一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法。步骤如下：第一步，MePEG‑Peptide‑Tri‑CL的制备；第二步，纳米粒的制备：以姜黄素为模型药物，将MePEG‑Peptide‑Tri‑CL和姜黄素溶于丙酮为脂相溶液，将表面活性剂溶于水中为水相，按不同的脂相/水相比将脂相慢慢滴入水相，持续搅拌，形成载姜黄素‑星状纳米粒原液。将制得的纳米粒溶液真空抽滤1h除去有机溶剂，6000r/min离心20min后，获得溶液纳米粒溶液。发明专利技术实现了姜黄素水中溶解度的提高，同时在抗肿瘤治疗过程中具有缓控释和靶向特性，适用于静注及口服等多种给药方式。

Preparation of an enzyme targeting stellate nanoparticle

The present invention relates to a preparation method of a star - like drug - nanoparticle with enzyme targeting. Steps are as follows: first, the MePEG Peptide Tri CL preparation; the second step, the preparation of nanoparticles with curcumin as the model drug, MePEG Peptide Tri CL and curcumin soluble in acetone solution into the lipid phase, the surfactant is dissolved in water as the water phase, according to the different lipid phase compared to the lipid / water phase slowly into water, stirring, the formation of curcumin loaded stellate stoste nanoparticles. The prepared 1H nanoparticles solution vacuum filtration to remove the organic solvent, 6000r/min centrifugal 20min, obtained nanoparticles solution solution. The invention has achieved the improvement of the solubility of curcumin in water, and has the characteristics of slow release, controlled release and targeting in the process of anti-tumor treatment, and is suitable for various ways of administration such as intravenous injection and oral administration.

【技术实现步骤摘要】
一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法
：本专利技术涉及药物高分子载体制备和药物纳米制剂
，具体的说涉及一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法。
技术介绍
：可降解生物靶向纳米材料，具有良好的生物相容性，常被用作疏水性抗癌药物的有效载体，但载药量低问题常常限制了两亲性高聚物载药体系的进一步发展。近来研究显示，相比较直链聚合物，星状聚合物具有更多的反应官能团并能形成更广阔的包载空腔，利于实现对纳米载体的优化修饰和载药量的提高。纳米载体通过提高药物的穿透性和滞留效应以增加在肿瘤部位的聚积效果。然而，被动的给药系统，由于多重药物的耐药性并不能保证药物具有较好的选择性。基质金属蛋白酶(MMP)在正常细胞中的扮演着一个沉默者的角色。然而当机体发生病变时，如：炎症、胚胎发生，血管形成，肿瘤细出现转移、浸润和复发时，基质金属蛋白酶(MMP)的表达呈现上升趋势。使用MMP特异性剪切肽修饰药物载体，肿瘤部位实现药物的主动靶向释放的几率就会增大，可有效降低药物的毒副作用，并提高药物的生物利用度。同时，PEG化纳米粒在血液中有较长的循环时间，可以逃脱体内网状内皮系统或巨吞噬系统对纳米粒的被动靶向性清除，从而提高载药系统在血液中的停留时间，有助于改善药代动力学。