一种藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒，属于检测试剂盒技术领域；所述固定座上设有数个容器孔；所述数个容器孔中分别设有Reaction Mix管、Reverse Transcriptase管、DEPC水管、SYBR Premix Ex Taq II管、TMPRSS6引物管、β‑Actin引物管；所述盒盖上设有与容器孔相对应的浅槽；它结构简单、设计合理、使用方便，制造容易、检测过程不易受污染；在检测藏系绵羊TMPRSS6基因表达时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒
本技术涉及一种藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒，属于检测试剂盒

技术介绍
TMPRSS6基因编码的跨膜丝氨酸蛋白酶(Matriptase-2)能够降解细胞膜上的调控蛋白HJV，进而下调BMPs-SMAD信号通路，抑制铁调素(hepcidin)的表达。而铁调素(hepcidin)通过调节肠铁吸收和巨噬细胞铁的释放来维持铁代谢平衡。因此，TMPRSS6基因的正常表达对维持机体铁稳态发挥关键作用。研究表明，铁稳态和低氧适应之间可能存在协同调控，而低氧对铁稳态的影响归功于低氧诱导因子(HIF)和铁调素(hepcidin)。低氧诱导因子(HIF)可刺激TMPRSS6高表达，下调铁调素(hepcidin)的表达，促进膜转铁蛋白(FPN1)表达，从而释放贮存铁，满足低氧条件下机体血红蛋白和红细胞生成增加对铁的需求。藏系绵羊(Tibetansheep)长期生活在青藏高原及其毗邻的高寒牧区，对高原低氧胁迫具有极好的适应性和抗逆性，是典型的低氧模式动物。检测藏系绵羊TMPRSS6基因表达，有助于发现低氧状态下铁稳态的作用靶标，对探索藏系绵羊适应高原低氧胁迫的铁稳态机制和选育高产耐低氧绵羊品种具有重要意义，同时为低氧导致的铁代谢紊乱疾病机制的研究和治疗提供新靶点。
技术实现思路
本技术的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种结构简单，设计合理、使用方便的藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒；在检测藏系绵羊TMPRSS6基因表达时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。为实现上述目的，本技术采用的技术方案是：它包含盒体、盒盖、固定座；所述固定座上设有数个容器孔；所述数个容器孔中分别设有ReactionMix管、ReverseTranscriptase管、DEPC水管、SYBRPremixExTaqII管、TMPRSS6引物管、β-Actin引物管；所述盒盖上设有与容器孔相对应的浅槽。作为优选，所述ReactionMix管为5×iScriptTMReactionMix管。作为优选，所述ReverseTranscriptase管为iScriptTMReverseTranscriptase管。作为优选，所述TMPRSS6引物管中的引物为特异性扩增绵羊TMPRSS6基因的引物，上游引物序列为：5’-ACTGCTTCCAGGAGGAAAGCAT-3’，下游引物序列为：5’-AGCTGCAGCAGGGCCACGTCGTA-3’；引物浓度为12.5pmol/μL。作为优选，所述β-Actin引物管中的引物为特异性扩增绵羊β-Actin基因的引物，上游引物序列为：5’-AGCCTTCCTTCCTGGGCATGGA-3’，下游引物序列为：5’-GGACAGCACCGTGTTGGCGTAGA-3’；引物浓度为12.5pmol/μL。作为优选，所述TMPRSS6引物管中的引物含有特异性扩增绵羊TMPRSS6基因的上游引物和下游引物。作为优选，所述β-Actin引物管中的引物含有特异性扩增绵羊β-Actin基因的上游引物和下游引物。采用上述结构后，本技术有益效果为：本技术所述的一种藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒结构简单、设计合理、使用方便，制造容易、检测过程不易受污染；在检测藏系绵羊TMPRSS6基因表达时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。