细菌鉴别及抗微生物剂敏感性试验制造技术

本发明专利技术提供了用于细菌鉴别和抗微生物剂敏感性试验的组合物、方法和试剂盒，用于治疗例如急性和慢性感染包括感染性疾病。本发明专利技术可特别用于导致乳腺炎的细菌的鉴别，及用于抗生素敏感性试验以便于鉴别适当的乳腺炎治疗。

Bacterial identification and antimicrobial susceptibility test

The invention provides compositions, methods and kits for bacterial identification and antimicrobial susceptibility tests, for the treatment of acute and chronic infections, including infectious diseases. The invention can be used specifically for the identification of bacteria that cause mastitis, and for antibiotic sensitivity tests to facilitate the identification of appropriate mastitis treatment.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细菌鉴别及抗微生物剂敏感性试验
本专利技术涉及细菌鉴别和抗微生物剂敏感性试验以治疗例如急性和慢性感染，包括感染性疾病。本专利技术特别用于鉴别导致乳腺炎的细菌，及涉及抗微生物剂敏感性试验以便于鉴别乳腺炎的适当治疗。专利技术背景近几十年来，在临床微生物学领域和感染性疾病的治疗与管理中具有重大进展。然而，危及生命及使生命衰竭的系统性和局部微生物感染仍是人和动物医疗健康方面的主要问题。此外，多药抗性生物体的出现增加了面对人和兽医医疗健康实践的挑战。不足或者不适当治疗微生物感染在很大程度上与导致许多源自医院和农场的感染的多药抗性菌株的产生相关。药物抗性、特别是抗生素抗性，通常在用于治疗感染的抗生素是以未有效根除感染物质的方式不当选择、处方或者是在不良的患者顺从性或农业活动时发生。进一步地，当无效或者非必需的抗生素被处方时，存在的任何感染细菌持续繁殖不缓解，通常导致危及生命的并发症，迫使需要昂贵的、激进性治疗，包括另外不必要的住院治疗。因此，潜在感染物质的精确及快速诊断对于改良患者照护、降低医疗照护成本及保持抗微生物剂效力是关键的。人或动物的感染可以由细菌及其它病原体导致。抗微生物剂包括抗生素用于试图杀死细菌群体或者抑制其生长，作为对抗感染的一种方式。致病菌的候选名单及对抗普通或重要细菌的抗微生物剂的第一和第二选择在例如“Pharmacology”，Rang&Dale1987,ChurchchillLivingstone中列出。用于人和兽医学中的典型的抗微生物剂包括抗生素。例如，苄基青霉素(或者青霉素G)是选择用于链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌和非产生青霉素酶葡萄球菌所致感染的药物。在产生β-内酰胺酶的葡萄球菌情况中，推荐使用氯唑西林。另一方面，苄基青霉素对于革兰氏阴性菌如大肠型细菌例如大肠杆菌通常几乎无效。广谱抗生素对于大肠型细菌通常是活性的。典型的广谱抗生素是氨苄西林、阿莫西林或者头孢菌素类如头孢噻肟或者头孢噻呋。常用的抗生素可以分类为氨基糖苷类、碳青霉烯类和单环内酰胺类、头孢菌素类、氯霉素类、林可酰胺类、大环内酯类、pleuromutilins、糖肽类、多肽类、青霉素类、多粘菌素类、喹诺酮类、磺胺类和四环素类等。其它类型的抗微生物剂包括例如乳链菌肽、银或者desinfectives等。感兴趣地，在世界范围内给予的大多数抗微生物剂不是给予人患者，而是给予用于食品生产的动物，包括牛、羊、猪、鸡和鱼。给予这些动物抗生素以治疗感染的及其它原因的动物的疾病。在食品生产中抗微生物剂的大量应用及抗生素通过来自农业场所的动物和人污水和流水非计划地广泛释放进入环境中具有公共卫生影响，最清晰可见的是与人体中食物传播性疾病相关的动物耐药细菌。