自体真皮成纤维细胞的剂量单位调配物制造技术

剂量单位由自体细胞疗法产品组成，所述产品由针对待治疗的每个个体所生长的成纤维细胞构成。使用现行良好制造规范(CGMP)和标准组织培养程序从每个个体自身皮肤的活检体生长的自体成纤维细胞的悬浮液在含有具有至少98％成纤维细胞纯度以及至少85％成活力的低温保存的成纤维细胞或其前驱体的小瓶中供应，用于以1.0‑2.0×107个细胞/毫升的浓度投予1到6mL、优选2mL的细胞。当注射到鼻唇沟皱纹(鼻侧上延伸到嘴角的皱褶)中时，认为自体成纤维细胞会增加细胞外基质组分(包括胶原蛋白)的合成，从而减轻这些皱纹的严重程度。已证实投药剂量和时机对达成临床上显著的成果至关重要。

Dose unit regulator of autologous dermal fibroblasts

The dose unit is made up of autologous cell therapy products, which are made up of fibroblasts grown by each individual treated by a needle. The use of current good manufacturing practices (CGMP) and standard tissue fibroblast cell suspensions with at least 98% and at least 85% purity fibroblast viability of cryopreserved fibroblast cells or their precursor vial supply in culture with growth from each individual body biopsy procedures of their skin autograft, for 1 2 x 107 cells / mL concentration for 1 to 6mL, preferably 2mL cells. When injected into the nasolabial fold (extending on the nasal side to the wrinkles of the corners of the mouth), it is considered that autologous fibroblasts will increase the synthesis of extracellular matrix components (including collagen), thereby lighten the severity of these wrinkles. The dose and timing of the drug have been confirmed to be crucial to achieving a significant clinical outcome.

