HIV包膜多肽和疫苗制造技术

本发明专利技术提供了编码ｇｐ１２０多肽（其来自用ＭＮ－ｒｇｐ１２０的疫苗试验的逃逸分离物）的寡核苷酸序列和所编码的ｇｐ１２０多肽。利用亚单位疫苗中的一种或多种分离物的ｇｐ１２０多肽（通常与ＭＮ－ｒｇｐ１２０一起），可提供抗一些ＨＩＶ菌株的保护作用，这些ＨＩＶ菌株与疫苗菌株（例如；ＭＮ－ｒｇｐ１２０）有足够的差异，使得所说的疫苗不提供抗这些菌株的保护作用。本发明专利技术也提供了所述多肽诱导的抗体。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及HIV包膜多肽和包含这些多肽的疫苗。相关技术的描述获得性免疫缺陷综合症(AIDS)是由命名为人免疫缺陷病毒(HIV)的逆转录病毒引起的。过去为研制一种基于抗体或细胞反应诱导保护性免疫应答的疫苗付出了很大的努力。最近的尝试是利用亚单位疫苗，其中由于安全性原因，在疫苗中利用HIV蛋白质(而非稀释的或灭活的病毒)作为免疫原。一般地，亚单位疫苗包括gp120，即位于病毒表面的HIV包膜蛋白部分。有关HIV包膜蛋白已有许多描述，并且人们熟知来自许多HIV菌株的氨基酸序列与编码HIV包膜的核酸序列(Myers,G.等，1992.人逆转录病毒和爱滋病。核酸和氨基酸序列的编缉与分析。Los Alamos国家实验室，Los Alamos，新墨西哥)。HIV包膜蛋白是约160kd的糖蛋白(gp160)，其在羧基末端区锚定在膜的双层分子上。其N端区段(gp120)伸出至围绕毒粒的含水环境中，且C端区段(gp41)跨越膜。通过宿主细胞媒介方法，将gp160切割成gp120和整合膜蛋白gp41。由于在gp120和gp41之间没有任何共价连接，有时从毒粒的表面释放出游离的gp120，并感染细胞。gp120分子包含60,000道尔顿的多肽核心，该多肽核心广泛地被N-连接的糖基化作用所修饰，而使分子的表观分子量增加至120,000道尔顿。gp120的氨基酸序列含有散布五个高变结构域的五个相对保守结构域。在gp120初级序列中的18个半胱氨酸残基的位置，和在gp120序列中的大约24个N-连接的糖基化位点的13个位置，对所有gp120序列来说都是相同的。高变结构域包括大量的氨基酸取代，插入和缺失。这些结构域中的序列变化使得来自各种病毒分离物的gp120分子间产生了多达全序列30％的可变性。尽管有这一变异，所有gp120序列均保留了病毒结合病毒受体CD4的能力，且保留了与gp41相互作用而引起病毒和宿主细胞膜的融合的能力。gp120曾是广泛研究的目标，因其是亚单位疫苗的疫苗候选者，并且是很有可能接近免疫进攻的病毒蛋白质。现在，利用gp120MN菌株的临床试验正在进行。然而，至今没有任何人类疫苗试验具有足够规模以确认或否认疫苗的有效性。HIV-1疫苗候选者的研制由于缺乏HIV-1感染的体内或体外模型(其精确地近似于人类自然感染的条件)而遇到障碍。已描述了几种候选HIV-1疫苗广泛激发能够中和体外各种多样化的HIV-1分离物的交叉反应抗体。然而，体外试验与体内保护性免疫的相关性是不确定的。虽然已对黑猩猩提供了几种具有抗同源和异源HIV-1菌株的保护作用的疫苗，但是保护性反应并非总是与体外的中和试验有联系，其中这种体外中和试验在T细胞系上或在凝集素和细胞因子活化的外周血液单核细胞(PBMCs)上进行。虽然在黑猩猩中成功获得的保护作用是鼓励人心的，并历史地证明是可靠的疫苗有效性指示剂，但所有HIV-1感染的实验模型的感染条件显著不同于人类自然感染条件。体内和体外的HIV-1感染实验所受局限性是HIV-1(为体外或体内感染实验，其需要制备病毒储备液)的体外扩增强加了一种遗传选择，它能导致病毒准种的光谱不同于用于建立培养物的临床样品中存在的变体的光谱。由于这些不确定性，以及所传输的病毒的量，初始复制所涉及的位点和细胞类型，和病毒散布的动力学更大的不确定性，使得当前以体外或体内试验有效可靠预测疫苗功效的能力尚无把握。曾进入人类临床试验的HIV-1疫苗候选者之一是重组gp120，其由HIV-1的MN菌株在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中制备(MN-rgp120)(Berman等；病毒学杂志7:4464-9(1992))。至今，大约499个成年人曾参与该疫苗的1期和2期免疫原性和安全性试验。所收集的数据足以证明MN-rgp120的安全性，免疫原性，并且按照0,1和6个月免疫进度，在多于95％的免疫个体中激发了高效价的抗体。然而，在这些试验的过程中，九个接收了MN-rgp120的被接种者由高风险行为被HIV-1感染。小型试验(如这些)，其群体具有低的感染速率和较小规模的无效对照组，没有足够的统计效应确认或者否认疫苗功效。然而，仍然在寻求基于gp120或另外HIV蛋白质的有效的疫苗，以产生抗HIV另一些菌株的保护作用，从而阻止该疾病的传播。
