用于癌细胞的细胞凋亡的核酸制造技术

本公开内容涉及具有下列细胞凋亡序列的核酸：Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：１、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：２、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：３、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：４、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：５、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：６、和Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：７。它还涉及包括具有下列细胞凋亡序列的核酸的组合物：Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：１、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：２、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：３、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：４、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：５、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：６、和Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：７。该组合物还可包括药学可接受的载体。本公开内容还包括通过给癌细胞施用血清来杀死癌细胞的方法，所述血清包括具有下列细胞凋亡序列的核酸和药学可接受的载体：Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：１、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：２、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：３、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：４、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：５、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：６、和Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：７。癌细胞可以位于患有癌症的受试者中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术在一个实施方案中涉及具有特定的细胞凋亡序列且能够诱 导癌细胞的细胞凋亡而使健康细胞不受伤害的核酸。其他实施方案涉 及使用具有这些序列的核酸诱导癌细胞的细胞凋亡的方法。體当身体中的细胞功能失常并且开始异常复制时，癌症产生。这些功能失常由细胞的DNA蓝图中的突变引起。通过试图杀死癌细胞而不伤害健康细胞来治疗癌症。这依赖癌细 胞与健康细胞的区分，当前的方法在这方面做得很少。大多数DNA癌症研究集中在癌基因和胂瘤抑制基因上，因为这些 基因与异常的细胞复制有明显的联系。然而，这些基因不一定是用于 区分癌细胞中的DNA和健康细胞中的DNA的最佳靶。专利技术概述本专利技术的一个实施方案涉及具有下列序列的核酸Seq.ID.No: 1、 Seq.ID.No: 2、 Seq.ID.No: 3、 Seq.ID.No: 4、或Seq.ID.No: 5、 Seq.ID.No: 6、 Seq.ID.No: 7。另 一实施方案涉及包括具有下列序列的核酸的组合 物Seq.ID.No: 1、 Seq.ID.No: 2、 Seq.ID.No: 3、 Seq.ID.No: 4、或 Seq.ID.No: 5、 Seq.ID.No: 6、 Seq.ID.No: 7。该组合物还可包括药学 可接受的载体。再一实施方案涉及通过给癌细胞施用血清来杀死癌细胞的方法， 所述血清包括具有下列序列的核酸和药学可接受的载体Seq.ID.No: 1 、 Seq.ID.No: 2、 Seq.ID.No: 3、 Seq.ID.No: 4、或Seq.ID.No: 5、 Seq.ID.No: 6、 Seq.ID.No: 7。癌细胞可以位于患有癌症的受试者中。附图简述通过参考下列图和详述可以更好地理解本专利技术。附图说明图1举例说明了当与来自健康细胞转录组的mRNA比对时，在LTBR基因中发现的根据本专利技术的实施方案的细胞凋亡序列。标明了 单核苷酸多态性(SNP)的位置。图2举例说明了来自6种不同的癌细胞系和4种不同癌症类型的 根据本专利技术的实施方案的细胞凋亡序列，与来自n种不同基因的相应 的健康mRNA进行比对。图3举例说明了发现候选细胞凋亡序列的方法。图4举例说明了在多种癌细胞系中的图2的细胞凋亡序列。还标 明了分离序列的PCR条件。图5举例说明了使用细胞凋亡序列引物，例如具有根据本专利技术的 实施方案的细胞凋亡序列的引物，进行单引物PCR ( single - priming PCR)的方法。图6呈现了当在凝胶上分析时，来自健康人和来自2名癌症受试 者的肿瘤或血液样品的cDNA对于各种候选细胞凋亡序列引物的单引 物PCR的结果。