【技术实现步骤摘要】
自体真皮成纤维细胞的剂量单位调配物
本专利技术关于经过分离和制备的自体真皮成纤维细胞的剂量单位调配物，其用于在一个部位注射以供修复和/或长期改善人类个体的皮肤和软组织缺陷。
技术介绍
如美国专利第5,591,444号、第5,660,850号、第5,665,372号以及第5,858,390号中所述，个体皮肤中的美容和审美缺陷可以通过将自体真皮成纤维细胞的悬浮液注射到较邻近于缺陷的真皮和皮下组织中来矫正。可以通过此方法矫正的典型缺陷包括皱皮、萎缩纹、凹陷性瘢痕、非外伤来源的皮肤凹陷、由寻常痤疮引起的瘢痕以及唇部发育不全。所述细胞与个体组织相容，优选地通过培养从个体获取的活检标本而得到，并且已通过在细胞培养系统中继代培养而扩增。将材料(“注射物(injectate)”)注射到体内并且尤其注射到面部以产生美学效果从接近十九世纪开始。举例来说，注射石蜡来矫正面部轮廓缺陷在第I次世界大战之前多年中享有一段短暂的接受期。然而，并发症和长期结果不能令人满意的性质导致放弃了实施。可注射硅酮的可用性使得这些事件在1960年代早期开始实质上重现。专门制造的“医用级”硅酮溶液，例如道康宁(DowCorning)MDX4.4011，已在美国的许多经过批准的测试中心在实验的基础上加以使用。并发症，如对硅酮的局部和全身反应、注射物迁移以及局部组织崩塌，限制了硅酮注射液的使用。通过注射非生物性材料而获得的不良结果促使尝试使用外来蛋白质(尤其牛胶原蛋白)作为注射物。虽然未经过加工的牛胶原蛋白对于注射到人体内来说具有过度免疫原性，但是通过酶促降解而去除牛胶原蛋白的C端和N端肽会得到一种材料(“去端肽胶原蛋白(atelocollagen)”)，如果患者经过预筛选以排除那些具有免疫反应性的患者，那么所述材料可按有限量使用。虽然被广泛使用，但是所述材料与约90％的个体中产生抗牛抗体以及约1-3％的个体中的明显免疫并发症相关联。德鲁斯特F.(DeLustro,F.)等人,1987,整形与改造外科学(PlasticandReconstructiveSurgery)79:581。呈溶液形式的去端肽胶原蛋白经证实不能完全令人满意，这是因为所述材料在相对较短时间内被个体从注射部位吸收而不被主体材料替换。通过戊二醛交联、随后通过细筛过滤并剪切来延长在体内的滞留。然而，增加以及不规律的粘度使得所述材料难以使用。完全来源于个体自身组织样品的注射用的人类胶原蛋白是可用的，但是没有证据表明人类胶原蛋白注射液比牛胶原蛋白注射液更持久。这些问题通过开发自体成纤维细胞制剂来解决。然而，有了问题的解决方案并不代表有了已通过反复试验验证并通过临床试验确认，并且已遵照美国食品药品管理局(U.S.FoodandDrugAdministration)的要求制造并包装，按规定剂量稳定存储的产品。因此，本专利技术的一个目标在于提供自体真皮成纤维细胞的规定剂量单位调配物，用于注射到患者体内以供修复和长期改善皮肤缺陷。本专利技术的另一个目标在于提供含有干细胞、前驱细胞或部分分化的细胞的剂量单位调配物，其可用于修复和长期改善皮肤缺陷。
技术实现思路
剂量单位由自体细胞疗法产品组成，所述产品由针对待治疗的每个个体所生长的成纤维细胞构成。使用现行良好制造规范(CGMP)和标准组织培养程序从每个个体自身皮肤的活检体生长的自体成纤维细胞的悬浮液在含有具有至少98％成纤维细胞纯度以及至少85％成活力的低温保存的成纤维细胞或其前驱体的小瓶中供应，用于以1.0-2.0×107个细胞/毫升的浓度分三次，约间隔五周投予1到6mL、优选2mL的细胞，每线性厘米长度注射0.05到0.5mL。通过在无蛋白质的培养基中培育经过扩增的成纤维细胞一段时间，使得经过继代培养的真皮成纤维细胞实质上不含培养基中所存在的免疫原性蛋白质。当注射到鼻唇沟皱纹(鼻侧上延伸到嘴角的皱褶)中时，认为自体成纤维细胞会增加细胞外基质组分(包括胶原蛋白)的合成，从而减轻这些皱纹的严重程度。已证实投药剂量和时机对达成临床上显著的成果至关重要。虽然在美国(US)有若干种经过批准的疗法用于治疗鼻唇沟皱纹，如JuvédermTM以及但是成纤维细胞悬浮液并不属于与这些产品相同的药理学类别。这些产品是注射到面部组织中以通过暂时为面部组织增加体积来平复皱纹和沟的结构填充剂。成纤维细胞剂量调配物通过一种极为不同的提议作用机理而起作用。本文所述的剂量调配物单位适用于治疗皱皮、鼻唇和唇颊沟、口周纹、外眼角纹、眶周纹以及眉间纹。成纤维细胞剂量调配物还适用于提供用于组织修复和再生的多能细胞。附图说明图1为标准化制造工艺流程图。图2为来自伯恩(Byrne)2008人类分子遗传学(Hum.Mol.Gen.)17:R37-R41的示意图，其展示使用外遗传重编程可使源自皮肤的成纤维细胞去分化成多能干细胞的方式，所述多能干细胞接着可分化成神经细胞、心肌细胞、β胰岛细胞以及造血细胞。图3为可使成纤维细胞去分化成多能细胞的方法的示意图：细胞融合(科文(Cowan)等人,2005)、直接重编程(高桥(Takahashi)等人,2007)以及体细胞核转移(伯恩(Byrne)等人,2007)。图4为用于医师客观评估的痤疮瘢痕严重程度的活动期分级，即“评估者活动期痤疮瘢痕评估量表(EvaluatorLiveAcneScarAssessmentScale)”中的图解，所述量表采用在直接和切线照明下相对瘢痕外观的比较性评估。具体实施方式已开发出一种自体成纤维细胞产品。所述细胞疗法产品是由使用标准组织培养程序从每个个体自身皮肤的活检体生长的自体成纤维细胞的悬浮液构成。从患者耳后区域提取皮肤组织(真皮和表皮层)的活检体并且经由次日送达在2-8℃下运送到制造设施。将经由酶消化从组织分离的成纤维细胞扩增到足以注射到患者的目标治疗区域中的量。细胞疗法产品由经过扩增的成纤维细胞组成，这些成纤维细胞被调配成目标细胞疗法产品的细胞浓度且在冷冻小瓶中低温保存，称为冷冻小瓶装散装原料药。最终细胞疗法产品由解冻的散装细胞疗法产品-经过解冻、洗涤并且准备用于患者注射的冷冻小瓶细胞组成。最初销售批准是用于治疗中度到重度鼻唇沟皱纹。当前临床开发集中于治疗真皮轮廓畸形、声带瘢痕、牙龈退缩、限制性烧伤瘢痕以及痤疮瘢痕。如下文所论述，视待治疗的病状而定，剂量和投药方案有所不同。虽然确切机理未知，但是认为构成成纤维细胞剂量调配物的活性组分的自体成纤维细胞当注射到患者皮肤中时会增加细胞外基质组分(如胶原蛋白)的合成，由此增强皮肤完整性并且最终使得细纹和皱纹减少。本文中使用以下定义：ATM分析测试法AZFICEL-T自体培养的成纤维细胞的USAN名称散装收集物(BULKHARVEST)在最终收集之后、在低温保存培养基中调配之前的材料CGMP现行良好制造规范CS细胞堆叠DMEM达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco'sModificationofEagle'sMedium)DMSO二甲亚砜注射用药品(DRUGPRODUCT-INJECTION)经过洗涤并于DMEM中重新调配、装入小瓶并且准备运送到临床场所的材料冷冻小瓶装原料药(DRUGSUBSTANCE-CRYOVIAL)在低温保存培养基中调配并且等分装入冷冻小瓶中的材料EDT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种剂量调配物，其包含1.0×10

