亲和配体及其相关方法技术

公开了可用于温和洗脱亲和色谱的亲和配体，包括对免疫球蛋白M、A和E有特异性的亲和配体，以及鉴定和使用这类亲和配体的方法。

Affinity ligands and their related methods

Affinity ligands that can be used for mild elution affinity chromatography are disclosed, including specific affinity ligands for immunoglobulin M, A and E, and methods for identifying and using such affinity ligands.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】亲和配体及其相关方法专利
本专利技术涉及亲和配体，如抗体亲和配体，以及使用、鉴定和制备亲和配体的方法。相关申请的交叉引用本申请要求2015年5月28日提交的美国临时专利申请号62/167,387的优先权，该申请通过引用全文纳入本文。关于通过EFS-WEB以文本文件形式提交的序列表序列表的正式文本通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子化提交，文件名1010896_ST25.txt，2016年5月26日生成，大小103,855字节，与说明书同时提交。该ASCII格式文档中所含的序列表是本说明书一部分且通过引用全文纳入本文。
技术介绍
亲和色谱是基于亲和配体与其靶标之间，如抗体和抗原之间的高特异性相互作用分离生物化学混合物的方法。与所需靶标选择性相互作用的亲和配体被固定在固体支持物上以产生可以柱形式使用的亲和基质。亲和色谱可用于多种应用，包括从细胞游离提取物或细胞培养上清的蛋白质纯化、核酸纯化、和从血液纯化。
技术实现思路
本专利技术提供了生成亲和配体的方法，这类亲和配体的用途，和特异性亲和配体。在一方面，提供了特异性结合靶分子的亲和配体，其中该亲和配体与靶分子的特异性结合强度在包括(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合靶分子的亲和配体，其中所述亲和配体与靶分子的特异性结合强度在包括(i)约4.0至约5.5的pH或(ii)约1‑2M MgCl2的缓冲液条件下降低。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.28 US 62/167,3871.一种特异性结合靶分子的亲和配体，其中所述亲和配体与靶分子的特异性结合强度在包括(i)约4.0至约5.5的pH或(ii)约1-2MMgCl2的缓冲液条件下降低。2.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述缓冲液条件包括约4.0至约5.0的pH。3.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述缓冲液条件包括约4.0的pH。4.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述缓冲液条件包括约5.0的pH。5.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述缓冲液条件包括2MMgCl2。6.如权利要求5所述的亲和配体，其特征在于，所述缓冲液条件还包括相对中性的pH。7.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述靶分子是免疫球蛋白。8.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述靶分子是选自下组的免疫球蛋白：免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、或免疫球蛋白E(IgE)。9.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是免疫球蛋白。10.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是重组Fab片段或Fab片段衍生物。11.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是包含选自图1A所示的任何序列的重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgE抗体。12.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是包含选自图1B所示的任何序列的轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgE抗体。13.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是包含选自图2A所示的任何序列的重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgA抗体。14.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是包含选自图2B所示的任何序列的轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgA抗体。15.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是包含选自图3A所示的任何序列的重链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgM抗体。16.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体是包含选自图3B所示的任何序列的轻链互补决定区CDR1、CDR2和CDR3序列的抗IgM抗体。17.如权利要求1所述的亲和配体，其特征在于，所述亲和配体连接固体支持物。18.如权利要求17所述的亲和配体，其特征在于，所述固体支持物是珠或样品板。19.如权利要求18所述的亲和配体，其特征在于，所述珠是琼脂糖珠，聚苯乙烯珠、聚甲基丙烯酸酯珠，聚丙烯酰胺珠，磁珠，或顺磁珠。20.一种分离靶分子的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供与亲和配体连接的固体支持物；b)使所述固体支持物与含所述靶分子的样品接触；c)用洗涤缓冲液洗涤所述固体支持物以去除样品的未结合组分；并且d)用包括(i)约4.0至约5.5的pH或(ii)约1-2MMgCl2的洗脱缓冲液从所述固体支持物上洗脱结合的靶分子。21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述亲和配体是免疫球蛋白。22.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述靶分子是免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、或免疫球蛋白E(IgE)。23.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液包括约4.0至约5.5的pH和相对低的盐浓度。24.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液包括约1M至2MMgCl2和相对中性的pH。25.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液包括约1M至2MMgCl2和约6.0至8.0的pH。26.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗脱包括用包含(i)约4.0至约5.5的pH或(ii)约1-2MMgCl2的洗脱缓冲液的单步洗脱。27.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗脱包括用包含(i)约4.0至约5.5的pH或(ii)约1-2MMgCl2的多个洗脱缓冲液的多步洗脱，其中所述多个洗脱缓冲液依次施加在固体支持物上，其中具有较高盐浓度的洗脱缓冲液在具有较低盐浓度的洗脱缓冲液之后施加并且具有较低pH的洗脱缓冲液在具有较高pH的洗脱缓冲液之后施加。28.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗脱包括在洗脱时间期间用具有线性增加的盐浓度梯度的洗脱缓冲液进行梯度洗脱，其中最大盐浓度是约1-2MMgCl2。29.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗脱包括在洗脱时间期间用具有线性降低的pH梯度的洗脱缓冲液进行梯度洗脱，其中最小pH是约4.0。30.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述洗涤缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·纳皮克，S·帕琴，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US