本专利技术的细胞凋亡序列引物包括由编号5、 8、 9、 11、 14、 60和66标识的那些。图7图解了本专利技术的4种细胞凋亡序列核酸例如DNA在一个示例 性实施方案中如何组合以根除具有4种独特的癌突变的癌细胞。详述本专利技术在一个实施方案中涉及具有细胞凋亡序列的核酸，它能够 诱导癌细胞的细胞凋亡而使健康细胞不受影响。其他实施方案涉及诱 导癌细胞的细胞凋亡的方法，这包括癌症治疗。再其他的实施方案涉 及定位细胞凋亡序列的方法。当前的癌症研究集中在癌基因和肿瘤抑制基因上，所述基因在癌 细胞中常常是突变的，但在正常细胞中则不是。然而，不是与癌症相 关的所有DNA异常都位于癌基因或肿瘤抑制基因中。因此，通过计算 地搜索在癌细胞的转录组中发现、但在健康细胞的转录组中通常缺乏 的序列来定位本专利技术的实施方案的候选细胞凋亡序列。这些序列在基 因组中的定位不是主要关心的问题。因此， 一些序列在肿瘤抑制基因 或癌基因中，而其他序列则不是。然而，通过不基于其基因组定位排 除核酸序列，避免了可能导致治疗功效减少的不必要的限制。此外， 通过排除通常位于健康转录组中的序列，候选序列对正常细胞可以具有很少的毒性或没有毒性。为了进一步增强癌细胞的破坏和可能的治疗，基本上只位于癌细 胞转录组中的序列被进一步限制在与细胞中的细胞凋亡作用相关的那 些。这些序列被称为"细胞凋亡序列"。与其说它们一定与细胞凋亡基因相关，不如说细胞凋亡序列自身当以核酸例如DNA的形式体现时 可以触发细胞死亡。例如，细胞凋亡序列可以对应于存在于许多基因中的DNA突变。 如果同时干扰所有这些基因的表达，那么细胞会因为大量蛋白质缺乏而窒息或饿死。这不同于通常与细胞凋亡相关的程序性细胞死亡。具有本专利技术的细胞凋亡序列的核酸能够以各种方式诱导癌细胞的细胞凋亡。首先，细胞凋亡序列核酸可以通过从环境中摄取和/或在细 胞中产生而导入癌细胞内。然后，细胞凋亡序列核酸可以干扰蛋白质 的细胞生产，例如通过与同源mRNA杂交。这除其他的之外可以导致 反义、沉默或干扰作用。因为细胞凋亡序列在健康细胞中不出现，所 以将细胞凋亡序列核酸导入健康细胞中应该只有很小的作用或没有作 用。细胞凋亡序列核酸可以包括DNA，特别是单链DNA。也可使用 RNA，但由于稳定性和降解问题，它在细胞中生产例如由质粒生产可 能比从癌细胞外摄取更合适。细胞凋亡序列核酸，特别是如果从癌细 胞外导入，可以是修饰的，例如通过甲基化或与其他分子缀合，以促 进摄取、转运至细胞中它们可以是活性的区域或干扰蛋白质生产的活 性等。细胞凋亡序列还可基于在癌RNA转录物中的常规和重复出现进行 选择，特别是来自不同基因的转录物，这与在一种RNA转录物中的单 次出现相反。这选择了可以鉴别多个基因中的共同突变的细胞凋亡序 列。此外，此类细胞凋亡序列的功能可能不依赖于单基因的表达水平， 而可能从多重表达水平获益。这允许细胞凋亡序列影响广泛多样的癌 细胞。结合对正常细胞的低伤害水平或不存在伤害的水平，这允许鉴 别和特异性破坏即使在具有相对低数目癌细胞的样品中的癌细胞，例如血液中的转移细胞。此外，细胞凋亡序列在多个基因中的重复出现允许同时破坏来自 这些基因的蛋白质生产。例如，癌细胞死亡可以由核糖体蛋白质缺乏引起。以细胞凋亡序列在多个基因中重复出现的同样方式，它们还可以 在多种癌症类型中重复出现。细胞凋亡序列不是癌症类型特异性的， 尽管每一个序列在单个癌症类型中可能具有较高的存在，和/或在一名 单独的受试者中高于另一名。因此，在试图例如通过治疗破坏癌细胞前，希望发展受试者或样品的癌症谱。使用20ml血液样品和细胞凋亡 序列作为RT-PCR引物可以促进这种制谱(profiling)。图5显示了使用细胞凋亡序列作为引物的一种方法。活组织检查和其他样品可以 使用，但一般不需要。例如，在受试者血液中的转移癌细胞中可以检 测细胞凋亡序列的存在，这随后确保了其在受试者胂瘤中的存在。表l中显示了本专利技术的示例性的细胞凋亡序列。当本说明书自始 至终提及这些序列时，例如在图中描述的实验中，使用该表中标明的 ID号。尽管细胞凋亡序列不必都是特定长度，但表l中的细胞凋亡序 列长度都是17个碱基对，从而允许特异性，但促进功能。<table>table see original document page 7</column></row><table>在具体实施方案中， 一个或多个细胞凋亡序列可以以核酸例如DNA的形式提供，并且可以用于诱导癌细胞中的细胞凋亡。细胞凋亡 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸，其具有选自下列的序列：Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：１、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：２、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：３、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：４、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：５、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：６、和Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ：７。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：DA诺尔思，
申请(专利权)人：天空遗传学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]