【技术特征摘要】
2010.05.07 US 12/776,1631.一种剂量调配物，其包含1.0×107到2.7×107个细胞/毫升，其中至少98％的所述细胞是自体人类成纤维细胞或其前驱体，其中至少85％为存活的；以及可选的低温保存培养基；其中所述成纤维细胞经通过采用针对CD104的抗体以去除角化细胞来纯化，且所述成纤维细胞进一步通过采用针对CD90的抗体以确认身份；其中所述成纤维细胞与染料试剂—起培育，所述染料试剂包含两种染料：将所有有核细胞染色的膜可渗透性染料及只将受损细胞或垂死细胞染色的膜不可渗透性染料；以及其中与所述染料试剂—起培育的所述成纤维细胞进一步由PCA系统进行分析。2.如权利要求1所述的剂量调配物，其包含由伊斯科夫改良达尔伯克培养基(Iscove'sModifiedDulbecco'sMedium，IMDM)和ProfreezeTM加7.5％二甲亚砜(DMSO)组成的低温保存培养基。3.如权利要求1所述的剂量调配物，其中98％或更多的所述细胞是成纤维细胞。4.如权利要求1所述的剂量调配物，其包含1、2、3或6mL。5.一种有效量的包含1.0×107到2.7×107个细胞/毫升的剂量调配物在制备用于治疗皮肤缺陷的药物中的应用，其中至少98％的所述细胞是自体人类成纤维细胞，其中至少85％为存活的，其中所述成纤维细胞经通过采用针对CD104的抗体以去除角化细胞来纯化且所述成纤维细胞进一步通过采用针对CD90的抗体以确认身份；其中所述成纤维细胞与染料试剂—起培育，所述染料试剂包含两种染料：将所有有核细胞染色的膜可渗透性染料及只将受损细胞或垂死细胞染色的膜不可渗透性染料；其中与所述染料试剂—起培育的所述成纤维细胞进一步由PCA系统进行分析；以及所述调配物是用于两次或三次治疗，所述治疗隔开四周或五周加减七到十天。6.如权利要求5所述的应用，其用于治疗皱皮、鼻唇和唇颊沟、口周纹、外眼角纹、眶周纹以及眉间纹。7.如权利要求5所述的应用，其包括每线性厘米长度注射0.05到0.5mL的所述剂量调配物。8.如权利要求5所述的应用，其包括在每次治疗中注射2到6mL。9.一种有效量的包含1.0×107到2.7×107个细胞/毫升的剂量调配物在制备用于治疗鼻唇沟皱纹的药物中的应用，其中至少98％的所述细胞是自体人类成纤维细胞，其中至少85％为存活的，其中所述成纤维细胞经通过采用针对CD104的抗体以去除角化细胞来纯化，且所述成纤维细胞进一步通过采用针对CD90的抗体以确认身份；其中所述成纤维细胞与染料试剂—起培育，所述染料试剂包含两种染料：将所有有核细胞染色的膜可渗透性染料及只将受损细胞或垂死细胞染色的膜不可渗透性染料；其中与所述染料试剂—起培育的所述成纤维细胞进一步由PCA系统进行分析；以及所述治疗包括每个治疗期投予1到2mL的所述剂量调配物，所述剂量调配物以每线性厘米长度0.1mL的剂量分布注射到所述皱纹的浅表乳头状真皮中，所述治疗持续三个治疗期，所述治疗期隔开五周加减七到十天。10.一种有效量的包含1.0×107到2.7×107个细胞/毫升的剂量调配物在制备用于治疗多个面部区域中的皱皮的药物中的应用，其中至少98％的所述细胞是自体人类成纤维细胞，其中至少85％为存活的，其中所述成纤维细胞经通过采用针对CD104的抗体以去除角化细胞来化纯，且所述成纤维细胞进一步通过采用针对CD90的抗体以确认身份；其中所述成纤维细胞与染料试剂—起培育，所述染料试剂包含两种染料：将...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·马斯洛斯基，
申请(专利权)人：法布罗赛尔科技公司，
类型：发明
国别省市：美国,US