棉花ＤＮＡ纤维原位杂交技术制造技术

本发明专利技术提供了一种棉花ＤＮＡ纤维荧光原位杂交（Ｆｉｂｅｒ－ＦＩＳＨ）方法，该方法采用刀切法制备细胞核，引流法拉伸ＤＮＡ纤维，分别以基因组和４５ＳｒＤＮＡ为探针进行ＤＮＡ纤维荧光原位杂交。刀切法提取细胞核，在提取液中加入ＰＶＰ４０等酚类结合物质，并避免使用巯基乙醇等有害药品，成功率达到１００％；引流法拉伸ＤＮＡ纤维，避免了液体表面张力的影响，消除因载玻片推抹用力不均而导致ＤＮＡ纤维堆积和断裂，所制备的ＤＮＡ纤维平直均匀完整；基因组ＤＮＡ和４５Ｓ　　ｒＤＮＡ以缺刻平移法或随机引物法标记探针进行ＤＮＡ纤维荧光原位杂交，获得清晰明亮的信号图像。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＤＮＡ纤维荧光原位杂交方法，其包括步骤：１）将细胞核悬液滴在或涂抹在载片Ａ上，用细胞核裂解液裂解细胞核，用另一载片Ｂ的一端轻触裂解缓冲液，并将载片Ａ一端慢慢抬起，同时载片Ｂ拉着液体向下涂抹，再经固定、干燥得ＤＮＡ纤维；２）用设计的探针进行荧光原位杂交。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭仁海，王坤波，宋国立，王春英，张香娣，刘方，黎绍惠，王玉红，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]