一种花生A和B基因组间染色体易位系的创制及鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种花生A和B基因组间染色体易位系的创制及鉴定方法，所述的创制方法是以花生栽培品种四粒红为材料，在盛花期使用Co

【技术实现步骤摘要】
一种花生A和B基因组间染色体易位系的创制及鉴定方法
本专利技术属于农业生物
，涉及一种花生A和B基因组间染色体易位系的创制及鉴定方法。
技术介绍
花生(ArachishypogaeaL.，2n＝4x＝40，AABB)是世界上重要的油料作物。在长期人工选择及驯化过程中，花生栽培种遗传多样性降低，育种亲本遗传基础日趋狭窄，严重影响了育种效率，创制新种质和挖掘新基因变得尤为重要。花生栽培种是异源四倍体，是由二倍体野生种A.duranensis和A.经过偶然杂交，然后加倍形成四倍体野生花生A.monticola，又经过人工驯化最终演化而来。经过长期系统研究，花生学界普遍认为A.duranensis和A.是花生栽培种的二倍体祖先种，分别提供了花生栽培种的A和B基因组(RobledoG，LaviaGI，SeijoG.SpeciesrelationsamongwildArachisspecieswiththeAgenomeasrevealedbyFISHmappingofrDNAlociandheterochromatindetection[J].Theoretical&Applie本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种花生A和B基因组间染色体易位系的创制方法，其特征在于，以花生栽培品种四粒红为材料，在盛花期使用Co

【技术特征摘要】
1.一种花生A和B基因组间染色体易位系的创制方法，其特征在于，以花生栽培品种四粒红为材料，在盛花期使用Co60-γ射线辐照花生植株，得到A和B基因组间染色体易位的花生植株。2.根据权利要求1所述的花生A和B基因组间染色体易位系的创制方法，其特征在于，所述的创制方法具体如下：(1)将花生栽培品种“四粒红”种植于花盆中，从植株开花第一天开始，每天早晨将开放花朵从花柄基部掐掉，以控制花朵结实；待花生植株进入盛花期，采用Co60-γ射线对整个花生植株进行辐照处理，辐照后，将花生植株放置于隔离环境中，让其自交，在花生植株成熟时收获荚果；(2)将收获的荚果清洗干净后使用体积分数75％的乙醇和质量分数0.1％的HgCl2分别消毒30s和10min，在无菌条件下解刨开荚果，取出花生种子接种到含有浓度为0.075mg/LIAA、0.01mg/LKn和质量分数5％蔗糖的MS固体培养基上，在25℃恒温光照培养间培养，直至发育成完整的花生植株。3.根据权利要求2所述的花生A和B基因组间染色体易位系的创制方法，其特征在于，所述的盛花期为开花量为总花量的50％。4.根据权利要求2所述的花生A和B基因组间染色体易位系的创制方法，其特征在于，在Co60-γ射线辐照花生植株的前一天，停止掐花。5.根据权利要求2-4任一项所述的花生A和B基因组间染色体易位系的创制方法，其特征在于，所述的辐照时间为上午9点，辐照剂量为1600rad，辐射速率为224rad/min。6.花生A和B基因组间染色体易位系的鉴定方法，其特征在于，所述的鉴定方法具体如下：(1)分别提取花生栽培种A、B基因组供体祖先种A.duranensis和A.全基因组DNA，并通过缺刻平移法对A.duranensis全基因组DNA进行荧光素标记，得到荧光素标记A.duranensisDNA探针；对A.全基因组DNA进行地高辛标记，得到地高辛标记的A.DNA探针；(2)取完整花生植株的组织培养苗根尖，进行有丝分裂中期染色体制片，然后利用A.duranensis和A.DNA探针对制片进行基因组荧光原位杂交，杂交完成后用DAPI染液对杂交后的载玻片染色4min，所述的DAPI染液为100μg/mLDPAI原液2.5μL+DAPI缓冲液500μL；染色后用DAPI缓冲液洗，吹干，滴6-7μLVECTAshieldmounting胶，盖上盖玻片，再通过荧光显微镜照相观察，并进行图片分析处理，统计发生A、B基因组间染色体易位的染色体、易位类型及易位染色体数量。7.根据权利要求6所述的花生A和B基因组间染色体易位系的鉴定方法，其特征在于，所述的缺刻平移法荧光标记的具体方法为：荧光素标记A.duranensisDNA探针：先在0.2mLeppendorf管中配置反应液，依次加入800ng/μLA.duranensisDNA3μL、10×DNAPolymeraseIBuffer2.5μL、1.3mMdNTPmix2.5μL、5U/μLDNaseI...

【专利技术属性】
技术研发人员：张新友，杜培，付留洋，李丽娜，韩锁义，刘华，秦利，张忠信，黄冰艳，董文召，汤丰收，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：河南,41