HBV变异体的检测和应用制造技术

本发明专利技术一般涉及的是特定物质表现出降低敏感性的病毒变异体和／或表现出与免疫药物相互作用下降的病毒变异体。更特别地，本发明专利技术涉及的是对核苷或核苷酸类似物表现出完全或者部分抗性和／或与针对病毒表面组分的抗体相互作用降低的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异体，包括对这些抗体的敏感性降低的乙型肝炎病毒变异体。本发明专利技术还涉及的是发现这些病毒变异体的检测，它们在针对病毒物质特别是ＨＢＶ变异体的抗病毒治疗方案的监测和新型或者修饰疫苗的开发方面是有用的。本发明专利技术还涉及使用病毒变异体筛选和／或开发，或者设计能够抑制病毒的感染、复制和／或释放的物质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
专利
本专利技术一般涉及的是对特定物质表现出降低敏感性的病毒变异体和/或表现出与免疫试剂相互作用下降的病毒变异体。更特别地，本专利技术涉及的是对核苷或核苷酸类似物表现出完全或者部分抗性的乙型肝炎病毒(HBV)变异体和/或与针对病毒表面组分的抗体相互作用降低的乙型肝炎病毒变异体，包括对这些抗体的敏感性降低的乙型肝炎病毒变异体。本专利技术还涉及发现这些病毒变异体的检测，它们在抗病毒治疗方案的监测和针对病毒物质特别是HBV变异体的新型或者修饰疫苗的开发方面是有用的。本专利技术还涉及病毒变异体筛选和/或开发、或者设计能够抑制病毒的感染、复制和/或释放的物质的用途。现有技术描述本说明中参考的出版物的文献详情收集在说明书的末尾。在本说明中对任何现有技术的参考不是，也不应当被理解为对该现有技术在任何国家构成常规的一般知识的承认或者任何形式的暗示。乙型肝炎病毒(HBV)可以导致使人衰弱无力的疾病状况，并且导致急性肝脏衰竭。HBV是通过RNA中间体复制的DNA病毒，在其复制策略中利用了逆转录(Summers和Mason，Cell 29403-415，1982)。HBV基因组具有复杂的性质，具有部分双链DNA结构和编码表面、核心、聚合酶和X基因的重叠的开放阅读框。附图说明图1中表示了HBV基因组的复杂性质。聚合酶由四个功能区域组成末端蛋白(TP)、间隔物、逆转录酶(rt)和核糖核酸酶(RNAse)。HBV的聚合酶基因与衣壳基因重叠，在聚合酶基因催化结构域中的突变也可以影响衣壳蛋白的核苷酸以及推导出来的氨基酸序列，反之亦然。特别地，在HBsAg内部的，位于氨基酸99和169之间的，被称为’a′决定簇的HBV中和结构域的基因序列，实际上与病毒聚合酶蛋白的主要催化区域特别是结构域A和B重叠。HBV DNA聚合酶的存在引出了核苷或者核苷酸类似物可以作为有效的抗病毒物质的主张。目前正在进行测试的核苷或者核苷酸类似物的实例是喷昔洛韦(penciclovir)及其口服形式(FCV)，拉米夫定(Lamivudine)；(3TC或者LMV)。已经进入临床试验的新型核苷或核苷酸类似物包括了嘧啶恩曲他滨(Emtricitabine)，((-)-β-L-2′-3′-双脱氧-5-氟-3′-硫代胞苷；FTC)，它是3TC的5-氟代衍生物，以及克拉夫定(Clevudine)(1-(2-氟-5-甲基-β-L-呋喃型阿拉伯糖基)尿嘧啶；L-FMAU)，一种胸腺嘧啶的类似物。如3TC一样，这些是具有非天然的“L”构型的嘧啶衍生物。有几种嘌呤衍生物也已经进入了临床试验；它们包括恩替卡韦(Entecavir)(BMS-200，475；ETV)，一种碳环形脱氧鸟嘌呤核苷类似物，二氨基嘌呤二氧戊烷(DAPD)，它是二氧戊烷乌嘌呤((-)-β-D-2-氨基嘌呤二氧戊环；DXG))的一种口服前体药，以及阿德福韦酯(Adefovir dipivoxil)，它是无环脱氧腺嘌呤核苷单磷酸核苷或者核苷酸类似物阿德福韦(9--腺嘌呤；PMEA)的一种口服前体药。处于临床前和临床研究中的其它药物包括FLG，ACH-126，443(L-d4C)]，ICN 2001-3(ICN)和Racivir(RCV)。尽管这些物质可以高效抑制HBV的DNA合成，但是在长时间的抗病毒化疗中可能出现HBV的抗性突变体。在接受长期LMV治疗的患者中，在聚合酶内部rt结构域选出主要抗性突变位于rtM204I/V+/-rtL180M，以及其它突变。用于聚合酶突变的命名法根据的是Stuyver等人，2001，见前。LMV是核苷或核苷酸类似物，已经被批准用于慢性HBV感染。LMV是HBV复制特别有效的抑制剂，它通过抑制病毒DNA合成降低了原位肝脏移植(OLT)后慢性感染患者血清中HBV DNA的滴度。