一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按试剂R1组分含量，配制PBS缓冲液，调pH，作R1缓冲液；将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG‑8000溶于R1缓冲液，得试剂R1；(2)按试剂R2组分含量，配制PBS缓冲液，调pH，作R2缓冲液；将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液，得R2分散液；制胶乳包被的铜蓝蛋白抗体；R2分散液溶解胶乳包被的铜蓝蛋白抗体，得试剂R2。本发明专利技术的优点为：(1)操作简单、快速；(2)试剂盒灵敏度、准确度高；(3)采取不同粒径胶乳微球，提高试剂盒灵敏度和线性范围；(4)试剂盒稳定性佳，特异性强；(5)适合全自动测试。

A preparation method of ceruloplasmin detection kit

The invention discloses a preparation method of ceruloplasmin detection kit, which comprises the following steps: (1) according to the reagent R1 content, pH prepared PBS buffer, R1 buffer; NaCl, NaN3, PEG, trehalose, Zuela on the 8000 dissolved in R1 buffer was reagent R1; (2) according to the reagent R2 content, pH prepared PBS buffer, R2 buffer, NaN3, BSA; NaCl, Arabia cement dissolved in R2 buffer, R2 dispersion; preparation of latex. Ceruloplasmin antibody was R2 dispersion; Ceruloplasmin antibody was dissolved latex. Well, R2 reagent. The advantages of the invention are: (1) the operation is simple and fast; (2) the sensitivity and accuracy of the kit are high; (3) take different particle size latex microspheres to improve the sensitivity and linearity range of the kit; (4) the kit has good stability and specificity; (5) it is suitable for full-automatic test.

【技术实现步骤摘要】
一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法
本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法。
技术介绍
铜蓝蛋白(ceruloplasmin，CER)又称铜氧化酶，是一种含铜的α2糖蛋白，分子量约为12-16万，不易纯化。目前所知，铜蓝蛋白为一个单链多肽，每分子含6-7个铜原子，由于含铜而呈蓝色，含糖约10％，末端唾液酸与多肽链连接，具有遗传上的基因多形性。其作用为调节铜在机体各个部位的分布、合成含铜的酶蛋白，有着抗氧化剂的作用，并具有氧化酶活性，对多酚及多胺类底物有催化其氧化的能力。一般认为，铜蓝蛋白由肝脏合成，一部分由胆道排泄，尿中含量甚微。铜蓝蛋白的测定对某些肝、胆、肾等疾病的诊断有一定意义。目前，检测铜蓝蛋白的方法主要是酶联免疫吸附法，但酶联免疫吸附法的具体操作相对繁琐，且定量检测效果不佳，结果受人为因素影响结果较大。因此，目前急需一种操作简单、结果检测准确的铜蓝蛋白检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种操作简单、结果检测准确的铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R1的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-8000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R2的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2-4次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入铜蓝蛋白抗体，于37℃下反应3-4h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2-4次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA；c.2-8℃封存45-50h，得最终所需的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体；④用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体，超声分散，最终制得试剂R2；其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在试剂R2中的最终浓度为9％-11％。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，试剂R1的PBS缓冲液的pH为8.3。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)中，试剂R2的PBS缓冲液的pH为8.3。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的步骤a中，采用的MES缓冲液为100mMMES缓冲液。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的步骤a中，采用的EDAC溶液为50g/L的EDAC溶液。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的步骤a中，采用的NHS溶液为50g/L的NHS溶液。作为本专利技术的优选方式之一，所述制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的步骤b中，加入的BSA为30g/L的BSA。本专利技术相比现有技术的优点在于：(1)采用本方法制备的试剂盒具有较高的检测灵敏度和准确度，且使用操作简单、快速，从检测到出结果只需10分钟；(2)乳包被的铜蓝蛋白抗体的制备过程中，采取了不同粒径的胶乳微球混合使用，大大提高了试剂盒的灵敏度和线性范围；(3)采用本方法制备的试剂盒与样品所形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，在特定波长下有一定的吸光度，特异性强；(4)采用本方法制备的试剂盒可用于全自动生化分析仪上，适合全自动测试，可大规模的开展和推广。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例的一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R1的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-8000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R2的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于100mMMES缓冲液中，加入50g/LEDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入50g/LNHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入铜蓝蛋白抗体，于37℃下反应3h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA30g/L；c.2℃封存45h，得最终所需的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体；④用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体，超声分散，最终制得试剂R2；其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在试剂R2中的最终浓度为9％。实施例2本实施例的一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R1的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-8000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R2的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于100mMMES缓冲液中，加入50g/LEDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入50g/LNHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复4次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入铜蓝蛋白抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：

【技术特征摘要】
1.一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：①按照上述试剂R1的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-8000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：①按照上述试剂R2的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2-4次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入铜蓝蛋白抗体，于37℃下反应3-4h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2-4次，最后将沉淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴铮，朱雨，丁先骏，庄庆华，吴泽东，朱卫中，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34