一种用于p53蛋白的荧光检测剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于p53蛋白的荧光检测剂，包括磁性纳米粒子、双链DNA、以及包覆在磁性纳米粒子表面用于与双链DNA连接的功能层；所述的双链DNA由DNA‑1单链和DNA‑2单链杂交得到；所述的DNA‑1为羧基寡核苷酸探针，序列为：COOH‑(CH2)6‑TTT TTT TCC GGG CAT GCC CGG CAT TGC‑3′；所述的DNA‑2为DNA‑1的部分互补序列，序列为：5′‑GGG CAT GCC C‑3′。本发明专利技术还公开了所述的荧光检测剂的制备方法和在检测野生型p53蛋白中的应用。该制剂的制备成本低，使用该制剂能够敏感、快速、精确的捕获p53蛋白，实现p53蛋白的超灵敏、高选择性、高准确度的检测，而且检测限低，能够定量分析检测正常细胞和癌细胞裂解液中的p53蛋白，可用于临床癌症诊断和癌症早期发现。

A fluorescent detector for p53 protein and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种用于p53蛋白的荧光检测剂及其制备方法和应用
本专利技术属于p53蛋白检测
；具体涉及一种野生型p53蛋白的荧光检测剂。
技术介绍
癌症的发病率逐年上升，已成为威胁人类健康的主要疾病之一。据估计，如果癌症可以在早期发现和治疗，那么癌症死亡率的会降低大约30％。因此，癌症生物标志物的早期检测已成为癌症筛查和预后研究的热点。p53蛋白作为肿瘤抑制因子和转录因子蛋白，在细胞周期、凋亡和DNA修复中起着重要的调控作用。p53蛋白分为野生型和突变型两种。在所有的癌症中，p53基因的突变增加到大约50％，并且在各种各样的人类癌症中，这种基因突变导致突变型p53蛋白的积累和野生型p53蛋白的减少。因此，p53蛋白的有效检测一直是临床研究和癌症早期诊断的重点。这种特异的相互作用已作为一种抗体替代品来检测p53蛋白。现有的检测方法主要用来检测野生型的p53蛋白。目前，有许多于能敏感检测p53蛋白的方法。各种技术，包括表面增强拉曼散射(SERS)，化学发光，电化学方法和葡萄糖计等已被用于p53蛋白的检测。例如公开号为CN104977277A的中国专利文献公开了一种可同时检测细胞内野生型和变异p本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于p53蛋白的荧光检测剂，其特征在于，包括磁性纳米粒子、双链DNA、以及包覆在磁性纳米粒子表面用于与双链DNA连接的功能层；所述的双链DNA由DNA‑1单链和DNA‑2单链杂交得到；所述的DNA‑1为羧基寡核苷酸探针，序列为：COOH‑(CH2)6‑TTT TTT TCC GGG CAT GCC CGG CAT TGC‑3′；所述的DNA‑2为DNA‑1的部分互补序列，序列为：5′‑GGG CAT GCC C‑3′。

【技术特征摘要】
1.一种用于p53蛋白的荧光检测剂，其特征在于，包括磁性纳米粒子、双链DNA、以及包覆在磁性纳米粒子表面用于与双链DNA连接的功能层；所述的双链DNA由DNA-1单链和DNA-2单链杂交得到；所述的DNA-1为羧基寡核苷酸探针，序列为：COOH-(CH2)6-TTTTTTTCCGGGCATGCCCGGCATTGC-3′；所述的DNA-2为DNA-1的部分互补序列，序列为：5′-GGGCATGCCC-3′。2.如权利要求1所述的用于p53蛋白的荧光检测剂，其特征在于，所述的磁性纳米粒子为磁性Fe3O4NPs、Fe(0)纳米粒子中的至少一种。3.如权利要求2所述的用于p53蛋白的荧光检测剂，其特征在于，所述的功能层通过表面修饰的氨基与DNA-1单链连接。4.如权利要求1～3任一项所述的用于p53蛋白的荧光检测剂，其特征在于，所述的功能层包括包覆在磁性纳米粒子表面的的PAA，以及修饰在PAA表面的氨化的葡聚糖。5.一种权利要求1～4任一项所述的用于p53蛋白的荧光检测剂的制备方法，其特征在于，将氨化的葡聚糖修饰在吸附有PAA的磁性纳米粒子表面，随后与DNA-1单链进行固化反应，再后与DNA-2进行杂交反应，即得；所述的制备方法优选包括以下步骤：步骤(1)：将磁性纳米粒子分散在PAA溶液中振动孵育后，分离得到PAA包覆的磁性纳米粒子；步骤(2)：PAA包覆的磁性纳米粒子与氨化的葡聚糖反应，得到葡聚糖修饰的磁性纳米粒子；步骤(3)：葡聚糖修饰的磁性纳米粒子、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓留，徐群芳，刘珍军，刘又年，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43