天胡荽有效部位的制备方法及应用技术

天胡荽有效部位的制备方法及应用，属于中药提取与应用的技术领域。其有效部位的制备方法包括：天胡荽药材中加入１－１０倍重量的乙醇提取１－３次，乙醇的浓度为３０－７０％；将提取液减压回收乙醇后上大孔树脂柱，水洗脱３个体积后用浓度５０－７０％的乙醇洗脱；将纯化液采用硅胶柱层析，收集洗脱液，减压回收溶剂，再用甲醇多次重结晶，即得到天胡荽的有效部位，天胡荽有效部位具有治疗或预防肝纤维化的作用，本发明专利技术设计合理、工艺简单、成本低，而且天胡荽有效部位来源于天然药物，与同类治疗抗肝纤维化的化学药品相比具有低毒高效性，并对有效部位进行了对ＨＢＶ转染ＨｅｐＧ２细胞体外的抑制试验以及抗肝肝纤维化相关的药效学实验，表明其具有显著的药理作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药提取与应用的
，具体涉及天胡荽有效部位的制备 方法及在制备抗肝纤维化药物中的应用。
技术介绍
肝纤维化(h印atic fibrosis)是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏 内纤维组织的异常增生，是诸多慢性肝病发展至肝硬化过程中所共有的病理组织学变化，是影响慢性肝病预后的重要环节。造成肝细胞坏死和炎症的致病因 子有很多，在国外，尤其是欧美国家，以酒精中毒为多数，在我国主要由肝炎 病毒所致最常见。病毒性肝炎肝纤维化，是人体受到肝炎病毒感染后，引起肝内慢性炎症刺 激而产生纤维组织增生。目前研究表明引起慢性肝炎导致肝纤维化的病毒主要 是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及丁型肝炎病毒(HDV)。在我国 主要是HBV导致的病毒性肝炎肝纤维化。国外学者对小儿慢性肝炎进行了 1一10 年的随访研究表明，3.4 32%慢性肝炎可发展为肝纤维化，年龄越大发生越显 著。近年来，流行病学的研究表明，肝硬化患者中的乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 明显高于非肝硬化者或一般人群，北京报告肝硬化病人的HBsAg阳性率高达 85.7%，上海报告为85.5%，台湾报告为85.4%，广州报告为74. 5%，广西报告为 71.8%，这说明朋V是导致肝硬化的驻要因素。我国是乙型肝炎的高流行区，HBV 在全国人群中的感染率为60%, HBsAg携带者约有l，5亿，慢性乙型肝炎患者有 3000万以上，这些病人如得不到有效的治疗，就会演变成肝纤维化，肝纤维化 的许多患者通过不同的途径，又进一步发展成肝硬化，在肝硬化的基础上，又 有一定比例的患者，尤其是病毒性肝炎为病因者可继续发展为肝癌，引起严重的不良后果。可见病毒性肝炎肝纤维化是一类严重威胁我国人民群众生命健康、 给国民经济造成重大负担的疾病。近年来，抗肝纤维化的治疗虽然有了一些进展，但目前仍无理想的药物， 秋水仙碱，青霉胺等十几种药物，虽有抑制肝纤维化的作用，但毒副作用较大， 限制了其临床上的使用。因此研究开发抗病毒性肝炎纤维化药物是一项极为紧 迫而重要的课题。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术通过对天胡荽的研究与提取，设计提 供一种天胡荽有效部位的制备方法及其在抗肝纤维的应用的技术方案。 所述的天胡荽有效部位的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤(1) 天胡荽药材中加入1-10倍重量的乙醇提取1-3次，乙醇的浓度为 30-70%;(2) 将上述的提取液减压回收乙醇后上大孔树脂柱，水洗脱3个体积后用 浓度50-70%的乙醇洗脱；(3) 经步骤(2)的纯化液采用硅胶柱层析，收集洗脱液，减压回收溶剂， 再用甲醇多次重结晶，即得到天胡荽的有效部位。所述的天胡荽有效部位的制备方法，其特征在于步骤(1)用3-8倍重量的 乙醇提取2-3次，乙醇的浓度为40-60%。所述的天胡荽有效部位的制备方法，其特征在于步骤(2)采用NKA-9、D101、 AB-8、 HPD100、 HPD400型大孔树脂装柱。所述的天胡荽有效部位的制备方法，其特征在于步骤(3)采用氯仿甲醇 水不同比例的洗脱液进行洗脱。所述的天胡荽有效部位在制备治疗或预防肝纤维化的药物中的应用。所述的天胡荽有效部位的应用，其特征在于天胡荽有效部位可制备成药剂学上使用的片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、溶液剂和注射剂。