诱导人或动物免疫应答的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及诱导人或动物免疫应答的药物组合物，该组合物包括负载了至少由一种癌细胞系提供的至少五种癌／睾丸抗原，不负载谱系特异性分化抗原或基本上不负载谱系特异性分化抗原的树突状细胞，本发明专利技术涉及表达癌睾丸抗原而非分化抗原的多样性的分离细胞系，也涉及使用本发明专利技术的组合物诱导人或动物免疫应答的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诱导人或动物免疫应答的药物组合物。另一方面，本专利技术涉及一种获得负载(loaded with)至少五种癌/睾丸抗原，不负载谱系(lineage)特异性分化抗原或基本上不负载谱系特异性分化抗原的自体树突状细胞(dendritic cell)的方法。在其他方面，本专利技术涉及分离的黑素瘤细胞系。进一步，本专利技术涉及组合物作为免疫治疗疫苗的应用以及自体树突状细胞作为抗原呈递细胞在药物组合物或疫苗中的应用。更进一步，本专利技术涉及诱导人或动物免疫应答的方法。
技术介绍
晚期癌症是人类死亡的主要原因之一。至今还没有有效的治疗方法。癌症免疫治疗目的在于通过免疫学机制破坏肿瘤细胞。免疫治疗与传统的癌症治疗方法如外科手术、放射以及化学疗法相比较，具有更小的毒性并且至今没有严重的并发症记录。此外，免疫治疗具有针对疾病不同阶段进行施治的潜能。在初期阶段，它是经手术去除早期肿瘤时的很好的补充治疗方法，其目的在于防止转移肿瘤扩散。在疾病的晚期阶段，当传统方法无效时，往往它是唯一的治疗方法。免疫系统的主要功能是识别和破坏侵入机体的外源物质(抗原)。免疫系统能够区别“自我”和“非自我”，并且在正常情况下只对外源或“非自我”抗原产生免疫应答。尽管癌细胞起源于机体自身细胞，它们被自然免疫系统作为外来物质对待。然而，该自然免疫应答系统并没有强大到足以阻止肿瘤的出现和生长。免疫治疗的任务在于增加免疫系统识别肿瘤细胞的能力以及开发有效的肿瘤消除机制。在任何特异免疫疗法中的两个主要问题是哪些抗原用作目标以及寻找对免疫系统来说最佳的抗原呈递。能被细胞毒性T淋巴细胞(CTL)所识别的肿瘤相关抗原(TAA)是在已知的抗肿瘤免疫效应子(effector)机制中作为目标的最有效的成分。有两种主要的TAA类型独特抗原，仅在很少的肿瘤细胞中显现因而不能作为一般目标而起作用，共有(shared)或者普通(common)TAA存在于许多肿瘤当中。三组主要的共有抗原通常被认为是免疫疗法的潜在目标并且都已显示出可以诱导产生细胞毒性T淋巴细胞。这三组抗原是癌/睾丸抗原(CT抗原)，肿瘤超表达抗原，以及谱系特异分化抗原。CT抗原由肿瘤或种系(germ line)特异基因编码，代表了共有肿瘤相关抗原的最大组群之一。CT抗原最早发现在黑素瘤细胞中，但是在许多其他人类恶性肿瘤中也已被发现。在正常组织中它们仅被表达于睾丸中并且在一些病例中表达于胎盘。表达这些抗原的正常细胞由于缺少MHC分子的表达，因此这些抗原正常情况下不被T淋巴细胞所识别。这使得CT抗原成为特异癌症免疫疗法中非常引人注目的目标。最近的临床试验显示通过靶向特异CT抗原的治疗，大量黑素瘤和膀胱癌病人的肿瘤发生了衰退(Nishiyama et al.，2001，Clin.Cancer Res.，v.7，pp.23-31；Thurner et al.，1999，J.Exp.Med.，v.190，pp.1669-1678)。只对某些CT抗原和相关肽决定表位报道了通过T细胞的CT抗原识别。然而，所有的CT抗原都可以被考虑作为免疫疗法的潜在目标。MAGE-A抗原的表达和肿瘤进展的相关性在许多的恶性肿瘤中被发现(Brasseur et al.，1995，Int.J.Cancer，v.63，pp.375-380；Eura et al.，1995，Int.J.Cancer，v.64，pp.304-308；Katano et al.，1997，J Surg.Oncol.，v.64，pp.195-201；Patard et al.，1995，Int.J.Cancer，v.64，pp.60-64)。另一组CT抗原，MAGE-B抗原，显示出比MAGE-A抗原明显低的肿瘤特异性表达。第三组，MAGE-C抗原，显示出与MAGE-A抗原相类似的表达模式。