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法。本专利技术制备通过高温聚合、常温开环和酯化等反应制备MePEG-peptide-Tri-CL(peptide：XGPLGIAGQr9X)作为载体材料，将MePEG-peptide-Tri-CL和姜黄素溶于丙酮形成脂相溶液；泊洛沙姆188(P-188)溶于去离子水形成水相溶液，通过溶剂乳化挥发法制备尺寸较小、粒径均一、包封率高的具有MMPs特异靶向性和缓控释特性的载姜黄素-星状纳米粒制剂。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案如下：一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法，所述制备方法步骤如下：第一步，MePEG-Peptide-Tri-CL的制备(1)Tri-CL的合成将1，2，3-丙烷三甲酸和ε-己内酯按比例加入到25mL三口烧瓶中，120℃-140℃下溶解后，在氮气保护下，加入一定量的辛酸亚锡，密封，120℃-140℃反应9.5-48h，产物趁热溶于适量二氯甲烷中，滴加至冰乙醚中，过滤得到的沉淀，25℃下干燥24h。所述1，2，3-丙烷三甲酸、ε-己内酯、辛酸亚锡的投料物质的量之比为1∶20～80：0.05～0.40，优选1：30～60：0.05～0.20；所述二氯甲烷/冰乙醚体积比为1∶5～1∶20；所述二氯甲烷的体积用量以所述ε-己内酯的质量计为1～10mL/g；所述冰乙醚的体积用量以所述ε-己内酯的质量计为10～100mL/g；GPC检测Tri-CL分子量范围在8262.27～18665.83。(2)Tri-CL-NHBoc的合成合成：取Tri-CL溶于适量甲苯中，加入N-(叔丁氧羰基)乙醇胺。氮气保护下，加入一定量的三乙胺，密闭，30～60℃下反应12～60h，优选40℃下反应48h，得到Tri-CL-NHBoc。后处理：将反应混合物逐滴滴加到冰甲醇中，6000r/min离心30min，除去上清液，所得沉淀于25℃下真空干燥24h。所述Tri-CL、N-(叔丁氧羰基)乙醇胺、三乙胺的投料物质的量之比为1∶3～6∶2～8；所述Tri-CL的甲苯浓度为0.09～0.12g/mL；所述冰甲醇的体积用量以所述Tri-CL的质量计为20～200mL/g。(3)Tri-CL-NH2的合成合成：取Tri-CL-NHBoc溶于适量二氯甲烷中，加入三氟乙酸(TFA)，氮气保护，在室温下搅拌反应4～10h。后处理：将反应液分别用5％KHCO3(w/w)水溶液萃取三次，合并下层有机相。蒸馏水洗涤三次，合并有机相加入一定量无水MgSO4干燥，搅拌过夜，次日过滤除去MgSO4固体，滤液滴加到冰甲醇中，6000r/min离心30min，除去上清液。所得沉淀于25℃真空干燥。所述Tri-CL-NHBoc和TFA投料物质的量之比为1∶3～6；所述Tri-CL-NHBoc二氯甲烷溶液浓度范围为0.5～1.0g/mL；所述合并有机相与冰甲醇体积比范围为1∶5～1∶20；GPC检测Tri-CL-NH2分子量范围在10000～18000。(4)MePEG-COOH的合成合成：MePEG和丁二酸酐按比例投入50mL三口烧瓶中，加入适量吡啶搅拌直到全部溶解。在氮气保护下，快速加入一定比例的4-二甲氨基吡啶(DMAP)、三乙胺(TEA)，密封后室温反应12～48h，优选24h。后处理：反应液逐滴滴加到适量冰乙醚中。过滤，得到的沉淀为MePEG-COOH，沉淀于25℃真空干燥24h。所述MePEG分子量范围为350～5000；所述MePEG、丁二酸酐、DMAP和TEA投料物质的量之比为1∶1～3：0.2～0.8：0.5～2，优选1∶2∶0.6：1。所述MePEG吡啶溶液浓度范围为0.02～0.80g/mL；所述反应液/冰乙醚体积比范围为1∶5～1∶20。(5)MePEG-NHS的合成合成：MePEG-COOH和N-羟基琥珀酰亚胺按比例加入50ml三口烧瓶中，加入适量的乙腈溶解。再加入一定量N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)，室温反应12～48h，优选24h。后处理：将反应液滴加到适量冰乙醚中，过滤得到的滤饼即为产物，产物于25℃真空干燥24h。所述MePEG-COOH、N-羟基琥珀酰亚胺和DCC投料物质的量之比为1∶2～6：0.1～3；所述MePEG-COOH乙腈溶液浓度范围为6.4×10-3～0.6g/mL；所述反应液/冰乙醚体积比范围在1∶5～1∶20。(6)MePEG-Peptide的合成合成：将适量DMAP和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)加入25mL三口烧瓶中，用少量乙腈：水混合溶液溶解，将50mgpeptide溶于少量乙腈：水混合溶液，加入反应瓶中，氮气保护下在冰浴下搅拌，活化2小时。