本发明专利技术涉及一种从油菜花粉中制备的治疗前列腺增生的总甾醇及其制备方法，油菜花粉总甾醇含量为75‑90%(wt%)，具体的甾醇成份及重量百分比为β‑谷甾醇10‑15%、菜油甾醇15‑20%、豆甾醇60‑70%和环阿屯醇2‑10%；其制备方法：以油菜花粉为原料，经超临界液体萃取、皂化和分子蒸馏纯化工艺制备而成。所制备的油菜花粉总甾醇成分确切，含量高，相关药效试验显示，该总甾醇明显降低前列腺增生大鼠的前列腺及背叶、腹叶的重量和体积，且疗效均优于前列康等现有技术产品，具有统计学意义；且其给药剂量明显降低，具有统计学意义。
A kind of rape pollen total sterol for the treatment of prostatic hyperplasia and its preparation method
【技术实现步骤摘要】
一种治疗前列腺增生的油菜花粉总甾醇及其制备方法(一)
：本专利技术涉及一种中药提取方法，具体为一种从油菜花粉中制备高纯度甾醇提取物的方法。(二)
技术介绍
：前列腺是男性体内比较小的一个器官，成人仅类似栗子大小，但是几乎所有的成年男性一生中都会受其影响，最常见的前列腺疾病为前列腺炎和良性前列腺增生。其中，儿童较少发生前列腺疾病，青壮年和老年人发病率则较高，且随着年龄的不同，发生病种也不同；如前列腺炎好发于青壮年，35岁以上男子的发病率可达35％-40％；良性前列腺增生是常见的老年男性多发病，60-69岁的老年人发病率可达50-60％，70-80岁的老年人发病率则高达80％以上。油菜蜂花粉(BrassicacampestrisL.beepollen)是一种由蜜蜂采集花粉混合蜜蜂特殊的分泌物混合而成的一种天然物质，是我国来源最多的蜜源蜂花粉，年销售油菜蜂花粉上千吨，在药品、保健品中应用广泛。油菜蜂花粉主要成分为甾醇，还含有多糖、黄酮类化合物、脂类等多种成分，提取时需破壁且还需除去脂质杂质影响。良性前列腺增生(BenignProstaticHyperplasia，BPH)是一种老年男性常见的生理病变，发病率日趋渐长，对老年男性的身体和心理健康构成了威胁。近年来国内外研究证明油菜花粉中的甾醇类物质具有较好的抗前列腺增生的功效，目前国内临床上已有普乐安、普适泰等多种花粉制剂(主要有效成分为甾醇)用于治疗前列腺疾病，虽具有临床治疗价值，但由于花粉中总甾醇等有效成分含量低，尤其是β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和环阿屯醇等的含量几乎检测不到，导致患者日服量大，临床应用不方便。故高效提取用于良性前列腺增生的油菜蜂花粉中总甾醇是目前研究的热点，已有诸多文献报道。如CN101569630A和CN101570560A分别公开了油菜花粉经超临界CO2萃取后过硅胶柱层析，有机溶剂洗脱得到24-亚甲基胆甾醇、花粉烷甾醇两个甾醇化合物和环按烯醇，两者的区别主要在于洗脱溶剂不同。上述两个专利采用了石油醚、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂，存在污染产品和环境的难题，而且由于总甾醇属于不皂化物，其萃取后直接进行硅胶柱层析不利于甾醇类物质的快速制备纯化，故制得的总甾醇种类少，得率低。CN1660225A和CN103417597A分别公开了两种有机溶剂提取制备油菜蜂花粉有效部分及其制备方法，在柱层析有机溶剂洗脱基础上，再使用有机溶剂提取，不仅溶剂消耗量更大，初级萃取物杂质多，后续分离难度大和成本高，而且较多有机溶剂残留更难去除，增加溶剂去除成本的同时也给终端产品带来更多潜在安全风险。也有文献报道采用超临界萃取、皂化提取总甾醇，如CN102411036A公开了松花粉超临界萃取、皂化提纯甾醇的方法，于95℃皂化回流3h，后经无水乙醚提取，得到的甾醇中主要成分为β-谷甾醇，占总含量的74％。该专利虽然采用超临界萃取+皂化提纯，但皂化温度高，回流时间长，效率低成本高，使用乙醚增加了潜在安全及环境污染风险，且仅对β-谷甾醇进行定量，并未明确总甾醇的其他有效成分及其含量。陆柏益(竹笋中甾醇类化合物的研究——竹笋甾醇化学、工艺学及生物学功能[M].浙江大学，2007.60-88)通过采用超临界CO2萃取竹笋甾醇，萃取压力为26.2MPa，萃取温度为43.4℃，CO2流量为25.4L/h，萃取时间为2.5h，甾醇萃取率为(93.4±4.5)％，短程分子蒸馏后，总甾醇纯度约69％。油菜花粉中主要成分为甾醇，而竹笋中除含有甾醇外，还含有大量多糖、氨基酸和多肽。该工艺中未去除脂质成分的干扰，分离效率低，影响甾醇得率及纯度，不能大规模应用。可见，目前虽然已有文献报道采用超临界CO2萃取松花粉、竹笋中的甾醇成分，但是这些文献都未考虑待提取物中脂质成分的影响，而且提取的总甾醇主要药效成分与油菜蜂花粉区别较大，高效环保提取油菜蜂花粉中总甾醇仍然是目前急需解决的技术难点。(三)
技术实现思路
