不同产地明党参植物的分子鉴别方法技术

本发明专利技术涉及不同产地明党参植物的分子鉴别方法。该方法在对不同产地明党参植物进行总ＤＮＡ提取、ＰＣＲ扩增、ｒＤＮＡ　　ＩＴＳ序列测定、分析等过程的基础上，找到了鉴别不同产地明党参植物的碱基位点。当待检测明党参植物的ｒＤＮＡ　　ＩＴＳ序列与本发明专利技术公开的各产地明党参的ＤＮＡ序列相符或有该产地明党参的特异性位点时为该产地的明党参。根据不同产地明党参植物的ｒＤＮＡ　　ＩＴＳ序列，设计出可鉴别道地产区（江苏句容）明党参的高特异性鉴别引物，能成功进行道地产区明党参植物的高特异性ＰＣＲ鉴别。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种不同产地明党参植物的ＤＮＡ分子鉴别方法，建立不同产地明党参植物的ｒＤＮＡＩＴＳ区，包括部分ＩＴＳ１序列及完整的５．８Ｓ和ＩＴＳ２的序列数据库及各产地明党参植物的特异性鉴别位点，其特征是按如下步骤进行：（１）总ＤＮＡ提取取待检明党参植物新鲜的叶片，用无菌水处理后，在液氮中研磨成细粉，用ＣＴＡＢ法提取总ＤＮＡ，然后用北京莱博生物实验材料研究所生产的ＤＮＡ纯化回收试剂盒纯化，溶解于灭菌双蒸水中：（２）ＰＣＲ扩增明党参ＩＴＳ区扩增的引物为ＩＴＳ区通用引物ＩＴＳ４和ＩＴＳ５，引物序列为：ＩＴＳ４：５′－ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ－３′，位于１８Ｓ上；ＩＴＳ５：５′－ＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ－３′，位于２６Ｓ上；利用该对引物对总ＤＮＡ进行扩增反应，并以ｄｄＨ↓［２］Ｏ代替模版ＤＮＡ作空白对照；（３）ＤＮＡ序列测定测序采用ＰＣＲ产物直接测序法，单向测序，测序引物为ＰＣＲ扩增引物ＩＴＳ５，测序反应在ＡＢＩ３７３０全自动测序仪上进行；（４）ＤＮＡ序列数据分析及植物来源的鉴别待检明党参植物的ｒＤＮＡＩＴＳ区的序列一经测定，用对位排列软件（ＣＬＵＳＴＡＬ软件）进行对位排列，并辅以人工校对，用遗传分析软件（ＭＥＧＡ软件）分析待检样品ＤＮＡ序列与数据库中各序列的差异，通过分析比较，最终判定待检明党参植物的来源。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韦阳连，杭悦宇，高兴，顾子霞，赵亚美，吴宝成，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]