶液的浓度为4～10mg/mL；当采用大叶蒟精提物配制所述的供试品溶液时，所述的供试品溶液的浓度为0.5～1.5mg/mL。根据一种实施方式，所述的大叶蒟粗提物的制备方法为：取大叶蒟药材经前处理后，加乙醇以回流、浸渍、渗漉、超声中任意一种提取方法进行提取，浓缩干燥，获得所述的大叶蒟提取物。根据一种实施方式的优选方式，所述的大叶蒟粗提物的制备方法为：将大叶蒟药材进行切制或粉碎后，用适量体积浓度为80％～95％的乙醇进行浸渍20～30小时，然后补加体积浓度为80％～95％的乙醇至大叶蒟药材重量的10-30倍，渗漉提取得大叶蒟提取液，浓缩干燥，得到大叶蒟提取物。根据另一种实施方式，所述的大叶蒟精提物的制备方法为：取大叶蒟药材，经前处理后，加乙醇以回流、浸渍、渗漉、超声中任意一种提取方法进行提取，获得粗提物，然后以大孔树脂进行有效成分的富集、纯化和精制，浓缩干燥，得到以酰胺类生物碱为主的有效部位提取物即为所述的大叶蒟提取物。根据另一种实施方式的优选方式，所述的大叶蒟精提物的制备方法为：步骤(1)、将大叶蒟药材进行切制或粉碎后，加入10～30倍大叶蒟药材重量的体积浓度为80％～95％的乙醇进行浸渍或渗漉得粗提液；步骤(2)、将步骤(1)得到的粗提液浓缩至含醇量为35％～45％，并控制浓缩温度不超过70℃；步骤(3)、将经步骤(2)浓缩后的粗提液上非极性或中极性大孔吸附树脂柱，依次用2～6倍大叶蒟药材重量的体积浓度为30％～50％的乙醇溶液、50％～70％的乙醇溶液进行洗脱，弃去洗脱液；步骤(4)、再用4～8倍大叶蒟药材重量的体积浓度为80％～95％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩至褐色黏稠状浸膏，真空干燥并控制温度不超过70℃，得到所述的大叶蒟提取物。根据又一种实施方式，所述的供试品溶液的制备方法为：取大叶蒟药材，粉碎，过2号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇适量，室温超声处理30分钟，取出振摇，溶液转移至容量瓶中，药渣加甲醇适量，同上，重复超声处理2次，合并溶液，转移至同一容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜滤过得到所述的供试品溶液。根据又一种实施方式的优选方式，所述的供试品溶液的具体制备方法为：取大叶蒟药材2g，粉碎，过2号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，室温超声处理30分钟，取出振摇，溶液转移至100ml容量瓶中，药渣加甲醇20ml，同上，重复超声处理2次，合并溶液，转移至同一容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜滤过得到所述的供试品溶液。优选地，所述的高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱、检测器为DAD检测器或紫外检测器、流动相为甲醇-乙腈-水体系或甲醇-水体系或乙腈-水体系，洗脱程序为梯度洗脱或等度洗脱，柱温20-40本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)、配制指标成分溶液作为对照品溶液；(2)、配制大叶蒟提取物、药材及其相关产品溶液作为供试品溶液；(3)、利用高效液相色谱对所述的供试品溶液和所述的对照品溶液进行测定；(4)、计算所述的指标成分的含量；(5)、根据所述的指标成分的含量折算所述的供试品溶液中抗抑郁有效成分的含量。

【技术特征摘要】
1.一种大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)、配制指标成分溶液作为对照品溶液；(2)、配制大叶蒟提取物、药材及其相关产品溶液作为供试品溶液；(3)、利用高效液相色谱对所述的供试品溶液和所述的对照品溶液进行测定；(4)、计算所述的指标成分的含量；(5)、根据所述的指标成分的含量折算所述的供试品溶液中抗抑郁有效成分的含量。2.根据权利要求1所述的大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，其特征在于：所述的指标成分为5’-甲氧基-3’,4’-亚甲基二氧基桂皮酸四氢吡咯、3’,4’-亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺、5’-甲氧基-3’,4’亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺、1-[(2E)-5-(3,4-亚甲基二氧苯基)]四氢吡咯、4,5-二氢荜拨明宁碱、芝麻素、风藤酰胺、大叶蒟酰胺、N-异丁基癸-反-2-反-4-二烯酰胺、1-[(2E,4E)-2,4-癸二烯酰]四氢吡咯、大叶蒟素、(2E,4E)-N-异丁基十二碳-2，4-二烯酰胺、(2E,4E)-N-异丁基-13-苯基-2，4-二烯酰胺、(2E,4E)-N-异丁基-15-苯基-2，4-二烯酰胺、(2E,4E,14Z)-N-异丁基二十烷-2,4,14-三烯酰胺中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，其特征在于：所述的指标成分为3’,4’-亚甲基二氧基桂皮酸异丁基酰胺。4.根据权利要求1所述的大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，其特征在于：大叶蒟提取物、大叶蒟药材、或者大叶蒟的相关产品以甲醇进行超声溶解、过滤得到所述的供试品溶液。5.根据权利要求4所述的大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，其特征在于：所述的大叶蒟提取物的制备方法为：取大叶蒟药材经前处理后，加乙醇以回流、浸渍、渗漉、超声中任意一种提取方法进行提取，浓缩干燥，获得所述的大叶蒟提取物；或者，取大叶蒟药材，经前处理后，加乙醇以回流、浸渍、渗漉、超声中任意一种提取方法进行提取，获得粗提物，然后以大孔树脂进行有效成分的富集、纯化和精制，浓缩干燥，得到以酰胺类生物碱为主的有效部位提取物即为所述的大叶蒟提取物。6.根据权利要求1所述的大叶蒟提取物、药材及其相关产品中抗抑郁有效成分的含量测定方法，其特征在于：所述的高效液相色谱的色谱条件为：色...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁秀娟，陈武，朱莹莹，季佳炜，蒋毅，
申请(专利权)人：苏州颐华生物医药技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32