附图说明为了更清楚地说明本技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本技术的结构示意图；附图标记说明：盒体1、盒盖2、固定座3、ReactionMix管4、ReverseTranscriptase管5、DEPC水管6、SYBRPremixExTaqII管7、TMPRSS6引物管8、β-Actin引物管9。具体实施方式下面结合附图对本技术作进一步的说明。参看如图1所示，它包含盒体1、盒盖2、固定座3；所述固定座3上设有数个容器孔；所述数个容器孔中分别设有ReactionMix管4、ReverseTranscriptase管5、DEPC水管6、SYBRPremixExTaqII管7、TMPRSS6引物管8、β-Actin引物管9；所述盒盖2上设有与容器孔相对应的浅槽；所述容器孔的尺寸根据ReactionMix管4、ReverseTranscriptase管5、DEPC水管6、SYBRPremixExTaqII管7、TMPRSS6引物管8、β-Actin引物管9的规格而变化。作为优选，所述ReactionMix管4为5×iScriptTMReactionMix管。作为优选，所述ReverseTranscriptase管5为iScriptTMReverseTranscriptase管。作为优选，所述TMPRSS6引物管8中的引物为特异性扩增绵羊TMPRSS6基因的引物，上游引物序列为：5’-ACTGCTTCCAGGAGGAAAGCAT-3’，下游引物序列为：5’-AGCTGCAGCAGGGCCACGTCGTA-3’；引物浓度为12.5pmol/μL。作为优选，所述β-Actin引物管9中的引物为特异性扩增绵羊β-Actin基因的引物，上游引物序列为：5’-AGCCTTCCTTCCTGGGCATGGA-3’，下游引物序列为：5’-GGACAGCACCGTGTTGGCGTAGA-3’；引物浓度为12.5pmol/μL。作为优选，所述TMPRSS6引物管8中的引物含有特异性扩增绵羊TMPRSS6基因的上游引物和下游引物；作为优选，所述β-Actin引物管9中的引物含有特异性扩增绵羊β-Actin基因的上游引物和下游引物。操作方法：01、总RNA提取新鲜或冷冻组织，常规提取总RNA。02、cDNA合成将逆转录体系中各物质按照表1所示配比在逆转录管中混合。表1成分加样量RNA1.0ug5×iScriptTMReactionMix2.0uliScriptTMReverseTranscriptase0.5ulDEPC水加DEPC水至总体积为10ul按照如下程序反应：25℃5min，46℃20min，95℃1min，逆转录合成cDNA，合成后加100ulDEPC水，以此为模板进行Real-TimePCR。03、Real-TimePCR将反应体系中各物质按照表2所示配比在PCR管中混合，并做好标记。表2成分TMPRSS6基因β-Actin基因模板cDNA3ul3ul引物2ul2ulSYBRPremixExTaqII5ul5ul总体积10ul10ul将PCR管按顺序放入扩增仪反应孔内按照如下程序反应：98℃3min30s(预变性)98℃15s，58℃30s，60℃30s，40个循环72℃10min。按照仪器使用说明，选定使用的反应孔、设置样品名称、标记荧光种类，选择结果输出路径，启动反应。04、结果判断增长曲线呈S型，熔解曲线有单一峰值，且特征峰位于退火温度处，则扩增产物特异性好，CT值可信。计算TMPRSS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒，它包含盒体、盒盖、固定座；其特征在于：所述固定座上设有数个容器孔；所述数个容器孔中分别设有Reaction Mix管、Reverse Transcriptase管、DEPC水管、SYBR Premix Ex Taq II管、TMPRSS6引物管、β‑Actin引物管；所述盒盖上设有与容器孔相对应的浅槽。

【技术特征摘要】
1.一种藏系绵羊TMPRSS6基因表达检测试剂盒，它包含盒体、盒盖、固定座；其特征在于：所述固定座上设有数个容器孔；所述数个容器孔中分别设有ReactionMix管、ReverseTranscriptase管、DEPC水管、SYBRPremixExTaqII管、TMPRSS6引物管、β-Actin引物管；所述盒盖上设有与容器孔相对应的浅槽。2....

【专利技术属性】
技术研发人员：贺鹏迦，马彦男，马正才，董艳娇，敏妍滢，马永生，
申请(专利权)人：甘肃民族师范学院，
类型：新型
国别省市：甘肃,62