高血压引起的组织纤维化动物模型及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了高血压引起的组织纤维化动物模型及其制备方法和应用。具体地，本发明专利技术提供了一种高血压引起的组织纤维化动物模型，其制备方法包括：将ETS‑1条件敲除的非人哺乳动物和同一物种的内皮细胞特异性Cre表达的非人哺乳动物交配繁育，获得ETS‑1在内皮细胞特异性敲除的非人哺乳动物，即为所述高血压引起的组织纤维化动物模型。本发明专利技术的动物模型可以用于高血压相关的组织纤维化的研究。

Animal model of tissue fibrosis induced by hypertension and its preparation and Application

The invention provides an animal model of tissue fibrosis induced by hypertension and a preparation method and application. Specifically, the present invention provides an animal model of tissue fibrosis caused by hypertension, including its preparation methods: ETS 1 non-human mammals and non-human mammals except on the same species of endothelial cell specific expression of Cre mating, ETS 1, skin cell specific knock in non-human mammals the organization, is the animal model of fibrosis caused by hypertension. The animal model of the present invention can be used in the study of tissue fibrosis related to hypertension.

【技术实现步骤摘要】
高血压引起的组织纤维化动物模型及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及一种高血压引起的组织纤维化动物模型及其制备方法和应用。
技术介绍
组织纤维化(fibrosis)是一种以器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减少为病理特征的疾病，可发生于多种器官，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭。据美国有关统计资料证明，该国因各种疾病而致死的病人中，接近45％可以归于组织纤维增生疾病。组织纤维化是组织遭受损伤后的组织修复反应,如果这种修复反应过度、过强和失控时，增生的纤维结缔组织就会引起器官的纤维化和导致器官的功能下降。因此，组织纤维化多继发于各种慢性疾病，如高血压导致心血管和肾脏纤维化,慢性肾炎所导致的肾脏纤维化等。目前对纤维化发生过程的分子机制仍未完全阐明，当前临床上对组织纤维化的治疗缺乏特效药物。ETS-1(E26avianleukemiaoncogene1,5'domain)是转录因子ETS家族成员，参与了多种组织细胞的增殖，凋亡，分化和迁移过程。ETS-1在体内表达广泛于内皮细胞，血管平滑肌细胞，成纤维细胞等组织细胞中，但是其在内皮细胞中表达最高，且ETS-1在体内的生理功能具有组织特异性。目前，对ETS-1在组织纤维化发生过程中的作用机制，特别是作用靶点仍缺乏有效的体内研究手段。对ETS-1体内功能的研究都是基于ETS-1全身敲除小鼠模型和尾静脉注射多肽抑制剂进行的，无法组织特异性的研究ETS-1在小鼠体内调控纤维化发生的生理功能。其中，ETS-1全身敲除小鼠大部分无法存活到成年，有多器官发育缺陷，用该小鼠构建组织纤维化损伤模型实验数据不准确。ETS-1多肽抑制剂对ETS-1活性抑制不完全，尾静脉注射以后对ETS-1的抑制无组织特异性，且在身体不同部位分布不均匀，用该小鼠构建组织纤维化损伤模型实验数据不准确。因此，本领域迫切需要构建一种ETS-1组织特异性敲除的组织纤维化动物模型。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种ETS-1内皮细胞特异性敲除的动物模型。在本专利技术的第一方面，提供了一种非人哺乳动物的高血压引起的组织纤维化动物模型的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)提供ETS-1条件敲除的非人哺乳动物A，和同一物种的内皮细胞特异性Cre表达的非人哺乳动物B；(2)将所述的动物A与动物B交配繁育，获得ETS-1在内皮细胞特异性敲除的非人哺乳动物C；(3)培养所述的动物C，从而得到所述的高血压引起的组织纤维化动物模型。在另一优选例中，所述动物A基因组的ETS-1基因中的一个或多个外显子的两侧插入有loxp序列。在另一优选例中，所述动物A的ETS-1基因中的外显子7和外显子8的两侧插入有loxp序列。在另一优选例中，所述的loxp序列之间还插入有筛选标记。在另一优选例中，所述筛选标记为neo基因。在另一优选例中，所述动物B的基因组中包含一外源Cre表达盒。在另一优选例中，所述的外源Cre表达盒包括：(a)内皮细胞特异性启动子；和(b)位于所述内皮细胞特异性启动子下游的Cre基因。在另一优选例中，所述的内皮细胞特异性启动子包括启动子Tie2。在另一优选例中，所述的动物C的ETS-1基因在内皮细胞中特异性敲除。