The invention discloses a method for graphene oxide based on screening Rev peptide small molecule antagonists, the method with Proflavine for fluorescence polarization indicator, introducing graphene oxide in the system, can change the increase of Rev peptide small molecule antagonists and fluorescence polarization signal value method was established for screening of graphene oxide Rev peptide small molecule antagonists based on. The method of the invention has the advantages of simple operation, without the use of fluorescently labeled peptides as indicator, eliminates the defects of large molecular markers may lead to conformational change at the same time, compared with the traditional method of fluorescence polarization, the method for identifying the signal range of Rev peptide small molecule antagonists are wider, and thus more sensitive, can be achieved for high-throughput screening of Rev peptide small molecule antagonists.
【技术实现步骤摘要】
一种基于氧化石墨烯筛选Rev多肽小分子拮抗剂的方法
本专利技术属于药物筛选
,具体涉及一种基于氧化石墨烯筛选Rev多肽小分子拮抗剂的方法。
技术介绍
艾滋病又称获得性免疫综合症(AIDS),目前尚无有效根治的药物。艾滋病的病原体为人类免疫缺陷病毒(HIV),HIV是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒。临床使用的治疗HIV-I的药物主要是蛋白酶抑制剂和逆转录酶抑制剂,这两类药物容易产生变异性、耐药性和毒性,因此探索发现具有新的作用机制而不易产生耐药性的药物成为当今抗艾滋病药物研究的热点。HIV-I转录过程主要受一些转录因子的调控,如病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulatorofvirionproteinexpression,Rev)等。Rev能够影响输出到细胞质的未剪接和部分剪接信使RNA数量,从而调节病毒的基因表达,Rev一个富含精氨酸的区域能够与HIV-IRRE(revresponseelement)RNA富含腺嘌呤核苷酸的IIB茎环部分相互识别并特异性结合,其中RRERNA是由大约300个碱基组成的茎环结构。Rev与RRERNA的相互作用形成Rev-RRE复合物,能够介导mRNA的核转运过程,在HIV-Ι复制周期中起着十分重要的作用。小分子普罗黄素被发现可以竞争性的结合到Rev结合位点上,抑制Rev与RRERNA的相互作用;常用氨基糖苷类抗生素如新霉素B、巴龙霉素和庆大霉素,则主要结合到RRERNA的下游茎环部分,通过构象抑制作用阻碍Rev多肽与RRERNA的结合。目前对Rev多肽小分子拮抗剂筛选主要是采用荧光标记的Rev多肽为指示剂,该传统方法 ...
【技术保护点】
一种基于氧化石墨烯筛选Rev多肽小分子拮抗剂的方法,其特征在于:将普罗黄素与含IIB茎环部分的HIV‑I RRE RNA片段加入pH=6.5~8.0的缓冲液中,在37℃下孵育1~5分钟,然后加入待测药物,继续在37℃下孵育1~5分钟,再加入氧化石墨烯,充分混匀,测试加入待测药物前后反应体系的荧光偏振度,若待测药物具有拮抗作用,则荧光偏振度显著降低,据此即可进行Rev多肽小分子拮抗剂的筛选。
【技术特征摘要】
1.一种基于氧化石墨烯筛选Rev多肽小分子拮抗剂的方法,其特征在于:将普罗黄素与含IIB茎环部分的HIV-IRRERNA片段加入pH=6.5~8.0的缓冲液中,在37℃下孵育1~5分钟,然后加入待测药物,继续在37℃下孵育1~5分钟,再加入氧化石墨烯,充分混匀,测试加入待测药物前后反应体系的荧光偏振度,若待测药物具有拮抗作用,则荧光偏振度显著降低,据此即可进行Rev多肽小分子拮抗剂的筛选。2.根据权利要求1所述的基于氧化石墨烯筛选Rev多肽小分子拮抗剂的方法,其特征在于:所述反应体系中普罗黄素的浓度为200~500nmol/L,普罗黄素与含IIB茎环部分的HIV-IRRERNA片段的摩尔比为2:1。3.根据权利要求2所述的基于氧化石墨烯筛选Rev多肽小分子拮抗剂的方法,其特征在于:所述含IIB茎环部分的HIV-IRRERNA片段由34~67个核苷酸组成。4.根据权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员:张志琪,亓亮,张丹,范瑶瑶,
申请(专利权)人:陕西师范大学,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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