2小时后，移去冰浴，MePEG-NHS溶于适量乙腈中，投入反应瓶中，氮气保护，室温下反应48～96h。后处理：冷冻干燥，所得固体为产物。所述活化过程DMAP、EDC和Peptide投料物质的量之比为5～20∶5～20：1；所述MePEG-NHS和peptide投料物质的量之比为1∶1～2；所述乙腈：水混合溶液的比值为10∶1～1∶10；所述MePEG-NHS乙腈溶液浓度为2×10-3～0.08g/mL；GPC检测MePEG-Peptide分子量范围在为2800～7800。(7)MePEG-Peptide-Tri-CL的合成合成：称取MePEG-Peptide加入到25mL三口烧瓶中，加入适量二氯甲烷溶解，适量DCC和DMAP溶于适量二氯甲烷后加入到反应瓶中，氮气保护，冰浴下活化2小时。2小时后，将适量Tri-CL-NH2溶于适量二氯甲烷中，投入到反应瓶。氮气保护，室温下反应48～96h。后处理：反应液装入截留分子量14000的透析袋中，前5小时，每一小时换一次纯化水，之后，每隔2小时换一次纯化水。透析结束后，冷冻干燥得到产物。所述MePEG-Peptide、Tri-CL-NH2、DCC和DM本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法步骤如下：第一步，MePEG‑Peptide‑Tri‑CL的制备(1)Tri‑CL的合成将1，2，3‑丙烷三甲酸和ε‑己内酯按比例加入到25mL三口烧瓶中，120℃‑140℃下溶解后，在氮气保护下，加入一定量的辛酸亚锡，密封，120℃‑140℃反应9.5‑48h，产物趁热溶于适量二氯甲烷中，滴加至冰乙醚中，过滤得到的沉淀，25℃下干燥24h；(2)Tri‑CL‑NHBoc的合成取Tri‑CL溶于适量甲苯中，加入N‑(叔丁氧羰基)乙醇胺，氮气保护下，加入一定量的三乙胺，密闭，30～60℃下反应12～60h，得到Tri‑CL‑NHBoc，将反应混合物逐滴滴加到冰甲醇中，6000r/min离心30min，除去上清液，所得沉淀于25℃下真空干燥24h；(3)Tri‑CL‑NH2的合成取Tri‑CL‑NHBoc溶于适量二氯甲烷中，加入三氟乙酸，氮气保护，在室温下搅拌反应4～10h，将反应液用质量分数5％KHCO3水溶液萃取三次，合并下层有机相，蒸馏水洗涤三次，合并有机相加入一定量无水MgSO4干燥，搅拌过夜，次日过滤除去MgSO4固体，滤液滴加到冰甲醇中，6000r/min离心30min，除去上清液，所得沉淀于25℃真空干燥；(4)MePEG‑COOH的合成MePEG和丁二酸酐按比例投入50mL三口烧瓶中，加入适量吡啶搅拌直到全部溶解，在氮气保护下，快速加入一定比例的4‑二甲氨基吡啶、三乙胺，密封后室温反应12～48h，反应液逐滴滴加到适量冰乙醚中，过滤，得到的沉淀为MePEG‑COOH，沉淀于25℃真空干燥24h；(5)MePEG‑NHS的合成MePEG‑COOH和N‑羟基琥珀酰亚胺按比例加入50ml三口烧瓶中，加入适量的乙腈溶解，再加入一定量N，N‑二环己基碳二亚胺(DCC)，室温反应12～48h，将反应液滴加到适量冰乙醚中，过滤得到的滤饼即为产物，产物于25℃真空干燥24h；(6)MePEG‑Peptide的合成将适量DMAP和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)加入25mL三口烧瓶中，用少量乙腈：水混合溶液溶解，将50mg peptide溶于少量乙腈：水混合溶液，加入反应瓶中，氮气保护下在冰浴下搅拌，活化2小时，2小时后，移去冰浴，MePEG‑NHS溶于适量乙腈中，投入反应瓶中，氮气保护，室温下反应48～96h，反应液冷冻干燥，所得固体为产物；(7)MePEG‑Peptide‑Tri‑CL的合成称取MePEG‑Peptide加入到25mL三口烧瓶中，加入适量二氯甲烷溶解，适量DCC和DMAP溶于适量二氯甲烷后加入到反应瓶中，氮气保护，冰浴下活化2小时，2小时后，将适量Tri‑CL‑NH2溶于适量二氯甲烷中，投入到反应瓶，氮气保护，室温下反应48～96h，反应液装入截留分子量14000的透析袋中，前5小时，每一小时换一次纯化水，之后，每隔2小时换一次纯化水。透析结束后，冷冻干燥得到产物；第二步，纳米粒的制备以姜黄素为模型药物，将MePEG‑Peptide‑Tri‑CL和姜黄素溶于丙酮为脂相溶液，将表面活性剂溶于水中为水相，按不同的脂相/水相比将脂相慢慢滴入水相，持续搅拌，形成载姜黄素‑星状纳米粒原液，将制得的纳米粒溶液真空抽滤1h除去有机溶剂，6000r/min离心20min后，获得溶液纳米粒溶液。...

