珠基测序的试剂、方法和文库技术

本发明专利技术提供了通过沿单链模板进行双链体延伸的连续循环测定核酸序列的方法。该循环包括以下步骤：延伸、连接、优选切割。在某些实施方式中，所述方法利用了含有硫代磷酸酯连接的延伸探针，并利用了适合切割这种连接的物质。在某些实施方式中，所述方法利用了含有脱碱基残基或损伤碱基的延伸探针，并利用了适合切割核苷和脱碱基残基之间的连接的物质和／或适合去除核酸中的损伤碱基的物质。本发明专利技术提供了用至少两种区别标记的探针家族测定序列信息的方法。在某些实施方式中，该方法在每个循环中从模板的多个核苷酸中各自获得小于２位信息。在某些实施方式中，对连接于珠的模板进行测序反应，该珠固定在半固体支持物中或之上。本发明专利技术还提供了适用于该方法的含有硫代磷酸酯连接或引发残基的标记的延伸探针组。此外，本发明专利技术包括去除起始寡核苷酸和延伸链以及用不同起始寡核苷酸进行后续反应，从而在一个模板上进行多个测序反应。本发明专利技术还提供了制备模板，特别是对多种不同模板进行平行测序的有效方法。本发明专利技术也提供了进行连接和切割的方法。本发明专利技术也提供了含有成对标签的核酸片段新文库、制备连接有多种不同模板（如含有成对标签）的微粒和单独测序这些模板的方法。本发明专利技术也提供了自动化测序系统、流动室、图像加工方法和储存计算机可执行指令（如进行图像加工方法）和／或序列信息的计算机可读介质。在某些实施方式中，将序列信息储存于数据库中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
一种鉴定模板多核苷酸内核苷酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：　　　　（ａ）通过将寡核苷酸探针与起始寡核酸连接形成延长的双链体而使所述起始寡核苷酸沿所述模板多核苷酸延伸，其中所述寡核苷酸探针包含硫代磷酸酯连接；　　　　（ｂ）鉴定所述多核苷酸的一个或多个核苷酸；和　　　　（ｃ）重复步骤（ａ）和（ｂ），直到测定出核苷酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：K麦柯南，A布兰查德，L科特勒，G科斯塔，
申请(专利权)人：AB先进基因分析公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]