技术介绍
描述重组亚单位疫苗见Berman等，PCT/US91/02250中所描述的(出版号W091/15238,19911十月7日)。也参见，例如Hu等，自然328:721-724(1987)(疫苗病毒-HIV包膜重组疫苗)；Arthur等，病毒学杂志63(12):5046-5053(1989)(纯化gp120)；和Berman等，Proc.Natl.Acad.Sci.美国85:5200-5204(1988)(重组包膜糖蛋白gp120)。已知gp120的许多序列。本文所参考的gp120序列(其来自ⅢB亚菌株HIV-1LAI)是由Muesing等测定的，见核酸结构和人AIDS/淋巴结病逆转录病毒的表达，自然313:450-458(1985)。Myers等列出了来自HIV-1菌株的NY-5,Jrcsf,Z6,Z321，以HXB2的gp120的序列＂，人逆转录病毒及爱滋病；核酸和氨基酸序列的编缉和分析＂，Los Alamos国家实验室，Los Alamos，新墨西哥(1992)。泰国人分离物A244的序列由McCutchan等提供，＂泰国的HIV-1基因变体＂爱滋病研究和人类逆转录病毒8:1887-1895(1992)。MN1984克隆见Gurgo等所描述的＂，两种新的美国HIV-1分离物的包膜序列＂，病毒学164:531-536(1988)。如本文所使用的，MN,MN-rgp120,MN克隆或分离物指MNGEN。MNGEN的氨基酸序列见SEQ ID NO.29。以上每一参考文献本文以其全文作为参考。专利技术概要本专利技术提供了编码gp120多肽(其来自用MN-rgp120的疫苗试验的逃逸(breakthrough)分离物)的寡核苷酸序列和所编码的gp120多肽。利用亚单位疫苗中的一种或多种分离物的gp120多肽(通常与MN-rgp120一起)，可提供抗一些HIV菌株的保护作用，这些HIV菌株与疫苗菌株(例如；MN-rgp120)有足够的差异，使得所说的疫苗不提供抗这些菌株的保护作用。本专利技术也提供了所述多肽诱导的抗体。附图简述附图说明图1说明在被HIV-1感染的被接种者中抗体对MN-rgp120反应的动力学。在所示的时间点收集血清，并测定与MN-rgp120(空心圈)或衍生自MN-rgp120V3结构域的合成肽(实心圈)的抗体反应性。箭头表明注射的日期。加号表明第一次检测到HIV-1感染的时间。阴影部分表明是在HIV-1感染之后所收集的数据。来自被接种者C6的数据在A组中显示；C8在B组；C7-C组；C11-D组；C10-E组；C17-F组；和C15-G组。图2说明在HIV-1感染的被接种者中CD4阻断抗体反应的动力学。在所示的时间点收集血清，并测定能够阻止标记的MN-rgp120结合到CD4细胞表面的抗体。箭头表明注射的日期。加号表明第一次检测到HIV-1感染的时间。阴影部分表明是在HIV-1感染之后所收本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，该多肽包含ＨＩＶ ｇｐ１２０的氨基酸序列，所说的氨基酸序列选自由ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２，４，６，８，１０，１２，１４，１６，１８，２０，２２，２４，２６和２８，以及它们的片段组成的组。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：菲利普W伯曼，
申请(专利权)人：遗传技术研究公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]