一种基于氧化石墨烯的荧光传感器检测MMP‑9的方法技术

一种基于氧化石墨烯的荧光传感器检测MMP‑9的方法，属于生物检测技术领域。本发明专利技术将中间含有MMP‑9切割位点的二肽DNA复合物与模板DNA两端互补的分子杂交，形成中间含有颈环结构的DNA双链，MMP‑9可在二肽处的位点进行酶切，使得颈环DNA延展成一条单链DNA片段。荧光标记的单链DNA与氧化石墨烯混合引起DNA荧光淬灭，将荧光淬灭体系与酶切后的DNA复合体系混合，荧光标记的DNA与延展出的单链DNA互补杂交形成双链DNA结构，淬灭的荧光得以恢复，根据MMP‑9的浓度和荧光强度的对应关系，可以实现MMP‑9检测。本方法操作简单方便、灵敏度高、特异性好，为实际样本的检测提供了一种可行的方法。

A method of fluorescence sensor of graphene oxide detection based on MMP 9

A method of fluorescence sensor of graphene oxide detection based on MMP 9, which belongs to the technical field of biological detection. The present invention will contain MMP 9 intermediate cleavage site two peptide DNA complex with template DNA ends of complementary hybridization, forming the intermediate containing neck ring structure of DNA double chain, MMP 9 in two at the site of peptide by enzyme digestion, the neck ring DNA stretched into a single DNA fragment. Fluorescence labeled single stranded DNA and graphene oxide hybrid by DNA fluorescence quenching, hybrid DNA composites quenching system and after enzyme digestion, fluorescence labeled DNA and single stranded DNA extended complementary hybridization to form double stranded DNA structure, fluorescence quenching to recover, according to the corresponding relationship between the concentration of 9 MMP and the fluorescence intensity, MMP can achieve 9 detection. This method is easy to operate, high sensitivity and good specificity, and provides a feasible method for the detection of actual samples.

【技术实现步骤摘要】
一种基于氧化石墨烯的荧光传感器检测MMP-9的方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种基于氧化石墨烯的荧光传感器检测MMP-9的方法。
技术介绍
基质金属蛋白酶（MMPs）是一类需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子的一个大家族，对细胞外基质的各种蛋白质成分都有降解作用，可以通过调节细胞外基质组分的降解发挥生理和病理学功能，与胚胎发育、组织分化、细胞迁移以及损伤后组织重构、血管增生和斑块破坏等有关，其在肿瘤侵袭转移中所起的关键性作用，使得在肿瘤浸润转移中的作用日益受到关注。基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是基质金属蛋白酶的成员之一，是由大多数的人类癌细胞分泌的一种分子量为92kDa的金属蛋白酶，MMP-9具有降解Ⅳ型胶原蛋白的活性，恶性肿瘤的存在使得MMP-9在血清和血浆中的含量随之增加，因此，MMP-9被作为肿瘤转移早期诊断的重要标志物。目前检测MMP-9的方法主要是基于免疫学方法的酶联免疫吸附实验、免疫组化、免疫荧光等方法，虽然这些方法可以实现MMP-9的检测，但是需要依赖高灵敏高特异性的抗体制备，然而抗体的制备周期长，并且需要专业的操作人员，同时制备的抗体容易受本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于氧化石墨烯的荧光传感器检测MMP‑9的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）氧化石墨烯的合成称取12g的K2S2O2和12g的P2O5加入到30mL浓硫酸溶液中，置于加热反应器上进行加热，当温度达到80℃时将5g石墨烯加入到浓硫酸溶液中进行反应，当溶液颜色变成深蓝色时停止加热，并将溶液冷却至室温；随后将溶液进行10倍稀释，并用0.22μm的滤膜进行过滤，除去大块的沉淀物收集滤液，然后置于80℃的条件下过夜干燥；将50mL的浓硫酸置于冰浴条件下冷却，随后加入2g前述处理的石墨烯氧化物，再加入10g的KMnO4，在冰浴中搅拌反应20min后，加入2g的NaNO3，在室温下搅拌反应2h，再加入...

【技术特征摘要】
1.一种基于氧化石墨烯的荧光传感器检测MMP-9的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）氧化石墨烯的合成称取12g的K2S2O2和12g的P2O5加入到30mL浓硫酸溶液中，置于加热反应器上进行加热，当温度达到80℃时将5g石墨烯加入到浓硫酸溶液中进行反应，当溶液颜色变成深蓝色时停止加热，并将溶液冷却至室温；随后将溶液进行10倍稀释，并用0.22μm的滤膜进行过滤，除去大块的沉淀物收集滤液，然后置于80℃的条件下过夜干燥；将50mL的浓硫酸置于冰浴条件下冷却，随后加入2g前述处理的石墨烯氧化物，再加入10g的KMnO4，在冰浴中搅拌反应20min后，加入2g的NaNO3，在室温下搅拌反应2h，再加入500mL超纯水和30%的H2O2终止反应；得到的反应液用10%的HCl溶液洗涤后再用超纯水洗涤，随后再进行透析，将透析后的溶液进行超声剥离2h，最后将溶液在3000r/min的条件下进行离心除去离心管底部的沉淀，收集的上清液即为石墨烯氧化物；（2）带有MMP-9切割位点的颈环杂交双链DNA的制备将含有MMP-9切割位点的二肽DNA1偶联物以1.2:1的摩尔比与DNA2混合进行杂交反应，杂交缓冲液为pH8.0的0.05MTris-HCl缓冲液，二肽DNA1偶联物的终浓度为12nM，DNA2的终浓度为10nM，在室温下孵育0.5~2h后，得到带有MMP-9切割位点的颈环杂交双链DNA结构；二肽DNA1偶联物：5’-ACCGTAGCGT-Gly-Leu-GGTCAACTGC-3’；DNA2：5’-GCAGTTGACC-GTCTACCGTA-ACGCTACGGT-3’；（3）荧光信号的测定以及MMP-9的检测取100μL步骤（1）合成的石墨烯氧化物用0.01...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨蕾，
申请(专利权)人：杨蕾，
类型：发明
国别省市：浙江,33