一种快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法，将切除部分须根的节瓜幼苗茎基部浸于浓度为１５０～２５０ｍｇ／Ｌ的镰刀菌酸溶液中，在２０～２７℃条件下浸泡６～９ｈ后，将尚存活无萎蔫或极少萎蔫的幼苗在常规育苗条件下进行恢复培养，待幼苗恢复生长后移栽到田间即可。该方法具有适应性广，选择效率高，实用性强，对环境影响小的特点。

A method for rapid screening of Chieh qua blight resisting variant

The present invention provides a method for rapid screening of Chieh qua blight resisting variant chiehqua seedlings, stem base will remove part of fibrous roots soaked in the concentration of 150 ~ 250mg / L fusaric acid solution, in 20 ~ 27 Deg. C for 6 ~ 9h, will still survive without wilting or little wilting of seedlings recovery training in the conventional breeding conditions for seedling growth recovery after transplanting into the field. The method has the advantages of wide adaptability, high selection efficiency, strong practicability and little influence on environment.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于农业

技术介绍
节瓜枯萎病是节瓜的主要病害之一，给节瓜生产造成严重损失。目前节瓜种质资源中抗 枯萎病材料较为缺乏，是节瓜抗病育种的瓶颈。目前通用的筛选枯萎病突变体的方法是通过自然发病筛选或苗期人工接种筛选，前者须 在发病年份、发病严重的田块进行，受自然条件和季节的限制；后者虽然可以在人工控制条 件下进行，但必须有严格的隔离条件，以防病菌扩散到田间。研究者曾建立利用离体筛选技术筛选节瓜抗枯萎病无性系的方法，与常规利用枯萎病菌 接种筛选的方法相比，可以提高筛选效率，节省土地，并且可以避免病菌污染环境。但离体 筛选技术的不足是必须依赖于成熟的离体培养和植株再生体系，而目前节瓜离体再生体系受 品种类型的制约，有些品种至今无法建立成熟稳定的离体再生体系，因而难以进行抗枯萎病 材料的离体筛选。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该方法具有适应性广， 选择效率高，实用性强，对环境影响小的特点。本专利技术在幼苗水平上利用镰刀菌酸筛选抗枯萎病变异材料，兼有苗期人工接种筛选不依 赖于成熟稳定离体培养体系，适应性广的特点，以及抗性离体筛选不受季节自然条件限制， 可以避免病菌污染环境的特点， 一旦筛选出抗性材料，即可立即种植到田间。为达到上述目的，本专利技术提供的快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法，将切除部分须根 的节瓜幼苗茎基部浸于浓度为150~250mg/L的镰刀菌酸溶液中，在20 27条件下浸泡6~9h 后，将尚存活无萎蔫或极少萎蔫的幼苗在常规育苗条件下进行恢复培养，待幼苗恢复生长后 移栽到田间即可。其中，所述节瓜幼苗的培育过程为取节瓜种子用水浸泡3 5h，在30'C恒温箱中催芽， 待种子萌发后播种于育苗盘中，按正常育苗程序育苗。进一步的，在按正常育苗程序育苗后，待节瓜幼苗达到1片真叶展开至2叶1心时移出3植株，用水洗净根部育苗基质，切除部分须根即可。优选的，将所述切除部分须根的节瓜幼苗茎基部浸于镰刀菌酸溶液中在23 27'C浸泡8h。 所述镰刀菌酸的浓度为195~205mg/L。所述镰刀菌酸溶液的配制过程为取商品镰刀菌酸，先用少量乙醇溶解后，再用纯净水 配制成溶液。本专利技术具有以下优点(1) 田间自然筛选方法应用的前提是田间必须有节瓜枯萎病发生，同时发病群体的大小、 病害发生的严重程度均会影响选择效果；利用本专利技术镰刀菌酸进行苗期抗枯萎病变异体快速 筛选在人工胁迫的条件下进行筛选，胁迫压力可以人工控制，不受自然气候条件及病害是否 发生的限制，可以更快地筛选出具有强抗性的材料；(2) 与苗期人工接种筛选方法相比，利用镰刀菌酸进行苗期抗枯萎病变异体快速筛选不 用活菌进行接种，且工作可以在实验室条件下进行，不仅可以节省土地，还可以避免因人工 接种不慎而导致病菌污染环境；(3) 与抗枯萎病变异体离体筛选方法相比，利用镰刀菌酸进行苗期抗枯萎病变异体快速 筛选不依赖于成熟的组织培养技术，应用的范围较广，可广泛应用于各种节瓜育种材料。附图说明图1是切除幼苗全部根系对镰刀菌酸FA胁迫下幼苗萎蔫指数的影响； 图2是切除部分须根对镰刀菌酸FA胁迫下幼苗萎蔫指数的影响；图3是感病材料A06在不同浓度镰刀菌酸和不同浸泡时间条件下对节瓜幼苗萎蔫指数的 影响；图4是抗病材料A02在不同浓度镰刀菌酸和不同浸泡时间条件下对节瓜幼苗萎蔫指数的影响。具体实施例方式以下实施例仅用于阐述本专利技术，而本专利技术的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所述
