【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一氧化氮检测试剂盒，具体为一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、一氧化氮(no)是一种小分子自由基，具有高度的亲脂性和膜穿透能力，是体内重要的效应和信使分子，对微循环的舒缩有重要的调节作用。一氧化氮是左旋-精氨酸(l-精氨酸)在一氧化氮合酶(nos)的作用下生成的，可作为较好的血管内皮细胞舒张因子(edrf)和新型生物信息递质，除具有扩张血管、降低血压、松弛平滑肌等活性外，还具有信号传递、酶活性调节、免疫调节及抗(致)氧化损伤等生物活性。同时，一氧化氮也是一种毒性分子，过量的一氧化氮在身体发生炎症及免疫反应时，对机体产生损伤作用。因此，一氧化氮检测对疾病的临床辅助诊断、病情的跟踪分析与判定、临床治疗疗效动态跟踪和预后评价有重要的意义。
2、检测一氧化氮能够帮助研究人员了解疾病发病机制，也能够有效地帮助医生提供合适的临床治疗方式。目前一氧化氮试剂盒的基本原理为：在r1试剂中加入盐酸多巴胺，在r2试剂中加入酚试剂(3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐，mbth)，血清样本中的一氧化氮以亚硝酸盐(no2-)和硝酸盐(no3-)的形式存在，在强酸性条件下，盐酸多巴胺上的邻苯二酚结构可以将硝酸根(no3-)还原为亚硝酸根(no2-)，而亚硝酸根又可以与芳香族伯胺在强酸介质下生成重氮盐，该重氮盐与酚试剂反应，生成紫红色复合物，在545nm波长下有最大吸收峰，其吸光度变化率与底物中亚硝酸盐(no2-)和硝酸盐(no3-)的浓度有关，读取该处吸光值，根据吸光值计算出亚硝酸盐的浓度，由于一氧化氮的浓
3、但是，盐酸多巴胺的稳定性很差，很容易发生自氧化反应产生颜色变化，从而改变正常反应的颜色变化，因此一氧化氮试剂盒的稳定性一直是难以解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，在r1试剂中加入2-氨基对苯二酚盐酸盐代替盐酸多巴胺，采用高离子浓度的磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液，r2试剂采用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，同时加入多环酚类稳定剂，在提高了试剂自身稳定性和开瓶稳定性的同时，提高试剂的热稳定性。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，所述的一氧化氮检测试剂盒包括试剂r1和试剂r2；
4、其中，试剂r1包括：磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、edta、2-氨基对苯二酚盐酸盐和防腐剂；试剂r2包括：缓冲液、mbth和防腐剂。
5、在本专利技术中，一氧化氮检测试剂盒的反应原理为：在强酸性条件下，r1试剂的2-氨基对苯二酚盐酸盐上的对苯二酚结构将血清样本中的硝酸根(no3-)还原为亚硝酸根(no2-)，而亚硝酸根(no2-)与2-氨基对苯二酚盐酸盐上的1个芳香族伯胺在强酸介质下生成重氮盐，该重氮盐与酚试剂(mbth)反应，生成紫红色复合物，在545nm波长下有最大吸收峰，读取该处吸光值，根据吸光值计算出亚硝酸盐(no2-)的浓度，进而测算出一氧化氮(no)的浓度。所述试剂盒中，用2-氨基对苯二酚盐酸盐而非盐酸多巴胺，是为了克服盐酸多巴胺的不稳定性，对苯二酚的结构在稳定性上要大大优于邻苯二酚的结构，且2-氨基对苯二酚盐酸盐含有1个氨基，既能将硝酸根还原为亚硝酸根，又可以在强酸介质下提供芳香族伯胺的功能，生成重氮盐。
6、同时，为了进一步提高试剂r1的开瓶稳定剂，试剂r1中选择以磷酸盐缓冲液为缓冲体系，与2-氨基对苯二酚盐酸盐配合使用，使其开瓶稳定性达到较为理想的效果。
7、作为本专利技术优选的技术方案，所述试剂r2还包括多环酚类稳定剂。
8、优选地，所述多环酚类稳定剂选自植物铁蛋白、牛血清白蛋白、海藻糖或甘露醇中的任意一种或至少两种的组合，优选为植物铁蛋白。
9、优选地，所述试剂r1和试剂r2中的防腐剂各自独立地选自叠氮钠、庆大霉素、硫柳汞或异噻唑啉酮中的任意一种或者至少两种的组合，优选为proclin300。
10、作为本专利技术优选的技术方案，所述试剂r2的缓冲液选自柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或mes盐酸缓冲液中的任意一种或至少两种的组合，优选为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
11、作为本专利技术优选的技术方案，所述试剂r1中磷酸二氢钾的浓度为40-300mm，例如可以是44mm、88mm、176mm、204mm、264mm、296mm，优选为150-300mm。
12、优选地，所述试剂r1中磷酸氢二钠的浓度为1-100mm，例如可以是4mm、6mm、12mm、24mm、36mm、48mm、60mm、72mm、84mm、96mm，优选为20-100mm。
13、本专利技术中，作为优选的方案，所述试剂r1中缓冲液的离子浓度可尽量选择较高离子浓度，磷酸二氢钾与磷酸氢二钠总的摩尔浓度不低于100mm，优选为150mm-400mm。