：本专利技术提供了一种治疗前列腺增生的油菜花粉总甾醇，油菜花粉总甾醇重量含量为75-90％(wt％)，总甾醇成分明确，为β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和环阿屯醇4种，且各组分含量稳定，其重量百分比为β-谷甾醇10-15％、菜油甾醇15-20％、豆甾醇60-70％和环阿屯醇2-10％。相关药效试验显示，本专利技术制备的油菜花粉总甾醇可以明显降低小鼠前列腺各叶的重量、体积，且显著降低了给药剂量。本专利技术还提供一种治疗前列腺增生的油菜花粉总甾醇的制备方法，其提取目标是油菜蜂花粉中治疗前列腺增生的药效成分β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和环阿屯醇等总甾醇，以油菜花粉为原料，采用安全性高的超临界CO2萃取技术，收集分离釜中棕色油膏状萃取物，将提取的棕色油膏状萃取物经皂化工艺处理后，再进行分子蒸馏分离纯化，制备得到用于治疗前列腺增生的高纯度油菜花粉总甾醇，油菜花粉总甾醇含量为75-90％(wt％)，其制备方法和步骤如下：1、超临界CO2流体萃取：取油菜花粉放入萃取釜，CO2超临界萃取(超临界萃取仪：美国Thar超临界流体超细微造粒系统SFP，美国Thar科技公司有限公司)，萃取压力为28～35MPa，时间1～3h，温度45～70℃，CO2流速为10～20g/min；收集分离釜中棕色油膏状萃取物，称重，备用；2、油菜花粉甾醇分离纯化方法：2.1皂化工艺：按1g:5～10mL比例取棕色油膏状萃取物、5～10％氢氧化钠乙醇溶液(m/V)混合，加入到反应容器中，在70～90℃水浴中回流加热20～40min后，加入4～6倍氢氧化钠乙醇溶液体积量的饱和NaCl溶液，转入分液漏斗中，用4～6倍氢氧化钠乙醇溶液体积量的正己烷有机溶剂萃取1-3次，其目的是除去羧酸盐、乙醇和水，合并萃取液，水洗至pH中性后用无水硫酸钠脱水，于旋转蒸发器上40-60℃蒸干，其目的是进一步除去乙醇、水和正己烷，待分子蒸馏纯化用；2.2分子蒸馏纯化：进料温度40～60℃，蒸发面温度80～200℃，系统压力5～20Pa，刮膜器转速为150～250r/min，进料速度2～6ml/min的条件下进行分离纯化；此时冷凝管通入冷凝水，冷阱充满液氮，在旋转蒸发时未完全脱除的水分、小分子烃类物质和部分轻脂肪酸，在冷阱壁面上冷凝下来，靠重力作用逐渐从馏出物口流出，而甾醇类较重分子从残余液出口收集即得到油菜花粉甾醇。其中，步骤1超临界CO2流体萃取之前，对油菜花粉进行干燥，干燥时间1～2h，温度40～60℃，然后采用聚乙烯(PE)袋双层包装，4℃冷藏，备用。所述的步骤1中萃取压力30-35MPa，时间1.5-2.5h，温度为50-60℃，CO2流速为15～18g/min。所述的步骤2.1皂化工艺中加入的氢氧化钠乙醇溶液(m/V)浓度为8％，棕色油膏状萃取物与氢氧化钠乙醇溶液的重量体积比为1g:7.5ml；水浴温度为80℃，水浴时间为30min。本专利技术以油菜花粉为原料，采用原料前处理、超临界萃取、皂化后分子蒸馏纯化工艺方法制备高纯度油菜花粉总甾醇，用于治疗前列腺增生，本专利技术运用了与现有不同的工艺方法和不同的有机溶剂，从油菜花粉中提取制备了治疗前列腺增生的总甾醇，获得了意想不到的效果，其突出的有益效果如下：1.本专利技术制备的油菜花粉总甾醇主要成分为β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和环阿本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种治疗前列腺增生的油菜花粉总甾醇，其特征是，油菜花粉总甾醇重量含量为75‑90％，其甾醇成份及重量百分比为β‑谷甾醇10‑15％、菜油甾醇15‑20％、豆甾醇60‑70％和环阿屯醇2‑10％。
【技术特征摘要】
1.一种治疗前列腺增生的油菜花粉总甾醇，其特征是，油菜花粉总甾醇重量含量为75-90％，其甾醇成份及重量百分比为β-谷甾醇10-15％、菜油甾醇15-20％、豆甾醇60-70％和环阿屯醇2-10％。2.根据权利要求1所述的治疗前列腺增生的油菜花粉总甾醇的制备方法，其特征是：以油菜花粉为原料，经超临界液体萃取、皂化和分子蒸馏纯化工艺，制备得到治疗前列腺增生的总甾醇，该总甾醇为β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和环阿屯醇4种，总甾醇纯度75-90％，其具体方法为：(1)超临界CO2流体萃取：取油菜花粉放入萃取釜，CO2超临界萃取，萃取压力为28～35MPa，时间1～3h，温度45～70℃，CO2流速为10～20g/min，收集分离釜中棕色油膏状萃取物；(2)皂化工艺：按重量体积比g/ml为1:5～10比例取棕色油膏状萃取物、重量体积百分比为5％～10％的氢氧化钠乙醇溶液混合，加入到反应容器中，在70～90℃水浴中回流加热20～40min后，加入4-6倍氢氧化钠乙醇溶液体积量的饱和NaCl溶液，转入分液漏斗中，用4-6倍氢氧化钠乙醇溶液体积量的正己烷有机溶剂萃取1-3次，合并萃取液，水洗至pH中...
【专利技术属性】
技术研发人员：王如伟，杨开，何厚洪，吴健，陈玲芳，瞿伟，毕真真，冯依璠，蔡红丹，
申请(专利权)人：浙江康恩贝制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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