一种引入多胺标签的基因改造方法，脂肪酶的可溶表达及生物仿生固定化方法技术

本发明专利技术提供了一种实现其可溶、有活性表达的基因改造方法：以N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因作为目的基因，在脂肪酶亲本基因序列的N末端添加编码m个组氨酸、m个精氨酸或m个赖氨酸的核苷酸序列，m＝2～10，同时在脂肪酶亲本基因序列的C末端添加编码n个组氨酸、n个精氨酸或n个赖氨酸的核苷酸序列，n＝2～10，并针对目的基因设计引物；通过PCR获得N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因。该基因表达后产出可溶的带有多胺标签的脂肪酶，其可以诱导仿生纳米硅的形成及固定化。本发明专利技术在温和的条件下、短时间就可获得高活力和固定化效率的固定化酶；操作简便，固定化条件易控制、成本低。

A method of gene transformation introducing polyamine label, the soluble expression of lipase and bionic immobilization method

The invention provides a method for the soluble and active expression of gene transformation method: to the end of the N terminal and C with polyamine tag lipase gene as the target gene, encoding m m added histidine, arginine or lysine m nucleotide sequence in the N terminal sequence of lipase parent gene at the same time, M = 2~10, adding n n encoding histidine, arginine or lysine n nucleotide sequence at the end of the parent lipase gene C, n = 2~10, and for the purpose of gene primers; PCR obtained by N terminal terminal and C with lipase gene have polyamine tags at the same time. After the expression of the gene, a soluble lipase with a polyamine label is produced, which can induce the formation and immobilization of biomimetic nanosilicon. The invention can obtain highly immobilized enzyme with high activity and immobilization efficiency under mild conditions and for a short time. The operation is simple, the immobilization condition is easy to control and the cost is low.

【技术实现步骤摘要】
一种引入多胺标签的基因改造方法，脂肪酶的可溶表达及生物仿生固定化方法
本专利技术涉及基因工程、蛋白固定化
，具体地，本专利技术涉及用一种基因改造方法，在脂肪酶基因中引入多胺标签，可以有效实现脂肪酶在大肠杆菌中的可溶表达，产生带有多聚阳离子氨基酸标签的脂肪酶；该脂肪酶诱导硅酸聚集成硅颗粒，并通过电荷相互作用和离子间作用力将蛋白固定到硅粒子上，得到固定化酶及其应用。
技术介绍
脂肪酶可以催化酯化、水解、转酯以及酰化等类型反应。在非水相催化合成中，很多脂肪酶，比如南极假丝酵母脂肪酶B(CandidaantarcticaLipaseB，CalB)，表现出了极好的活性和操作稳定性；在有机合成、手性化合物拆分、制药、医药中间体等领域得到广泛应用。据报道CalB等脂肪酶在真核微生物，如毕赤酵母(Pichiapastoris)，米曲酶(Aspergillus-oryzae)等可进行良好表达，但是在真核表达系统操作繁琐，生长周期较长。大肠杆菌代谢途径和基因表达调控机制清楚，培养周期短，目标基因表达水平高，成为构建、表达的良好宿主菌。目前已有将CalB等脂肪酶在大肠杆菌中进行表达的报道，如liu等本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种实现其可溶、有活性表达的基因改造方法，其包括如下步骤：以N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因作为目的基因，在脂肪酶亲本基因序列的N末端添加编码m个组氨酸、m个精氨酸或m个赖氨酸的核苷酸序列，m＝2～10，同时在脂肪酶亲本基因序列的C末端添加编码n个组氨酸、n个精氨酸或n个赖氨酸的核苷酸序列，n＝2～10，并针对目的基因设计引物；通过PCR获得N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因。

【技术特征摘要】
1.一种实现其可溶、有活性表达的基因改造方法，其包括如下步骤：以N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因作为目的基因，在脂肪酶亲本基因序列的N末端添加编码m个组氨酸、m个精氨酸或m个赖氨酸的核苷酸序列，m＝2～10，同时在脂肪酶亲本基因序列的C末端添加编码n个组氨酸、n个精氨酸或n个赖氨酸的核苷酸序列，n＝2～10，并针对目的基因设计引物；通过PCR获得N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因。2.一种实现其可溶、有活性表达的基因改造方法，其包括如下步骤：以N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因作为目的基因，在脂肪酶亲本基因序列的N末端添加编码m个组氨酸的核苷酸序列，m＝2～10，同时在脂肪酶亲本基因序列的C末端添加编码n个精氨酸或n个赖氨酸的核苷酸序列，n＝2～10，并针对目的基因设计引物；通过PCR获得N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因mHis-脂肪酶-nArg或mHis-脂肪酶-nLys。3.根据权利要求1或2所述的基因改造方法，其特征在于：所述脂肪酶为脂肪酶CalB。4.一种N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因，其结构如下：在脂肪酶亲本基因序列的N末端添加编码m个组氨酸、m个精氨酸或m个赖氨酸的核苷酸序列，m＝2～10，同时在脂肪酶亲本基因序列的C末端添加编码n个组氨酸、n个精氨酸或n个赖氨酸的核苷酸序列，n＝2～10。5.一种N末端和C末端同时带有多胺标签的脂肪酶基因，其结构如下：在脂肪酶亲本基因序列的N末端添加编码m个组氨酸的核苷酸序列，m＝2～10，同时在脂肪酶亲本基因序列的C末...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑良玉，周小雪，张锁秦，田雪梅，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22