HIVp-17肽片段、含有该片段的组合物及其制造和使用方法技术

一种含有取自如下序列的部分或全部的约３０至５０连续氨基酸的肽： １ ５ １０ Ｘａａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｘａａ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｘａａ Ｘａａ Ｌｅｕ Ｘａａ Ｘａａ Ｖａｌ Ｈｉｓ １５ ２０ ２５ Ｘａａ Ｘａａ Ｉｌｅ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｘａａ ３０ ３５ ４０ Ｘａａ Ｘａａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｘａａ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｘａａ Ｘａａ Ｔｈｒ ４５ ５０ ５５ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ａｌａ Ａｓｐ Ｘａａ Ｇｌｙ Ｘａａ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１） 其中位置１的Ｘａａ是Ａｒｇ、Ｌｙｓ或Ｉｌｅ； 位置４的Ｘａａ是Ｔｙｒ、Ｐｈｅ或Ｈｉｓ； 位置８的Ｘａａ是Ａｌａ或Ｖａｌ； 位置９的Ｘａａ是Ｔｈｒ或Ｖａｌ； 位置１１的Ｘａａ是Ｔｙｒ或Ｔｒｐ； 位置１５的Ｘａａ是Ｌｙｓ、Ｇｌｕ或Ａｌａ； 位置１６的Ｘａａ是Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ或Ａｒｇ； 位置１８的Ｘａａ是Ｇｌｕ或Ｔｈｒ； 位置１９的Ｘａａ是Ｖａｌ或Ｉｌｅ； 位置２０的Ｘａａ是Ａｒｇ或Ｇｌｎ； 位置２８的Ｘａａ是Ｌｙｓ、Ａｒｇ或Ｇｌｕ； 位置２９的Ｘａａ是Ｉｌｅ或Ｌｅｕ； 位置３０的Ｘａａ是Ｇｌｕ或Ｌｙｓ 位置３６的Ｘａａ是Ｉｌｅ、Ｓｅｒ或Ｃｙｓ； 位置４０的Ｘａａ是Ｔｈｒ或一个直接的键； 位置４１的Ｘａａ是Ｌｙｓ或一个直接的键； 位置４３的Ｘａａ是Ｇｌｎ或一个直接的键； 位置４４的Ｘａａ是Ｇｌｎ、Ｌｙｓ或一个直接的键； 位置４５的Ｘａａ是Ａｌａ或Ｇｌｕ； 位置４６的Ｘａａ是Ｌｙｓ、Ｇｌｕ或Ａｌａ； 位置４７的Ｘａａ是Ｔｈｒ、Ａｌａ或Ｇｌｕ； 位置５０的Ｘａａ是Ｌｙｓ、Ａｓｎ或一个直接的键； 位置５２的Ｘａａ是Ｌｙｓ或Ｇｌｎ。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
(1)专利
本专利技术涉及人免疫缺陷病毒(HIV)p-17gag蛋白的特定肽片段、含有该片段的组合物、及其治疗用途包括疫苗和诊断用途、编码该片段的DNA、制造和使用该片段及编码该片段的DNA的方法。更具体地说，本专利技术涉及含有p-17gag蛋白的约30至50氨基酸(即根据特定的株，延伸包括了位置75至129的氨基酸，这些氨基酸对应于共同序列C分化单位(亚型))的肽片段和编码该区域的DNA片段。(2)现有技术的讨论在过去几年，人们已经进行了广泛的研究，首先是确定爱滋病的原因，接着在确定了通常被称为HIV的逆转录病毒是病原有机体后，人们的努力集中在有关遗传组成、分子生物学、病理学、生物化学、发展高灵敏度的病毒检测方法以及抗体和治疗方法的详细分析上，虽然在以上所有领域都有了长足的进展，但仍需要做很多工作来有效地防止爱滋病的扩散。前不久使用蛋白酶抑制剂的组合疗法作为治疗方法已取得了显著的进步，但它仍然是十分昂贵，而且并不总是有效。因此，控制高感染性的HIV病毒扩散和在已感染个体中治疗疾病的基本方法仍然是发展能够刺激免疫系统的合适组分的有效疫苗和免疫治疗试剂。基于表位识别的保护性抗体的鉴定能够为显示和/或诊断爱滋病或前爱滋病提供一种更为有效的机制，而血清阳性个体的这种显示和早期诊断就可接种疫苗来为治疗血清阳性个体提供合适的保护性免疫应答。美国专利4,983,387中介绍了一种抗原肽，该肽至少从HIV-1的p17gag蛋白的约92位置延伸至109位置，其中特别是介绍了一个三十肽通式Tyr Ser Val His Gln Arg Ile Asp Val Lys Asp Thr Lys Asp ThrLys Glu Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys LysLys Ala(SEQ ID NO:3)，这个三十肽在以下称为HGP-30，该肽在某些临床实验中和在SCID小鼠中进行的体内HIV免疫攻击研究中，在作为对抗获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原有机体HIV的治疗试剂时，能显示阳性结果。一般来说，HGP-30以及p-17的一个优点是，这种HIV蛋白在HIV的亚型和毒株之间比诸如被膜蛋白显得更为保守。事实上，已经发现，接种个体中抗HGP-30的抗体，在用并不是由HGP-30序列代表的毒株多肽序列试验时，也能识别。