一种天胡荽的组织培养快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种天胡荽的组织培养快繁方法，天胡荽是多年生草本，茎纤弱线长，匍匐，平铺地上成片，秃净或近秃净；茎节上生根，单叶互生，圆形或近肾形，基部心形，裂片短，钝齿，上面深绿色，下面绿色；叶柄纤弱，伞形花序与叶对生，单生于节上，苞片倒披针形，伞形花序。夏、秋收集全草，晒干。生长于我国南方较湿润地。以天胡荽带腋芽茎段为外植体建立了天胡荽离体快繁体系，为解决天胡荽规模化生产奠定基础。本发明专利技术以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了天胡荽的组织培养快速繁殖，为天胡荽的产业化发展提供技术支持。

A method for rapid propagation of tissue culture of HYDROCOTYLE sibthorpioides

The invention discloses a method for rapid propagation of HYDROCOTYLE sibthorpioides tissue culture, HYDROCOTYLE sibthorpioides is a perennial herbaceous, delicate stems creeping, long, flat on a net or near net, bald bald; root, stem leaf nodes alternate, orbicular or reniform, base cordate, lobes short, blunt teeth, below on the surface of the deep green, green; petiole delicate, umbels opposite leaves, was born in a single day, bracts oblanceolate, umbel. In summer and autumn, the whole grass is collected and dried. It grows in the south of our country. To day coriander stems with axillary buds established HYDROCOTYLE sibthorpioides in vitro propagation system as explants, which lays the foundation for solving large-scale production of HYDROCOTYLE sibthorpioides. The stems with axillary buds as explants, the bud induction, proliferation culture, root induction and Plantlet Transplanting process of HYDROCOTYLE sibthorpioides tissue culture rapid propagation, provide technical support for the industrial development of HYDROCOTYLE sibthorpioides.

【技术实现步骤摘要】
一种天胡荽的组织培养快繁方法
本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种天胡荽的组织培养快繁方法。
技术介绍
天胡荽又名：鸡肠菜、破铜钱、野芹菜、地钱草。多年生草本。茎纤弱线长，匍匐，平铺地上成片，秃净或近秃净；茎节上生根。单叶互生，圆形或近肾形，基部心形，裂片短，钝齿，上面深绿色，下面绿色；叶柄纤弱，伞形花序与叶对生，单生于节上，苞片倒披针形，伞形花序。4~5月开花，绿白色，花无柄或有柄；萼齿缺乏，花瓣卵形，呈镊合状排列，双悬果略呈心脏形，分果侧面扁平，光滑或有斑点，背棱略锐。夏、秋收集全草，晒干。生长分布于广西、广东、云南、福建、江苏、河南、辽宁。生于路旁草地较湿润处。天胡荽味苦、辛，性寒。具有清热利尿，消肿解毒。传统的天胡荽获取方法是野外采挖野生植物资源，易造成水土流失和严重土壤沙漠化。此外，天胡荽种子主要来自野生，其品种混杂，种子稀缺，发芽极低，野生天胡荽资源已不能适应规模化和标准化生产的需要，成为妨碍天胡荽产业发展的最大瓶颈。国内外在植物资源、化学成分分析、生药鉴定、药理作用和临床应用、愈伤组织培养及再分化等方面做了大量的工作。但是，生产中仍然存在许多理论和实践急需解决的问题。为了谋求产业的发展，引领天胡荽产业走向高技术、高规格、高水准的科技之路，组织培养已经成为目前研究和开发的热点。为促进天胡荽产业化的发展。因此，非常有必要建立天胡荽离体再生体系，为天胡荽的产业化发展提供技术支持。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以天胡荽带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了天胡荽的组织培养快速繁殖，从而实现本专利技术的目的。本专利技术的一种天胡荽的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：（1）外植体的处理：选取健壮天胡荽植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成6.0长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗3.5h，再用毛轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗3.5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒33s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3cm小段并接种到诱导培养基上,先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3300lx，直至诱导形成丛生芽；（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约3cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为5100lx，置于培养温度为24℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽；（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至4cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3300lx，培养温度为24℃的条件下培养直至长出根；（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达4cm左右时，并且长出侧根，苗高6cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中。步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+4mg/LNAA+3mg/L6-BA+2mg/LKT+4%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9。步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+4.0mg/L6-BA+1.2mg/LNAA+4%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9。步骤（5）所述的生根培养基为：MS+14mg/LKH2PO4+3.0%蔗糖+0.8%琼脂+0.12%活性炭，pH值为5.9。本专利技术的优点是:以天胡荽带腋芽茎段为外植体建立了天胡荽离体快繁体系，为解决天胡荽规模化生产奠定基础。本专利技术以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了天胡荽的组织培养快速繁殖，为天胡荽的产业化发展提供技术支持。技术易撑握，操作方便，得到的种苗健壮，生长发芽快，种苗品种纯正，发芽率高，能满足市场需要。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1：（1）外植体的处理：选取健壮天胡荽植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成6厘米长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗4h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒7min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在36℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照13小时，光照强度为2800lx条件下培养22天每个腋芽茎段有7个丛生芽。诱导培养基为：MS+4mg/LNAA+3mg/L6-BA+0.8mg/LKT+4.5%蔗糖+6.5%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.9。（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约4cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在30℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3300lx，置于培养温度为30℃的条件下培养22天增殖倍数达到9倍。多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为：MS+1.2mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+4.5%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.9。（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至3.5cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在30℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照15小时，光照强度为2300lx，培养温度为30℃的条件下培养7天即可见根形成，诱导率达99%，平均根数达7条，根系为淡棕色、细长、分枝数少，培养22天后根长平均可达到7cm左右。所述的生根培养基为：MS+15.5mg/LKH2PO4+235%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.9。（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达5cm左右时，并且长出侧根，苗高7cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中，成活率达96%以上。实施例2：（1）外植体的处理：选取健壮天胡荽植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成7厘米长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗6h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒12s后用无菌水洗7次，再用0.1%升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗7次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在30℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照15小时，光照强度为2300lx条件下培养25天每个腋芽茎段有7个丛生芽。诱导培养基为：MS+4.5mg/LNAA+1.5mg/L6-BA+0.9mg/LKT+4.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种天胡荽的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：（1）外植体的处理：选取健壮天胡荽植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成6.0长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗3.5h，再用毛轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗3.5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒33s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3cm小段并接种到诱导培养基上,先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3300lx，直至诱导形成丛生芽；（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约3cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为5100lx，置于培养温度为24℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽；（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至4cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3300lx，培养温度为24℃的条件下培养直至长出根；（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达4cm左右时，并且长出侧根，苗高6cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中。...

【技术特征摘要】
1.一种天胡荽的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：（1）外植体的处理：选取健壮天胡荽植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成6.0长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗3.5h，再用毛轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗3.5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒33s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3cm小段并接种到诱导培养基上,先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3300lx，直至诱导形成丛生芽；（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约3cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为5100lx，置于培养温度为24℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽；（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至4cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈金水，
申请(专利权)人：陈金水，
类型：发明
国别省市：广西,45