【技术特征摘要】
1.一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法步骤如下：第一步，MePEG-Peptide-Tri-CL的制备(1)Tri-CL的合成将1，2，3-丙烷三甲酸和ε-己内酯按比例加入到25mL三口烧瓶中，120℃-140℃下溶解后，在氮气保护下，加入一定量的辛酸亚锡，密封，120℃-140℃反应9.5-48h，产物趁热溶于适量二氯甲烷中，滴加至冰乙醚中，过滤得到的沉淀，25℃下干燥24h；(2)Tri-CL-NHBoc的合成取Tri-CL溶于适量甲苯中，加入N-(叔丁氧羰基)乙醇胺，氮气保护下，加入一定量的三乙胺，密闭，30～60℃下反应12～60h，得到Tri-CL-NHBoc，将反应混合物逐滴滴加到冰甲醇中，6000r/min离心30min，除去上清液，所得沉淀于25℃下真空干燥24h；(3)Tri-CL-NH2的合成取Tri-CL-NHBoc溶于适量二氯甲烷中，加入三氟乙酸，氮气保护，在室温下搅拌反应4～10h，将反应液用质量分数5％KHCO3水溶液萃取三次，合并下层有机相，蒸馏水洗涤三次，合并有机相加入一定量无水MgSO4干燥，搅拌过夜，次日过滤除去MgSO4固体，滤液滴加到冰甲醇中，6000r/min离心30min，除去上清液，所得沉淀于25℃真空干燥；(4)MePEG-COOH的合成MePEG和丁二酸酐按比例投入50mL三口烧瓶中，加入适量吡啶搅拌直到全部溶解，在氮气保护下，快速加入一定比例的4-二甲氨基吡啶、三乙胺，密封后室温反应12～48h，反应液逐滴滴加到适量冰乙醚中，过滤，得到的沉淀为MePEG-COOH，沉淀于25℃真空干燥24h；(5)MePEG-NHS的合成MePEG-COOH和N-羟基琥珀酰亚胺按比例加入50ml三口烧瓶中，加入适量的乙腈溶解，再加入一定量N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)，室温反应12～48h，将反应液滴加到适量冰乙醚中，过滤得到的滤饼即为产物，产物于25℃真空干燥24h；(6)MePEG-Peptide的合成将适量DMAP和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)加入25mL三口烧瓶中，用少量乙腈：水混合溶液溶解，将50mgpeptide溶于少量乙腈：水混合溶液，加入反应瓶中，氮气保护下在冰浴下搅拌，活化2小时，2小时后，移去冰浴，MePEG-NHS溶于适量乙腈中，投入反应瓶中，氮气保护，室温下反应48～96h，反应液冷冻干燥，所得固体为产物；(7)MePEG-Peptide-Tri-CL的合成称取MePEG-Peptide加入到25mL三口烧瓶中，加入适量二氯甲烷溶解，适量DCC和DMAP溶于适量二氯甲烷后加入到反应瓶中，氮气保护，冰浴下活化2小时，2小时后，将适量Tri-CL-NH2溶于适量二氯甲烷中，投入到反应瓶，氮气保护，室温下反应48～96h，反应液装入截留分子量14000的透析袋中，前5小时，每一小时换一次纯化水，之后，每隔2小时换一次纯化水。透析结束后，冷冻干燥得到产物；第二步，纳米粒的制备以姜黄素为模型药物，将MePEG-Peptide-Tri-CL和姜黄素溶于丙酮为脂相溶液，将表面活性剂溶于水中为水相，按不同的脂相/水相比将脂相慢慢滴入水相，持续搅拌，形成载姜黄素-星状纳米粒原液，将制得的纳米粒溶液真空抽滤1h除去有机溶剂，6000r/min离心20min后，获得溶液纳米粒溶液。2.如权利要求1所述一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法，其特征在于，所述1，2，3-丙烷三甲酸、ε-己内酯、辛酸亚锡的投料物质的量之比为1∶20～80∶0.05～0.40；所述二氯甲烷/冰乙醚体积比为1∶...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭钫元，杨根生，吴文超，吴江青，黄冬雪，张逸菲，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33