的普通技术人员依据以上本专利技术公开的内容和各参数所取范围，均可实现本专利技术的 目的。第一部分快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法实施例1本实施例提供的快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法如下将切除部分须根的节瓜幼苗茎基部浸于浓度为150 250mg/L的镰刀菌酸溶液中，在20 25'C条件下浸泡6 9h后，将尚存 活无萎蔫或极少萎蔫的幼苗在常规育苗条件下进行恢复培养，待幼苗恢复生长后移栽到田间 即可。 实施例2本实施例提供的快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法如下将切除部分须根的节瓜幼苗茎基部浸于浓度为150 250mg/L的镰刀菌酸溶液中，在25 27'C条件下浸泡6 9h后，将尚存 活无萎蔫或极少萎蔫的幼苗在常规育苗条件下进行恢复培养，待幼苗恢复生长后移栽到田间 即可。其中，节瓜幼苗的培育过程为取节瓜种子用水浸泡3 5h，在3(TC恒温箱中催芽，待种 子萌发后播种于育苗盘中，按正常育苗程序育苗，待节瓜幼苗达到1片真叶展开至2叶1心 时，移出植株，用水洗净根部育苗基质，切除部分须根即可。镰刀菌酸溶液的配制过程为取商品镰刀菌酸，先用少量乙醇溶解后，再用纯净水配制 成溶液。 实施例3本实施例提供的快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法如下(1) 将节瓜种子用清水浸种4h，在30'C恒温箱中催芽，待种子萌发后播种于育苗盘中， 按正常育苗程序育苗；(2) 待节瓜幼苗1片真叶展开到2叶1心时，小心移出植株，用水轻轻洗净根部育苗基 质，采用切除部分须根；(3) 将商品镰刀菌酸用少量无水乙醇溶解后，用纯净水配成200mg/L溶液；(4) 将切除部分须根的幼苗置于10ml试管中，加入浓度为200mg/L的镰刀菌酸溶液，是 幼苗茎基部浸于溶液中，在25。C土2t:条件下浸泡8h后，将尚存活无萎蔫或极少萎蔫的幼苗 重新转到育苗盘中在常规育苗条件下进行恢复培养，待幼苗恢复生长后移栽到田间。第二部分节瓜抗镰刀菌酸的离体筛选2.1试验材料选用节瓜抗病品种A02和感病品种A06进行镰刀菌酸抗性筛选试验； 镰刀菌酸为Sigma公司产品，配制时先用少量无水乙醇溶解，再用纯净水配成不同浓度 的溶液。2.2筛选方法52.2.1幼苗处理方法的确定将节瓜种子播种于育苗盘中，幼苗1片真叶展开到2叶1心时，小心移出植株，用水轻 轻洗净根部育苗基质，采用切除部分须根、切除全部根系2种方法处理方式，将幼苗基部浸 于镰刀菌酸FA浓度为200mg/L溶液中，每隔lh观察萎蔫情况，统计萎蔫指数，确定适宜的 幼苗处理方式。2.2.2镰刀菌酸浓度的确定利用切除须根的幼苗处理方法，将幼苗基部浸于FA浓度分别为50、 100、 200、 400mg/L 的溶液中，每隔lh观察萎蔫情况，统计萎蔫指数，确定适宜的镰刀菌酸处理方式。 2.2.3筛选方法有效性的验证选用抗镰刀菌酸技术筛选出的3个抗性株系，用苗期人工接种法(传统的抗性鉴定技术) 进行抗性验证，调査其病情指数。 2.3实验结果 2.3.1幼苗处理方法的确定利用切除部分须根、切除全部根系2种幼苗处理方法，分别将不同处理的幼苗浸于镰刀 菌酸FA浓度为200mg/L的溶液中，观察其幼苗萎蔫情况。如附图l所示，发现切除全部根系的处理无论是抗病材料或感病材料，浸泡2h即可观察 到萎蔫现象，但抗病材料和感病材料的萎蔫指数均同步上升，至浸16h，感病材料A06的萎 蔫指数达到60%，抗病材料的萎蔫指数也达到73%，虽然抗/感材料间有一定差异，但区分度 不够明显。如附图2所示，切除部分须根的处理中，感病材料从浸泡2h后植株就开始萎蔫，且萎蔫 指数随时间延长而快速上升，至浸泡16h，萎蔫指数已达到75%;而抗病材料则表现出对镰 刀菌酸的高度耐受性，直至浸泡10h才开始出现萎蔫症状。因此认为切除部分须根的幼苗处理方式可以将抗性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法，其特征在于，将切除部分须根的节瓜幼苗茎基部浸于浓度为１５０～２５０ｍｇ／Ｌ的镰刀菌酸溶液中，在２０～２７℃条件下浸泡６～９ｈ后，将尚存活无萎蔫或极少萎蔫的幼苗在常规育苗条件下进行恢复培养，待幼苗恢复生长后移栽到田间即可。

【技术特征摘要】
1、一种快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法，其特征在于，将切除部分须根的节瓜幼苗茎基部浸于浓度为150～250mg/L的镰刀菌酸溶液中，在20～27℃条件下浸泡6～9h后，将尚存活无萎蔫或极少萎蔫的幼苗在常规育苗条件下进行恢复培养，待幼苗恢复生长后移栽到田间即可。2、 根据权利要求1所述的快速筛选节瓜抗枯萎病变异体的方法，其特征在 于，所述节瓜幼苗的培育过程为取节瓜种子用水浸泡3~5h，在3(TC恒温箱中 催芽，待种子萌发后播种于育苗盘中，按正常育苗程序育苗...

【专利技术属性】
技术研发人员：何晓明，谢大森，彭庆务，赵芹，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蔬菜研究所，
类型：发明
国别省市：81[]