一种三肽‑29的液相合成方法技术

本发明专利技术公开了一种三肽‑29的液相合成方法，该方法将Boc‑Gly‑OH和L‑Pro‑OMe·HCl、1‑(4‑氯苯基)‑3‑(4‑甲基‑1‑哌嗪基)‑2‑丙炔‑1‑酮、N‑甲基吗啉反应合成Boc‑Gly‑Pro‑OMe，其与LiOH反应生成Boc‑Gly‑Pro‑OH；Boc‑Gly‑Pro‑OH和H‑Hyp‑OMe·HCl、1‑(4‑氯苯基)‑3‑(4‑甲基‑1‑哌嗪基)‑2‑丙炔‑1‑酮、N‑甲基吗啉反应合成Boc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OMe，再依次与LiOH、三氟乙酸反应后得H‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH粗品，粗品经纯化、冻干得纯度大于95％的H‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH，即三肽‑29。本发明专利技术以氮端Boc‑Gly‑OH为基础和L‑Pro‑OMe·HCl、H‑Hyp‑OMe·HCl用液相合成方法合成了三肽‑29，所用氨基酸原料廉价易得，工艺简单快捷，合成成本较低、产品收率较高。

A method of three peptide 29 liquid phase synthesis

\u672c\u53d1\u660e\u516c\u5f00\u4e86\u4e00\u79cd\u4e09\u80bd\u201129\u7684\u6db2\u76f8\u5408\u6210\u65b9\u6cd5\uff0c\u8be5\u65b9\u6cd5\u5c06Boc\u2011Gly\u2011OH\u548cL\u2011Pro\u2011OMe\u00b7HCl\u30011\u2011(4\u2011\u6c2f\u82ef\u57fa)\u20113\u2011(4\u2011\u7532\u57fa\u20111\u2011\u54cc\u55ea\u57fa)\u20112\u2011\u4e19\u7094\u20111\u2011\u916e\u3001N\u2011\u7532\u57fa\u5417\u5549\u53cd\u5e94\u5408\u6210Boc\u2011Gly\u2011Pro\u2011OMe\uff0c\u5176\u4e0eLiOH\u53cd\u5e94\u751f\u6210Boc\u2011Gly\u2011Pro\u2011OH\uff1bBoc\u2011Gly\u2011Pro\u2011OH\u548cH\u2011Hyp\u2011OMe\u00b7HCl\u30011\u2011(4\u2011\u6c2f\u82ef\u57fa)\u20113\u2011(4\u2011\u7532\u57fa\u20111\u2011\u54cc\u55ea\u57fa)\u20112\u2011\u4e19\u7094\u20111\u2011\u916e\u3001N\u2011\u7532\u57fa\u5417\u5549\u53cd\u5e94\u5408\u6210Boc\u2011Gly\u2011Pro\u2011Hyp\u2011OMe\uff0c\u518d\u4f9d\u6b21\u4e0eLiOH\u3001\u4e09\u6c1f\u4e59\u9178\u53cd\u5e94\u540e\u5f97H\u2011Gly\u2011Pro\u2011Hyp\u2011OH\u7c97\u54c1\uff0c\u7c97\u54c1\u7ecf\u7eaf\u5316\u3001\u51bb\u5e72\u5f97\u7eaf\u5ea6\u5927\u4e8e95\uff05\u7684H\u2011Gly\u2011Pro\u2011Hyp\u2011OH\uff0c\u5373\u4e09\u80bd\u201129\u3002 The present invention to Gly Boc N-terminal OH based Pro and L OMe - HCl, H Hyp OMe HCl by liquid phase synthesis method of three peptides with 29 amino acid, cheap material, simple process, low cost, the synthesis yield of the product.

