从大赖草中提取与穗形相关成分的高活性DNA的方法技术

本发明专利技术涉及一种从大赖草核酸中高活性与穗形相关成分的确定，首先将大赖草叶片先经液氮研磨，抽提，低速离心进行两相分离，沉淀提出总ＤＮＡ，再经乙醇洗涤后抽干、灭菌，经ＲＮａｓｅ保温后，过Ｓｅｐｈｅｒｏｓｅ－２８柱，分离器ＤＮＡ和ＲＮＡ，再进行纯化处理，经超声波及限制性内切酶酶切成ＤＮＡ片段，通过花粉管通道将其转化到栽培小麦中去，该方法经过多次反复试验证明，小麦穗形均都产生了大穗形变异转化株，经过分子杂交检测，证实大穗形小麦是由于大赖草基因转化后产生的结果。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种大赖草核酸中高活性与穗形相关成分的确定，尤其是从大赖草中提取总DNA，通过花粉管通道将其转化到小麦中去。大赖草(Leyaus racemsus)!(am)(zve)是一种生长在半干旱荒漠边缘的多年生杂草，为禾本科赖草属(Leymes Hocbst)植物，它具有抗干旱，耐碱，高度抗病、抗虫、穗大、粒多、籽粒蛋白质含量高等多种优良遗传性状，因而在分子育种工作中是个比较理想的优良基因供体。本专利技术经过多年田间试验证明，大赖草基因中含有高活性的与穗形相关的成分，将该成分通过花粉管通道转化外源基因至培育小麦中去，它能较早的影响小麦的穗形，并最终产生出大穗形小麦。本专利技术目的在于，研究确定大赖草核酸中高活性与穗形相关的成分，首先将大赖草叶片经液氮研磨、抽提、低速离心进行两相分离，沉淀出总DNA，再经乙醇洗涤抽干，灭菌，经RNase保温处理后过Sepherose-28柱分离总DNA和RNA，收集总DNA再进行纯化处理，将纯化后的总DNA经超声波破碎成DNA片段，通过花粉管通道将其转化到小麦中去即可。该方法经过反复试验证明，采用该方法确定大赖草核酸中高活性与穗形相关的成分，是行之有效的，其小麦的穗形均都产生了大穗形变异转化株，经过分子杂交检测，证实大穗小麦是由于大赖草基因转化后产生的结果。本专利技术所述的大赖草核酸中高活性与穗形相关成分的确定，首先将大赖草叶片经液氮研磨，用三羟基氨基甲烷盐酸(Tris-HCL)缓冲液及十二烷基磺酸钠抽提，60℃热酚一氯仿处理，低速离心进行两相分离，水相经异丙醇沉淀，提出总DNA，再经70％乙醇洗涤后抽干，溶于灭菌水中，经RNase保温处理后，过Sepberose-28柱分离总DNA和RNA，收集总DNA，将收集的总DNA峰，经乙醇沉淀后抽干，溶于TF缓冲液中，得纯化后的总DNA，然后再经超声波及限制性内切酶酶切成大小为0.5-10kb的DNA片段，通过花粉管通道将其转化到载培小麦中去即可。实施例取1克大赖草叶片，经液氮研磨，加入10ml三羟基氨基甲烷盐酸缓冲液及1/10体积10％的十二烷基磺酸钠抽提，等体积各50％热酚一氯仿处理，于60℃保温10分钟，低速离心进行两相分离，水相加入0.6倍体积的异丙醇沉淀，提出总DNA，再用70％乙醇洗涤后抽干，溶于灭菌水中，加入RNasp50mg/ml,37℃、0.5小时保温，过Sepbernse-28柱，收集第一峰，再经乙醇沉淀后抽干，溶于TE缓冲液中，得纯化后的总DNA，再经超声波及限制性内切酶酶切成大小为0.5-10kb的DNA片段，再通过花粉管通道将其转化到栽培小麦中去即可，可获得大穗形变异转化株。权利要求1.一种大赖草核酸中高活性与穗形相关成分的确定，其特征在于，首先将大赖草叶片经液氮研磨，用三羟基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)缓冲液及十二烷基磺酸钠抽提，60℃热酚一氯仿处理，低速离心进行两相分离，水相经异丙醇沉淀，提出总DNA，再经70％乙醇洗涤后抽干，溶于灭菌水中，经RNase保温处理后，过Sephernse-28柱分离总DNA和RNA，收集总DNA。2.根据权利要求1所述的大赖草核酸中高活性与穗形相关成分的确定，其特征在于，将收集的总DNA峰，经乙醇沉淀后抽干，溶于1F缓冲液中，得纯化后的总DNA，然后再经超声波及限制性内切酶酶切成大小为0.5-10kb的DNA片段，通过花粉管通道将其转化到栽培小麦中去即可。全文摘要本专利技术涉及一种从大赖草核酸中高活性与穗形相关成分的确定,首先将大赖草叶片先经液氮研磨,抽提,低速离心进行两相分离,沉淀提出总DNA,再经乙醇洗涤后抽干、灭菌,经RNase保温后,过Sepherose－28柱,分离器DNA和RNA,再进行纯化处理,经超声波及限制性内切酶酶切成DNA片段,通过花粉管通道将其转化到栽培小麦中去,该方法经过多次反复试验证明,小麦穗形均都产生了大穗形变异转化株,经过分子杂交检测,证实大穗形小麦是由于大赖草基因转化后产生的结果。文档编号C07H21/00GK1221750SQ9712342公开日1999年7月7日 申请日期1997年12月27日 优先权日1997年12月27日专利技术者赵民安, 刘敏, 戚家华, 李维琪 申请人:中国科学院新疆化学研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大赖草核酸中高活性与穗形相关成分的确定，其特征在于，首先将大赖草叶片经液氮研磨，用三羟基氨基甲烷盐酸（Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ）缓冲液及十二烷基磺酸钠抽提，６０℃热酚一氯仿处理，低速离心进行两相分离，水相经异丙醇沉淀，提出总ＤＮＡ，再经７０％乙醇洗涤后抽干，溶于灭菌水中，经ＲＮａｓｐ保温处理后，过Ｓｅｐｈｅｒｏｓｅ－２Ｂ柱分离总ＤＮＡ和ＲＮＡ，收集总ＤＮＡ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵民安，刘敏，戚家华，李维琪，
申请(专利权)人：中国科学院新疆化学研究所，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]