在另一优选例中，所述敲除包括ETS-1基因不表达，或表达没有活性的ETS-1蛋白。在另一优选例中，所述特异性敲除是通过敲除ETS-1基因的外显子7和8实现的。在另一优选例中，在步骤(3)中，对所述的动物C进行高血压诱导，从而得到所述的高血压引起的组织纤维化动物模型。在另一优选例中，所述高血压诱导为利用血管紧张素II(AngII)进行诱导。在另一优选例中，所述非人哺乳动物为啮齿动物或灵长目动物，较佳地包括小鼠、大鼠、兔、猴。在另一优选例中，与野生型对照动物相比，进行高血压诱导后，所述的高血压引起的组织纤维化动物模型具有以下一个或多个特征：(a)心室壁肥厚程度减轻；(b)心肌纤维化减轻，较佳地为心肌血管周围的纤维化减轻；(c)肾脏纤维化。在本专利技术的第二方面，提供了一种本专利技术第一方面所述方法制备的动物模型的用途，所述的模型用于研究ETS-1在组织纤维化发生过程中的作用。在另一优选例中，所述组织纤维化是与高血压相关的(引起的)组织纤维化。在本专利技术的第三方面，提供了一种本专利技术第一方面所述方法制备的动物模型的用途，将该模型用作研究组织纤维化的动物模型。在另一优选例中，所述高血压引起的的组织纤维化包括：肾脏纤维化、心肌纤维化、血管纤维化、或其组合。在本专利技术的第四方面，提供了一种本专利技术第一方面所述方法制备的动物模型的用途，将该模型用于筛选或鉴定可减轻或治疗组织纤维化的物质(治疗剂)。在本专利技术的第五方面，提供了一种用本专利技术第一方面所述方法制备的非人哺乳动物模型。在另一优选例中，对于ETS-1基因敲除而言，所述的非人哺乳动物模型是杂合的或纯合的。在另一优选例中，所述的ETS-1基因敲除是ETS-1基因在内皮细胞中特异性敲除。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了ETS-1内皮细胞条件敲除小鼠(Tie2Cre/ETS-1f/f小鼠)的构建示意图。图2显示了ETS-1条件敲除小鼠(ETS-1f/f小鼠)的构建示意图。图3显示了内皮细胞特异性Cre表达小鼠(Tie2Cre小鼠)的构建示意图。图4A显示了Tie2Cre/ETS-1f/f小鼠在AngII灌流前后的收缩压。图4B显示了AngII灌流2周后，Tie2Cre/ETS-1f/f小鼠心室壁厚度统计数据。图4C-图4F显示了各组的心室横切面(WT:C；Tie2Cre/ETS-1f/fD；WT+AngII：E；Tie2Cre/ETS-1f/f+AngII：F)。图4G-图4J显示了各组心脏的H&E染色结果(WT:G；Tie2Cre/ETS-1f/fH；WT+AngII：I；Tie2Cre/ETS-1f/f+AngII：J)。图4K-图4N显示了各组的肾脏纵切面(WT:K；Tie2Cre/ETS-1f/fL；WT+AngII：M；Tie2Cre/ETS-1f/f+AngII：N)。图5A-图5H显示了各组心脏的Masson染色结果(WT:A,E；Tie2Cre/ETS-1f/fB,F；WT+AngII：C,G；Tie2Cre/ETS-1f/f+AngII：D,H)。图5I-图5P显示了各组心脏的天狼星红染色结果(WT:I,M；Tie2Cre/ETS-1f/fJ,N；WT+AngII：K,O；Tie2Cre/ETS-1f/f+AngII：L,P)。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入地研究，首次意外地发现一种高血压引起的组织纤维化动物模型及其制备方法和应用。具体地，本专利技术提供了一种ETS-1内皮细胞特异性敲除动物，其可以作为高血压引起的组织纤维化动物模型，其制备方法包括步骤：将ETS-1条件敲除的非人哺乳动物A和同一物种的内皮细胞特异性Cre表达的非人哺乳动物B交配繁育，获得ETS-1在内皮细胞特异性敲除的非人哺乳动物C，即为所述的高血压引起的组织纤维化动物模型。本专利技术的动物模型可以用于高血压引本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非人哺乳动物的高血压引起的组织纤维化动物模型的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)提供ETS‑1条件敲除的非人哺乳动物A，和同一物种的内皮细胞特异性Cre表达的非人哺乳动物B；(2)将所述的动物A与动物B交配繁育，获得ETS‑1在内皮细胞特异性敲除的非人哺乳动物C；(3)培养所述的动物C，从而得到所述的高血压引起的组织纤维化动物模型。

【技术特征摘要】
1.一种非人哺乳动物的高血压引起的组织纤维化动物模型的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)提供ETS-1条件敲除的非人哺乳动物A，和同一物种的内皮细胞特异性Cre表达的非人哺乳动物B；(2)将所述的动物A与动物B交配繁育，获得ETS-1在内皮细胞特异性敲除的非人哺乳动物C；(3)培养所述的动物C，从而得到所述的高血压引起的组织纤维化动物模型。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物A基因组的ETS-1基因中的一个或多个外显子的两侧插入有loxp序列。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物B的基因组中包含一外源Cre表达盒。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的外源Cre表达盒包括：(a)内皮细胞特异性启动子；和(b)位于所述内皮细胞特...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶茂青，徐莲，易同寅，付梦霞，
申请(专利权)人：上海市东方医院，
类型：发明
国别省市：上海,31