针对于MAGE-C抗原的CTL反应还没有被报道过。被描述过的几个具有CT抗原特征的非MAGE蛋白中，NY-ESO-1是目前被识别的最具免疫原性的肿瘤抗原之一。黑素瘤病人的多肽免疫临床试验证明出疾病的稳定性和在一些病人中转移的衰退(Jgeret al.，2000，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A，v.97，pp.12198-12203)。与CT抗原相反，肿瘤过表达抗原缺少严格的肿瘤特异表达，因为它们的表达能够在一些正常组织类型而不是睾丸中以低水平被检测到。针对这些抗原中的某些抗原的免疫疗法的进展对癌症病人来说是有利的。目前这些抗原，如CEA，p53，HER-2/Neu，MUC-1以及α-胎蛋白正在临床试验中被作为可能的目标而加紧研究。肿瘤过表达抗原组只是近来才被用作临床试验中的目标，因而还缺少引起治疗性免疫应答的有效性的数据。谱系特异抗原，黑素瘤细胞分化抗原以及前列腺相关抗原到目前为止只被用来描述两种类型的人类癌症黑素瘤和前列腺癌。这一组抗原在正常分化组织和两种人类癌症中都有表达。在正常分化组织中这些抗原很少诱导免疫应答，但是，这些蛋白在癌细胞中产生免疫原性，在黑素瘤病例中，有可能检测到针对黑素瘤细胞分化抗原的T杀伤细胞反应。针对黑素瘤和前列腺癌的临床试验绝大多数使用分化抗原作为目标。在肿瘤相关抗原组中，使用TAA作为免疫疗法目标，从一些MAGE蛋白中获得了最有希望的数据。但是，尤其在黑素瘤病例中，疗效并不稳定，一些转移病灶在继续生长。这些转移对于用于免疫的MAGE抗原表达是负面的(Thurner et al.，1999，J.Exp.Med.，v.190，pp.1669-1678)。诱导多价免疫应答的一种可能是使用完整肿瘤细胞或者源于完整细胞的物质。WO9003183，US5,840,317以及US6,187,306描述了一些以黑素瘤细胞为基础的疫苗制备过程。US4108983公开了来源于通过牛痘病毒裂解的黑素瘤细胞的第一代黑素瘤疫苗。US5,635,188和US5,030,621公开了一种来自黑素瘤细胞表面抗原的疫苗，黑素瘤细胞通过在培养基中培养，随后被用作抗黑素瘤细胞的细胞表面抗原疫苗。类似地，US5,484,596揭示了治疗癌症的一种方法，其中受辐射过的肿瘤细胞被作为疫苗注射到病人体内。US6,187,306涉及表达共有免疫显性黑素瘤抗原的黑素瘤细胞系及其应用方法。任何疫苗治疗的重要方面是疫苗的给药方式。最近几年人们认识到，最有效的抗原到T细胞递送方式，特别是对于初生T细胞，是通过树突状细胞递送的方式。树突状细胞(DC)是最有效的抗原呈递细胞，以DC为基础的免疫疗法已经以不同的方式用于癌症治疗(Kugler et al.，2000，Nat Met.，v.6，pp.332-336；Nestle et al.，1998，Nature(Med.)，v.4，pp.328-332；Thurner et al.，1999，J.Exp.Med.，v.190，pp.1669-1678)，显示出该免疫疗法的极大潜力。DC的独特性质之一是它的通过细胞内吞方式摄取外源蛋白的能力，被摄取的外源蛋白然后被加工并作为多肽表位连同MHC-I类抗原一起被呈递于DC细胞表面。抗原呈递树突状细胞可以被细胞毒性T细胞识别。当肿瘤细胞抗原以肿瘤裂解物或外源加入的凋亡小体(apoptotic本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导人或动物免疫应答的药物组合物，包括呈递癌／睾丸抗原多样性的树突状细胞，其特征在于：ａ）至少五种癌／睾丸抗原，无谱系特异性分化抗原或基本上无谱系特异性分化抗原被树突状细胞呈递，ｂ）癌／睾丸抗原来自至少一种癌细胞系，该癌 细胞系表达至少五种不同的癌／睾丸抗原，不表达谱系特异性分化抗原或基本上不表达谱系特异性分化抗原，和ｃ）树突状细胞在负载癌／睾丸抗原期间是未成熟的（ＣＤ１ａ阳性，ＣＤ１４阴性，ＣＤ８３阴性）。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：A柯金，K贾恩尤加齐安，J佐伊滕，
申请(专利权)人：丹德里特生物科技公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]