本发明专利技术提供４－羟基苯甲酸聚异戊烯基转移酶活性或２－八异戊烯基苯酚２－八异戊烯基－６－甲氧基苯酚黄素还原酶活性减低或丧失、且具有生产乳酸的能力的微生物，特别是含有对具有４－羟基苯甲酸聚异戊烯基转移酶活性或２－八异戊烯基苯酚２－八异戊烯基－６－甲氧基苯酚黄素还原酶活性的蛋白质进行编码的基因的一部分或全部缺失了的染色体ＤＮＡ的微生物，以及使用了该微生物的乳酸制造方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有生产乳酸的能力的微生物以及使用了该微生物的乳酸 制造方法。
技术介绍
作为生产乳酸的微生物，已报道有乳酸菌属aa"o^"7/w)、乳球菌 属(Zactococcw)等乳酸菌，根霉菌属(7 /^op^)的丝状菌、酵母菌属 (Socdww^;c")等酵母以及大肠埃希杆菌，但已知乳酸菌显示复杂的营 养要求性，且乳酸的光学纯度低(非专利文献1和2);丝状菌多有甘油、 乙醇或富马酸等副产物(非专利文献3和4);酵母在使用重组菌株时也会 副产生大量的乙醇，从而对于耗糖量的收率低(非专利文献5)。作为使用了大肠埃希杆菌的乳酸制造方法，已知有使用丙酮酸甲酸裂 解酶基因和与有机酸或乙醇的副产生有关的基因的缺失株的方法(非专利 文献6)，使用磷酸转乙酰酶基因和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因的突变株的 方法(非专利文献7)，但乳酸的生产率均较低。大肠埃希杆菌(￡^^n'W& co/O的4-羟基苯甲酸聚异戊烯基转移酶 (4國Hydroxybenzoate polyprenyltransferase )(以下禾尔作UbiA蛋白质)以及 2-八异戊烯基苯酚2-八异戊烯基-6-甲氧基苯酚黄素还原酶(以下称作UbiB 蛋白质)是与大肠埃希杆菌中泛醌的生物合成有关的蛋白质，且UbiA蛋白 质和UbiB蛋白质的氨基酸序列及编码该蛋白质的基因的碱基序列是已知 的(非专利文献8和9)。另外，对于多数微生物，其染色体DNA的整个 碱基序列是己知的(非专利文献IO)。已知在大肠埃希杆菌中，泛醌生物合成基因的突变株蓄积有2.5g/L的 D-乳酸(非专利文献11和12)，该突变株(AN59株)为ub正基因的突变 株(非专利文献13)，其它泛醌生物合成基因产物的活性已降低了的株的乳 酸的生产率以及泛醌生物合成基因突变株的乙酸产量等是未知的。乙酸是乳酸发酵时的副产物，由于妨碍乳酸的精制或聚合化，因此寻求乙酸的副产量少、廉价的乳酸制造方法。非专利文献1: Appl. Microbiol. Biotechnol., 45， 307(1996) 非专利文献2: Enzyme Microb. Technol.， 26, 87(2000) 非专利文献3: Appl. Biochem. Biotechnol.， 51， 57(1995) 非专利文献4: J. Biosci. Bioeng" 97， 19(2004) 非专利文献5: Appl. Environ. Microbiol., 71, 2789(2005) 非专利文献6: Appl. Environ. Microbiol.， 69, 399(2003) 非专利文献7: Appl. Environ. Microbiol.， 65, 1384(1999) 非专利文献8: FEBS Letters, 307， 347(1992) 非专利文献9: Science, 257, 771(1992)非专禾ll文献10: http:〃www.tigr.org/tdb/mdb/mdbcomplete.html 非专利文献11: J. Bacteriol., 99， 450(1969) 非专利文献12: Biochem. J., 117, 551(1970) 非专利文献13: J Bacteriol., 182， 5139(2000)