改变多肽的本质，例如增加或删除或替换一个或几个氨基酸，像在不同亚型中发生的一样，是否能够或将会影响由此产生的识别该表位的抗体亚类，作出这种预测是困难的，即使已经知道这样的操作能够诱导不同的应答，例如B和T细胞的刺激、细胞毒和淋巴增殖应答。而且，抗来自一种特定毒株或亚型的肽片段的抗体与抗其它毒株或亚型的相应肽区域的抗体相比，通常显示不同的免疫原性。令人惊奇的是，现在已有如下发现，这也是本专利技术的基础与HGP-30相应但衍生自共有序列C分化单位的肽能够显示比HGP-30更强和更广泛的免疫应答，具体地说，对共有序列C产生的抗体与针对HGP-30的抗体相比，能够识别来自不同亚型和毒株的HIV的肽，并能提供高滴度。相应地，本专利技术提供一种新型肽，该肽可用作检测HIV有机体的诊断辅助手段，和/或用作治疗爱滋病或阻止爱滋病形成的预防或治疗性试剂。该肽具有一个T细胞表位并优选还含有一个B细胞表位，这些表位具有被HIV不同亚型和毒株产生的抗体识别的能力。专利技术简述因此，本专利技术在一个方面提供含有取自如下序列的一个部分或该序列全部的约30至约50连续氨基酸的肽1 5 10Xaa Ser Leu Xaa Asn Thr Val Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Val His15 20 25Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Asp Thr Lys Glu Ala Leu Asp Xaa30 35 40Xaa Xaa Glu Glu Gln Asn Lys Xaa Gln Gln Lys Xaa Xaa Thr45 50 55Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Asp Xaa Gly Xaa Val Ser Gln (SEQ ID NO:1)其中位置1的Xaa是Arg、Lys或Ile；位置4的Xaa是Tyr、Phe或His；位置8的Xaa是Ala或Val；位置9的Xaa是Thr或Val；位置11的Xaa是Tyr或Trp；位置12的Xaa是Cys或Ser；位置15的Xaa是Lys、Glu或Ala；位置16的Xaa是Gly、Lys、Asp、Glu或Arg；位置18的Xaa是Glu或Thr；位置19的Xaa是Val或Ile；位置20的Xaa是Arg或Gln；位置28的Xaa是Lys、Arg或Glu；位置29的Xaa是Ile或Leu；位置30的Xaa是Glu或Lys位置36的Xaa是Ile、Ser或Cys；位置40的Xaa是Thr或一个直接的键；位置41的Xaa是Lys或一个直接的键；位置43的Xaa是Gln或一个直接的键；位置44的Xaa是Gln、Lys或一个直接的键；位置45的Xaa是Ala或一个直接的键；位置46的Xaa是Lys、Glu或Ala；位置47的Xaa是Thr、Ala或Glu；位置50的Xaa是Lys、Asn或一个直接的键；位置52的Xaa是Lys或Gln。在一个具体的优选实施方案中，抗原多肽具有SEQ ID NO:2的序列。本专利技术还提供包含具有通式(Ⅰ):C*-X-P*的肽-载体结构的免疫活性肽。其中C*代表一种免疫载体物质P*代表具有SEQ ID NO:1的肽X代表连接免疫载体物质C*和肽P*的直接键或共价键。在另一个方面，本专利技术提供一种组合物，该组合物在给药于有需要的病人时，能有效地诱导TH1免疫应答，该组合物含有前述通式C*-X-P*的免疫活性肽和一种免疫应答佐剂。在另一个方面，本专利技术提供一种药物组合物，该组合物含有有效药学剂量的SEQ ID NO:1的肽和可药用载剂。在一个具体的方面，本专利技术提供含有编码SEQ ID NO:1肽的核酸序列的分离核酸分子。在本专利技术此方面的优选实施方案中，分离核酸分子含有具有SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22或SEQID NO:23的核酸序列。本专利技术还提供一种重组表达载体，该载体至少含有一个编码SEQ IDNO:1肽的核酸序列。表达载体可以是真核表达载体或原核表达载体。在另一个方面，本专利技术还提供含有上述重组载体的宿主细胞。附图简述附图说明图1是B分化单位免疫的动物对各种肽的ELISA试验的图示。图2是C分化单位免疫的动物对各种肽的ELISA试验的图示。图3是E分化单位免疫的动物对各种肽的ELISA试验的图示。专利技术详述和优选实施方案由有潜力的HIV疫苗诱导的抗体或T细胞识别其它亚型(也称为分化单位)的HIV-1的能力直至今天仍是一个难题。例如，使用被膜序列的疫苗诱导的抗体仅仅能识别密切相近的毒株，部分原因是因为被膜蛋白的高度多形性。因此，在毒株和分化单位之间具有较高保守性的gag蛋白特别是p-17作为在世界范围内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：D·H·兹姆默曼，P·萨林，
申请(专利权)人：病毒技术公司，
类型：发明
国别省市：