本专利技术以民间用于肝炎、肝硬化治疗的天胡荽为研究对象，在相关药效实 验跟踪指导下，筛选得到具有抗肝纤维化作用的有效部位，该方法设计合理、 工艺简单、成本低，而且天胡荽有效部位来源于天然药物，与同类治疗抗肝纤维化的化学药品相比具有低毒高效性，并对有效部位进行了对HBV转染H印G2细胞体外的抑制试验以及抗肝肝纤维化相关的药效学实验，表明其具有显著的 药理作用。具体实施例方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，实施例中HAS、 HHAS为本专利技术 人对从天胡荽有效部位中分离得到的两个单体成分的命名，天胡荽药材采于杭 州地区，经专家鉴定为伞形科植物天胡荽///^rozoO^e wT^/ or^'wWa Lam. 的全草。实施例l(1) 天胡荽药材用8倍重量的乙醇提取3次，乙醇的浓度为50%，每次l 小时；提取工艺的验证取药材2kg，按最佳提取工艺进行提取，以HAS的提 取得率为考察指标，结果HAS的转移率为87. 2%，有效部位的提取得率按HAS、 HHAS的总量计为1. 2%;(2) 将上述的提取液减压回收乙醇后，上HPD400型大孔树脂柱，上样液 的浓度为0.20mg (生药)/ml，上样量折合生药与树脂比为1: 4 (kg/L)，水洗 脱3个体积后用浓度70%的乙醇洗脱；(3)取纯化后的有效部位，采用硅胶柱层析，用CHC13:Me0H:H2O20:3:l (上层)-CHC13:Me0H:H20=10:3:l (上层)洗脱，收集CHC13:Me0H:H20二10:3:l 洗脱液，减压回收溶剂，用甲醇多次重结晶，即得HAS，得率为0. 51% (HAS: 生药)。实施例2(O天胡荽药材用6倍重量的乙醇提取2次，乙醇的浓度为60%，每次l小时；(2)将上述的提取液减压回收乙醇后，上HPD400型大孔树脂柱，上样液 的浓度为0.25mg (生药)/ml，上样量折合生药与树脂比为1: 4 (kg/L)，水洗 脱3个体积后用浓度50%的乙醇洗脱；(3)取纯化后的有效部位，采用硅胶柱层析，用CHC13:Me0H:H2O20:3:l (上层)-CHC13:MeOH:H20=10:3:l (上层)洗脱，收集CHC13:Me0H:H20=10:3:1 洗脱液，减压回收溶剂，用甲醇多次重结晶，即得HAS，得率为0. 52% (HAS: 生药)。实施例3(1) 天胡荽药材用10倍重量的乙醇提取1次，乙醇的浓度为70%;(2) 将上述的提取液减压回收乙醇后上NKA-9、 DlOl、 AB-8或HPD100大 孔树脂柱，上样液的浓度为0.25mg (生药)/ml， 0. 30mg (生药)/ml、 0. 15mg(生药)/ml上样量折合生药与树脂比为1: 4 (kg/L)，水洗脱3个体积后用浓 度60%的乙醇洗脱；(3)取纯化后的有效部位，采用硅胶柱层析，用CHC13:MeOH:H2(^20:3:l(上层)-CHC13:Me0H:H20=10:3:l (上层)洗脱，收集CHC13:Me0H:H20=10:3:1 洗脱液，减压回收溶剂，用甲醇多次重结晶，即得HAS，得率为0. 49% (HAS: 生药)。一有效部位对HBV转染H印G2细胞的体外抑制试验(1)药物毒性试验(TC50): MTT法测定结果表明50%死亡药物浓度(TC50) 为18mg/ml。(2) 药物对2.2. 15细胞分泌HBsAg、 HBeAg的抑制作用(IC50):有效部位 各剂量组对2. 2. 15细胞分泌的HBsAg活性有显著的抑制作用，并显示一定的量 效关系。有效部位三个高剂量组对2. 2. 15细胞分泌的HBeAg活性有显著的抑制 作用，并显示一定的量效关系，两个低剂量组(1.1mg/ml和0.55mg/ml)无明显抑制作用(P〉0.05)。(表l， 2)(3) 有效部位的治疗指数依据有效部位对HBsAg、 HBeAg的抑制作用情况， 选本文档来自技高网...

【技术保护点】
天胡荽有效部位的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：　（１）天胡荽药材中加入１－１０倍重量的乙醇提取１－３次，乙醇的浓度为３０－７０％；　（２）将上述的提取液减压回收乙醇后上大孔树脂柱，水洗脱３个体积后用浓度５０－７０％的乙醇 洗脱；　（３）经步骤（２）的纯化液采用硅胶柱层析，收集洗脱液，减压回收溶剂，再用甲醇多次重结晶，即得到天胡荽的有效部位。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张如松，
申请(专利权)人：张如松，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]