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供乳酸的生产率有所提高的微生物及使用了该微 生物的乳酸制造方法。本专利技术涉及以下的(1) (8)。(1) 一种微生物，其中，4-羟基苯甲酸聚异戊烯基转移酶活性或者2-八异戊烯基苯酚2-八异戊烯基-6-甲氧基苯酚黄素还原酶活性降低或丧失， 且所述微生物具有生产乳酸的能力。(2) 上述(1)所述的微生物，其具有对下述蛋白质进行编码的基因 的一部分或全部缺失了的染色体DNA，所述蛋白质为具有4-羟基苯甲酸聚 异戊烯基转移酶活性的蛋白质或具有2-八异戊烯基苯酚2-八异戊烯基-6-甲 氧基苯酚黄素还原酶活性的蛋白质。(3) 上述(2)所述的微生物，其中，基因为对下述蛋白质进行编码 的基因具有序列号1或序列号2所示的氨基酸序列的蛋白质，或者与序 列号1或2所示的氨基酸序列具有80%以上的同源性、且具有4-羟基苯甲 酸聚异戊烯基转移酶活性或2-八异戊烯基苯酚2-八异戊烯基-6-甲氧基苯酚黄素还原酶活性的蛋白质。(4) 上述(2)所述的微生物，其中，基因为具有序列号3或序列号4 所示的碱基序列的基因，或者为在严格条件下和具有与序列号3或4所示 的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸杂交且对下述蛋白质进行编码的基 因，所述蛋白质具有4-羟基苯甲酸聚异戊烯基转移酶活性或2-八异戊烯基 苯酚2-八异戊烯基-6-甲氧基苯酚黄素还原酶活性。(5) 上述(1) (4)任一项所述的微生物，其中，微生物为通过选 自下述 的方法而强化了生产乳酸的能力的微生物。将控制乳酸的生物合成的机制的至少一个缓和或解除的方法 将与乳酸的生物合成相关的酶的至少一个的表达强化的方法 使与乳酸的生物合成相关的酶基因的至少一个的拷贝数增加的方法将从乳酸的生物合成路径向该有用物质以外的代谢产物分支的代 谢路径的至少一个弱化或阻断的方法选择对于乳酸类似物的耐性度高于野生型株的细胞株的方法(6) 上述(1) ~ (5)任一项所述的微生物，其中，微生物是属于下 述属的微生物欧文氏菌属(五nW"/fl)、沙雷菌属(5^raf/a)、沙门菌属(&z/wo"e〃ar)、埃希氏菌属(^yc/^Wc/ /a)、变形杆菌属(尸rato^)、假单 胞菌属(Pse油附o"os)、酸硫杆状菌属(爿c逾/iz'oSflcz7/ws)、不动杆菌属"c/"加6ac&r)、 土壤杆菌属)、芽孢杆菌属(5ac/肠)、 博德特菌属(Borfifefe〃a)、短根瘤菌属(万ra办r/^o&ww)、布鲁氏杆菌属(Brace//(3)、伯霍尔德杆菌属(Aw^/zo/Jen'")、柄杆菌属(Cflw/o6ac/w)、 绿屈挠菌属(CWorayfea^)、梭菌属(C7osfrW"m)、考克斯体属(Cox/e〃a)、脱 亚硫酸菌(D&yw诉to6acten'ww)、地杆菌属(GeoZ a"er)、嗜血杆菌属(//ae/wc|p/ 7us)、军团菌属(丄egz'o"e//(3)、 f勾端i累方定体属(丄ep/os;^'n3)、 Afo;gKetococcMs、磁虫累菌属(M"agnefos/^n'〃wm)、曼氏杆菌属(Mhwi/2eimz'a)、 中生根瘤菌属(Afesor/^o6/wm)、甲基芽孢杆菌属(Me^y/o5flc/〃ws)、甲 基杆菌属(A/e鄉/o6acfeWw附)、分枝杆菌属(綺c。6acfen'歸)、奈瑟球菌属(iVe^en'a)、亚硝化单孢菌属(M7myomowos)、念珠藻属(Mwtoc)、巴斯 德菌属(Pos&wre〃a )、原绿球藻属(Prac/z/oracoccwj )、红杆菌属(7 /zocfo^cter )、 红球菌属 (/^odococcM )、 红假单胞菌属(朋O(io尸sewcto附o"as)、立克次体属(7 /cfeto/a)、 志贺菌属(幼/ge〃a)、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种微生物，其中，４－羟基苯甲酸聚异戊烯基转移酶活性或２－八异戊烯基苯酚２－八异戊烯基－６－甲氧基苯酚黄素还原酶活性降低或丧失，且所述微生物具有生产乳酸的能力。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：伊东干人，橓田贵美枝，森英郎，加藤真辉子，
申请(专利权)人：协和酦酵工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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