14、优选地，所述试剂r1中edta的浓度为0.5-1.5g/l，例如可以是0.6g/l、0.7g/l、0.8g/l、0.9g/l、1.0g/l、1.1g/l、1.2g/l、1.3g/l、1.4g/l或1.5g/l等。
15、优选地，所述试剂r1中2-氨基对苯二酚盐酸盐的浓度为50-100mm，例如可以是52mm、55mm、58mm、60mm、65mm、70mm、75mm、80mm、85mm、90mm、95mm、96mm或100mm。
16、优选地，所述试剂r1中防腐剂的浓度为0.5-1.5g/l，例如可以是0.6g/l、0.7g/l、0.8g/l、0.9g/l、1.0g/l、1.1g/l、1.2g/l、1.3g/l、1.4g/l或1.5g/l等。
17、优选地，所述试剂r1的ph为5.5-6.5，例如可以是5.5、5.6、5.8、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。
18、作为本专利技术优选的技术方案，所述试剂r2中柠檬酸的浓度为50-160mm，例如可以是77mm、98mm、116mm、134mm、155mm或160mm。
19、优选地，所述试剂r2中柠檬酸钠的浓度为15-60mm，例如可以是16mm、23mm、34mm、45mm或52mm等。
20、优选地，所述试剂r2中mbth的浓度为10-30mm，例如可以是10mm、12mm、15mm、18mm、20mm、22mm、25mm、28mm或30mm。
21、优选地，所述试剂r2中多环酚类稳定剂的浓度为0.5-1.5g/l，例如可以是0.6g/l、0.7g/l、0.8g/l、0.9g/l、1.0g/l、1.1g/l、1.2g/l、1.3g/l、1.4g/l或1.5g/l等。
22、优选地，所述试剂r2中防腐剂的浓度为0.5-1.5g/l，例如可以是0.6g/l、0.7g/l、0.8g本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述一氧化氮检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
2.根据权利要求1所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2还包括多环酚类稳定剂；
3.根据权利要求2所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述多环酚类稳定剂为植物铁蛋白；
4.根据权利要求1所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中磷酸二氢钾的浓度为40-300mM；
5.根据权利要求3所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中柠檬酸的浓度为50-160mM；
6.根据权利要求1所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述一氧化氮检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
7.一种如权利要求1-6任一项所述的一氧化氮检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的一氧化氮检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂R1的保存温度为2～8℃；所述试剂R2的保存温度为2～8℃。p>
9.一种如权利要求1-6任一项所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒在非疾病诊断方面的使用方法，其特征在于，所述一氧化氮检测试剂盒与生化分析仪配套使用，具体步骤包括：
10.如权利要求1-6任一项所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒在一氧化氮含量检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述一氧化氮检测试剂盒包括试剂r1和试剂r2；
2.根据权利要求1所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r2还包括多环酚类稳定剂；
3.根据权利要求2所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述多环酚类稳定剂为植物铁蛋白；
4.根据权利要求1所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r1中磷酸二氢钾的浓度为40-300mm；
5.根据权利要求3所述的一种稳定性好的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r2中柠檬酸的浓度为50-160mm；
6.根据权利要求1所述的一种稳定...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁锐，朱雨，张金东，徐运，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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