【技术实现步骤摘要】
相关申请的交叉引用本申请要求美国临时申请系列号60/277,531(2001年3月21日申请)和60/225,695(2000年8月16日申请)的利益。专利
本专利技术涉及一种新的方法，即以立体有择还原相应的氧代化合物来制备(1S，2S)-1-卤代-2-羟基-3-(保护的)氨基-4-取代的丁烷。本专利技术所述方法产生的取代的丁烷是羟乙胺电子等排物亚单位的前体，此亚单位存在于许多具有治疗效果的血管紧张肽转化酶、肾素和HIV蛋白酶的抑制剂分子中。专利技术背景Bing-nan Zhou等J.Am Chem.Soc.，105，5926-5928页，1983描述了化学微生物法合成L-肉碱，L-肉碱在人类新陈代谢和转运长链脂肪酸中扮演重要角色。尤其此文描述了用面包酵母即啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)还原K-氯代乙酰乙酸乙酯为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯.Kazutoshi Ushio等Tetrahedron Letters，27卷，23期，2657-2660页，1986，公开了用甲醇生长酵母还原β-酮酸酯的方法。此文描述了该反应导致产...
【技术保护点】
一种制备用分子式Ⅰ表示的（１Ｓ，２Ｓ）－１－卤代－２－羟基－３－（保护的）氨基－４－取代的丁烷的立体有择方法，＊＊＊Ⅰ其中Ｈａｌ是卤素，Ｒ选自烷基、取代烷基、芳基和取代芳基，并且Ｒ↓［１］是氨基官能团的保护基团，该方法包 含使分子式Ⅱ表示的（１Ｓ）－１－卤代－２－氧代－３－（保护的）氨基－４－取代的丁烷＊＊＊Ⅱ与可以催化分子式Ⅱ所示化合物的立体有择还原反应的微生物在所述还原反应能发生的条件下接触，并回收分子式Ⅰ表示的所述化合物，其中分子式 Ⅱ中的Ｈａｌｏ、Ｒ和Ｒ↓［１］的定义如上，所述微生物选自红串...
【技术特征摘要】
US 2000-8-16 60/225,695;US 2001-3-21 60/277,531的范围并不限于上述描述，而是包含了本发明中所有具有专利新颖性的特征，包括会被相关领域技术人员作为其等价物的所有特征和实施方案。通过参考下述实验，对本发明进行进一步描述。实施例1立体有择酶促还原用完整细胞-一段式方法红串红球菌ATCC 4277细胞(1mL)接种到100mL前述培养基1中，在500mL烧瓶里温育于28℃，以200RPM在摇床上摇动22小时。以1M的磷酸钾缓冲液调节50细胞的培养液至pH7.0。细胞培养液中加入葡萄糖至浓度为25mg/mL，加入50mg的(1S)-[N-(1-苄基-2-氧代-3-氯)丙基]氨基甲酸叔丁酯(底物)。生物转化(还原)在摇床里在28℃，200RPM条件下进行。在预定时间反应混和液中加入两倍体积的以60∶40的比例混和的叔丁基甲基醚和甲苯混合物以使反应淬灭，分离出的有机相以0.2微米的滤器过滤收集。2mL有机相在氮气流中蒸发至干，残留物以1mL乙腈吸收、过滤并做HPLC分析(1S，2S)-[N-(1-苄基-2-羟基-3-氯)丙基]氨基甲酸叔丁酯(产物)。结果概述于表1。表1 实施例2用完整细胞-二段式方法此实施例中反应的底物与产物同实施例1。红串红球菌ATCC4277和红串红球菌DSM 6971的细胞(1mL)分别接种于100mL前述培养基1中，在500mL烧瓶里温育于25℃，在摇床上280RPM摇动48小时。100mL每一培养液接种于发酵罐里的15mL培养基1中。发酵罐中生长条件为25℃，15LPM(升/分钟)通气率和500RPM的搅动，持续36小时。细胞由发酵罐中收获后用于酶促转化(生物转化)(1S)-[N-(1-苄基-2-氧代-3-氯)丙基]氨基甲酸叔丁酯(底物)成为(1S，2S)-[N-(1-苄基-2-羟基-3-氯)丙基]氨基甲酸叔丁酯(产物)。将20克细胞悬浮于100mL 64mM的磷酸钾缓冲液(pH7.0)，从而制得细胞悬液。每个悬液中加入25mg/mL的葡萄糖和预定浓度的底物。底物生成产物的生物转化反应于28℃，160RPM在摇床中进行。在预定时间淬灭反应混合物，产物收获和分析方法同实施例1。结果概述于表2。表2 表1和表2结果说明所需产物用此发明的方法可以得到高产率和极高的非对映体纯度。实施例3使用不同微生物株进行生物转化完整细胞将一系列的微生物用于生物转化，试验方法同实施例1。结果示于表3。表3 表3显示的结果说明发明中使用的微生物明确产生了可接受产率的产物，即高于70％和可接受的非对映体纯度，即高于90％。实施例4使用细胞抽提物和辅助因子本方法的底物和产物同前例。红串红球菌ATCC 4277细胞生长于前述培养基1中。细胞(150克)悬浮于100mL磷酸钾缓冲液中，pH7.0。细胞悬液在4℃用微流体器(microfluidizer)于13,000psi压力下分解。破碎细胞悬液以12,000RPM离心30分钟。澄清的上清液(“细胞抽提液”)用于生物转化底物到产物。向部分(10mL)细胞抽提液加入10mg底物、葡萄糖脱氢酶(35个单位)、0.7mM NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核...
【专利技术属性】
技术研发人员：RN派特尔，L丘，
申请(专利权)人：布里斯托尔米尔斯斯奎布公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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