【技术实现步骤摘要】
一种三肽-29的液相合成方法
本专利技术属于化妆品
，具体涉及到多肽类中的短肽的合成方法。
技术介绍
胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH(三肽-29)是一种含有甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸的三肽，由于胶原三肽的分子量很小，因而能够被人体充分吸收，与此同时，胶原三肽还能够极有效的渗入角质层，真皮层和头发根部细胞内，是目前分子量最小的，与皮肤胶原蛋白有相同的基本结构，无需分解，能够被皮肤直接吸收，吸收率高。胶原三肽能促进真皮胶原蛋白生成，真表皮连接层再生，表皮再生和分化，广泛应用于各种高级美容化妆品中，有保湿、滋养、亮肤、紧肤、防皱、修复的功能。目前常规合成胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH时需要使用的Fmoc-Hyp(tBu)-OH等原料价格较高，自主合成过程繁杂，因此，简单快捷、成本较低的合成方法和H-Hyp-OH保护策略研究对广泛使用于化妆品的胶原三肽有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服常规合成胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH时使用的Fmoc-Hyp(tBu)-OH价格较高，自主合成过程繁杂的问题，提供一种氨基酸原料廉价易得、工艺简捷的液相合成胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH的方法。解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：1、合成Boc-Gly-Pro-OMe以无水二氯甲烷为溶剂，将Boc-Gly-OH、1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮在氮气保护下冰浴搅拌反应2～4小时，然后加入N-甲基吗啉、L-Pro-OMe·HCl，在氮气保护下室温搅拌反应24～72小时，将反应液旋蒸除去二氯甲烷，用水和乙酸乙酯萃取，有机相依次经质量分数为5％～10％的柠檬酸水溶液、质量分数为5％～10％的碳酸氢钠水溶液洗涤后，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到Boc-Gly-Pro-OMe。2、合成Boc-Gly-Pro-OH将Boc-Gly-Pro-OMe加入四氢呋喃与甲醇、5％～10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液中，室温搅拌反应2～4小时，用1mol/L盐酸调pH至4～5，旋转蒸发浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，干燥得Boc-Gly-Pro-OH。3、合成Boc-Gly-Pro-Hyp-OH按照步骤1的方法将Boc-Gly-Pro-OH、1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮、N-甲基吗啉、H-Hyp-OMe·HCl反应，得到Boc-Gly-Pro-Hyp-OMe；然后按照步骤2的方法用四氢呋喃与甲醇、5％～10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液处理Boc-Gly-Pro-Hyp-OMe，得到Boc-Gly-Pro-Hyp-OH。4、合成H-Gly-Pro-Hyp-OH向Boc-Gly-Pro-Hyp-OH中加入三氟乙酸与水体积比为95:5的混合液，室温搅拌反应1小时，浓缩反应液，将浓缩液加入冷乙醚中析出沉淀，离心除去上清，沉淀经乙醚洗涤、离心后真空干燥，得到H-Gly-Pro-Hyp-OH粗品；H-Gly-Pro-Hyp-OH粗品经C18反相HPLC纯化、冷冻干燥，得到胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH，即三肽-29。上述步骤1中，优选Boc-Gly-OH、1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮、N-甲基吗啉和L-Pro-OMe·HCl的摩尔比为1:1:1～1.2:1～1.1。上述步骤3中，优选Boc-Gly-Pro-OH、1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮、N-甲基吗啉和L-Pro-OMe·HCl的摩尔比为1:1:1～1.2:1～1.1。本专利技术以氮端Boc-Gly-OH为基础和L-Pro-OMe·HCl、H-Hyp-OMe·HCl用液相合成方法合成了胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH，氨基酸原料廉价易得，工艺简捷，收率较高，为胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH提供了一种简单快捷、成本较低的液相合成方法。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实施例。实施例11、合成Boc-Gly-Pro-OMe在干燥的、经氮气吹扫的反应器中加入3.51g(0.02mol)Boc-Gly-OH，然后加入70mL无水二氯甲烷，冰浴并氮气保护下搅拌溶解；将5.26g(0.02mol)1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮溶解于55mL无水二氯甲烷后，逐滴加入到反应器中，滴加完后在氮气保护下冰浴搅拌反应4小时；然后加入2.7mL(0.024mol)N-甲基吗啉、3.65g(0.022mol)L-Pro-OMe·HCl，在氮气保护下室温搅拌反应72小时；将反应液30～40℃旋转蒸发除去二氯甲烷，加入80mL水和120mL乙酸乙酯，振荡后静置分液，取乙酸乙酯相，水相再用80mL乙酸乙酯萃取1次，合并有机相，依次用质量分数为10％的柠檬酸水溶液洗涤(100mL×2次)、质量分数为10％的碳酸氢钠水溶液洗涤(100mL×1次)，30～40℃旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到4.56gBoc-Gly-Pro-OMe，收率79.58％。2、合成Boc-Gly-Pro-OH将4.56gBoc-Gly-Pro-OMe置于反应容器中，加入50mL四氢呋喃与甲醇、质量分数为10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液，室温搅拌反应4小时，用1mol/L盐酸调节pH至4～5，旋转蒸发浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取(50mL×3次)，合并乙酸乙酯相，用无水硫酸钠干燥，30～40℃减压浓缩，干燥得4.95gBoc-Gly-Pro-OH。3、合成Boc-Gly-Pro-Hyp-OH在干燥的、经氮气吹扫的反应器中加入4.95g(0.0182mol)Boc-Gly-Pro-OH，然后加入70mL无水二氯甲烷，冰浴并氮气保护下搅拌溶解；将3.51g(0.0182mol)1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮溶解于55mL无水二氯甲烷后，逐滴加入到反应器中，滴加完后在氮气保护下冰浴搅拌反应4小时；然后加入2.4mL(0.0218mol)N-甲基吗啉、3.63g(0.0200mol)H-Hyp-OMe·HCl，在氮气保护下室温搅拌反应72小时；将反应液30～40℃旋转蒸发除去二氯甲烷，加入80mL水和120mL乙酸乙酯，振荡后静置分液，取乙酸乙酯相，水相再用80mL乙酸乙酯萃取1次，合并有机相，依次用质量分数为10％的柠檬酸水溶液洗涤(100mL×2次)、质量分数为10％的碳酸氢钠水溶液洗涤(100mL×1次)，30～40℃旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到5.59gBoc-Gly-Pro-Hyp-OMe，收率76.89％。将5.59gBoc-Gly-Pro-Hyp-OMe置于反应容器中，加入60mL四氢呋喃与甲醇、质量分数为10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液，室温搅拌反应4小时，用1mol/L盐酸调节pH至4～5，旋转蒸发浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取(50mL×3次)，合并乙酸乙酯相，用无水硫酸钠干燥，30～40℃减压浓缩，干本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种三肽‑29的液相合成方法，其特征在于所述方法由以下步骤组成：(1)合成Boc‑Gly‑Pro‑OMe以无水二氯甲烷为溶剂，将Boc‑Gly‑OH、1‑(4‑氯苯基)‑3‑(4‑甲基‑1‑哌嗪基)‑2‑丙炔‑1‑酮在氮气保护下冰浴搅拌反应2～4小时，然后加入N‑甲基吗啉、L‑Pro‑OMe·HCl，在氮气保护下室温搅拌反应24～72小时，将反应液旋蒸除去二氯甲烷，用水和乙酸乙酯萃取，有机相依次经质量分数为5％～10％的柠檬酸水溶液、质量分数为5％～10％的碳酸氢钠水溶液洗涤后，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到Boc‑Gly‑Pro‑OMe；(2)合成Boc‑Gly‑Pro‑OH将Boc‑Gly‑Pro‑OMe加入四氢呋喃与甲醇、5％～10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液中，室温搅拌反应2～4小时，用1mol/L盐酸调pH至4～5，旋转蒸发浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，干燥得Boc‑Gly‑Pro‑OH；(3)合成Boc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH按照步骤(1)的方法将Boc‑Gly‑Pro‑OH、1‑(4‑氯苯基)‑3‑(4‑甲基‑1‑哌嗪基)‑2‑丙炔‑1‑酮、N‑甲基吗啉、H‑Hyp‑OMe·HCl反应，得到Boc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OMe；然后按照步骤(2)的方法用四氢呋喃与甲醇、5％～10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液处理Boc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OMe，得到Boc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH；(4)合成H‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH向Boc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH中加入三氟乙酸与水体积比为95:5的混合液，室温搅拌反应1小时，浓缩反应液，将浓缩液加入冷乙醚中析出沉淀，离心除去上清，沉淀经乙醚洗涤、离心后真空干燥，得到H‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH粗品；H‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH粗品经C18反相HPLC纯化、冷冻干燥，得到胶原三肽H‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH，即三肽‑29。...