LMV的单纯治疗看起来不可能长期控制HBV的复制。这是因为抗LMV的HBV毒株的出现在单纯治疗中看起来是不可避免的。阿德福韦酯(ADV以前称为bis-pom PMEA)是无环脱氧腺嘌呤核苷单磷酸类似物阿德福韦(以前称为PMEA)(图2)的口服前体药。ADV也是HBV复制的有效抑制剂，最近获得FDA的批准用于慢性HBV感染。阿德福韦酯与该类型中的其它物质不同之处在于它是核苷酸(相对于核苷)类似物，这样就绕过了药物激活过程中的第一个磷酸化反应。这个步骤通常是限速的。阿德福韦酯表现出针对野生型HBV和抗拉米夫定HBV毒株的临床活性，现在正在进行三期临床试验(Gilson等人，J Viral Hepat 6387-395，1999；Perrillo等人，Hepatology32129-134，2000；Peters等人，Transplantation 681912-1914，1999；Benhamou等人，Lancet 358718-723，2001)。在二期研究中每天30mg剂量的阿德福韦酯在12周后病毒血中产生了平均41og10的下降(Heathcote等人，Hepatology 28A620，1998)。ADV是取代的无环核苷膦酸酯。这类化合物还包括泰诺福韦延胡索酸酯(也被称为泰诺福韦DF，或者泰诺福韦，或者(TFV)或者9-R-(2-膦酰甲氧基丙基)腺嘌呤(PMPA)，由Gilead sciences推向市场，名称为Viread)。TFV具有抗HBV和HIV的抗病毒活性(Ying等人，J Viral Hepat.7(2)161-165，2000；Ying等人，J.ViralHepat.7(1)79-83，2000；Suo等人，J Biol Chem.273(42)27250-27258.1998)。FTC具有抗HBV和HIV的活性(Frick等人，AntimicrobAgents Chemother 37.2285-2292，1993)。核苷或者核苷酸类似物疗法可以以单纯疗法或者组合疗法进行给药，其中可以给服两个或者更多核苷或核苷酸类似物。核苷或者核苷酸类似物还可以与其它抗病毒物质例如干扰素或者乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)组合给药。需要对抗核苷/核苷酸类似物或者抗体的HBV毒株之出现进行监测，并且开发诊断实验方案以检测这些抗性病毒，和/或使用这些变异体毒株筛选和/或开发或设计具有特殊性质的物质，这些物质的性质使它们可以用作抗病毒物质。这些抗性毒株的缺陷形式或者来自它们的抗原性组分、以及针对病毒表面组分的抗体也被认为在治疗性疫苗组合物的开发中有用。专利技术概述在贯穿本说明中，除非有上下文的需要，词语“包括”或者其变体例如“包含”或者“含有”，被理解为表示包括了所示的元件或者整体或者元件或个体组，但不排除包括任何其它的元件或者个体或者元件或个体组。使用序列标识符编号(SEQ ID NO)提及核苷酸和氨基酸序列。SEQID NO s按照编号对应序列标识符<400>1(SEQ ID NO1)，<400>2(SEQ ID NO2)等等。在表1中总结了序列标识符。在权利要求之后给出了序列表。氨基酸序列中的特定突变在这里表示为″Xaa1nXaa2″，其中Xaa1是突变前原来的氨基酸残基，n是残基编号，Xaa2是突变的氨基酸。缩写″Xaa″可以是三字母或者单字母(即本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异体，其中所述变异体包含编码ＤＮＡ聚合酶的基因中的核苷酸突变，所述突变导致所述ＤＮＡ聚合酶至少一个氨基酸的添加、替换和／或缺失，且其中所述变异体对选自由下面各项组成的清单中的一个或者多个核苷或核苷酸类似物表现出降低的敏感性：ＡＤＶ，ＬＭＶ，ＴＦＶ或ＦＴＣ；ＡＤＶ和ＬＭＶ；ＡＤＶ和ＴＦＶ；ＬＭＶ和ＴＦＶ；ＦＴＣ和ＡＤＶ；ＦＴＣ和ＴＦＶ；ＦＴＣ和ＬＭＶ；ＡＤＶ和ＬＭＶ和ＴＦＶ；ＡＤＶ和ＦＴＣ和ＴＦＶ；ＴＦＶ和ＦＴＣ和ＬＭＶ；ＡＤＶ和ＬＭＶ和ＦＴＣ；ＡＤＶ和ＦＴＣ和ＬＭＶ和ＴＦＶ，以及其它核苷或核苷酸类似物，和／或抗ＨＢＶ物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：AI巴塞洛缪兹，SA洛卡尼尼，A艾尔斯，LKW延，JJ萨萨多伊兹，
申请(专利权)人：墨尔本保健公司，奥斯丁保健公司，南方保健公司，贝赛德保健公司，圣文森特医院墨尔本有限公司，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]