【技术特征摘要】
1.一种三肽-29的液相合成方法，其特征在于所述方法由以下步骤组成：(1)合成Boc-Gly-Pro-OMe以无水二氯甲烷为溶剂，将Boc-Gly-OH、1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮在氮气保护下冰浴搅拌反应2～4小时，然后加入N-甲基吗啉、L-Pro-OMe·HCl，在氮气保护下室温搅拌反应24～72小时，将反应液旋蒸除去二氯甲烷，用水和乙酸乙酯萃取，有机相依次经质量分数为5％～10％的柠檬酸水溶液、质量分数为5％～10％的碳酸氢钠水溶液洗涤后，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到Boc-Gly-Pro-OMe；(2)合成Boc-Gly-Pro-OH将Boc-Gly-Pro-OMe加入四氢呋喃与甲醇、5％～10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液中，室温搅拌反应2～4小时，用1mol/L盐酸调pH至4～5，旋转蒸发浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，干燥得Boc-Gly-Pro-OH；(3)合成Boc-Gly-Pro-Hyp-OH按照步骤(1)的方法将Boc-Gly-Pro-OH、1-(4-氯苯基)-3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-丙炔-1-酮、N-甲基吗啉、H-Hyp-OMe·HCl反应，得到Boc-Gly-Pro-Hyp-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张忠旗，李乾，王昕，韩广，范永刚，刘少军，王俊杰，杨小琳，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61