此外，未知的性质和数量意义是潜在的抗性基因从动物源细菌至人病原体的传代。对感染的患者立即进行抗微生物剂治疗可以在成功治疗、长期残疾或者甚至死亡之间产生差别。不幸地，抗微生物剂的使用和滥用驱使耐药细菌无情地扩展，导致传统治疗方案的失效。事实上，世界卫生组织已经将抗生素抗性及多药抗性细菌或者“超级细菌”的演变鉴定为人群长期存活的显著威胁。抗微生物剂治疗典型地在感染或者疾病检测之后立即进行。治疗选择通常基于专业机构针对在人和动物中特定细菌感染(例如耳、喉、乳房或者子宫等)推荐的第一或第二选择的抗微生物剂。如果在治疗之前鉴别感染或者感染性疾病致病菌是有利的，由此可以选择给予适当的抗微生物剂用于治疗。然而，已知细菌类型不总是足以选择适当的抗微生物剂治疗。例如，在葡萄球菌的情况中，如果其是非产生青霉素酶的葡萄球菌，首选药物是苄基青霉素。然而，这种类型的信息在治疗之前通常未知或者必然在选择性和/或差别细菌富集检测之后出现。理想地，希望在治疗之前进行抗微生物剂敏感性试验，这不仅支持抗微生物剂治疗方案的选择，而且还支持适当剂量的选择。然而，由于必须在确定的实验室中进行试验，转回时间>若干天，因此这种方法受到一些限制。在此期间，感染保持未处理或者已经用(例如)广谱抗微生物剂处理以试图对抗感染。不足为奇地，这种实践导致过度使用抗生素及因此在许多细菌菌种产生药物抗性(例如抗生素抗性)。乳腺炎乳腺炎是哺乳动物乳腺的一种炎症性疾病。在兽医学中，最重要和最常遇到的乳腺炎是牛科动物的，特别是乳牛的。乳牛群典型培育用于生产牛乳。在24小时期间挤奶直至2-3次的惯例使得牛的乳腺倾向于感染。此外，在自动挤奶的机械装置的情况中，装置在牛之间传递使用，意味着感染易于从一个动物传播至另一动物。乳腺具有抗细菌病原体的许多天然防御机制。然而，由于不良的动物饲养或者通过在泌乳周期中某些时候的生理学变化，这些防御机制可以被高水平的细菌攻击而胜过。例如，干奶和产犊时期与相对高的乳腺炎发生率相关。乳腺炎可以由许多不同的革兰氏阳性和阴性细菌菌种导致。最通常涉及牛乳腺炎的那些细菌菌种分为两类。第一类包括宿主病原体，如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)。这些细菌生活于动物乳房皮肤上或者乳房本身中，且是畜群中其它牛的感染源。第二类包括环境病原体，如乳房链球菌(Streptococcusuberis)和大肠杆菌(Escherichiacoli)。这些病原体在乳牛的直接环境中发现，且因此存在经常感染的危险。由上述鉴定的细菌导致的乳腺炎可以表现为临床或者亚临床疾病。临床乳腺炎是对于感染的一种炎症反应，导致可见的异常乳(例如颜色、纤维蛋白凝块)。随着炎症程度增加，乳房的改变(肿胀、热、痛、红)也可以变得明显。仅包括局部迹象的临床病例称作轻度或中度病例。如果炎症反应包括全身性反应(发热、厌食、休克)，该病例称作重度病例。如果发作非常迅速，如重度临床病例经常发生的，称作急性重度乳腺炎。更严重受影响的牛趋于在受影响部位的更多浆液性分泌物。也就是说，临床乳腺炎较轻微的表现是最典型的。亚临床乳腺炎是存在感染而无明显的局部炎症或者全身性反应的迹象。尽管可以出现短时发生异常乳或乳房炎症，这些感染大部分是无症状的，如果感染持续至少2个月则称作慢性感染。一旦确定感染，许多这些感染持续牛的整个泌乳期或生命期。检测最佳是通过检验乳的体细胞计数(SCC)(主要是中性粒细胞)而进行。尽管可以获得各种治疗选项，但是乳腺炎仍然是乳品业中导致经济损失的主要因素。目前，治疗牛乳腺炎(乳房炎症)以及治疗子宫炎(子宫炎症)的主要方法是抗生素治疗。作为抗微生物剂第一和第二选择的推荐通常由政府机构或者疾病专业机构提出。牛乳腺炎可以由革兰氏阳性和阴性菌导致。最常见和重要的细菌是乳房链球菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和大肠杆菌。乳腺炎牛乳与健康牛乳相比稠度改变。乳腺炎牛乳可有凝结块，质地可以是水样及稀或稠。乳腺炎牛乳的颜色可以介于黄色与褐色之间。此外，通常乳腺炎乳具有体细胞高计数，可以直至数百万个/毫升，这与健康牛乳不同。市场上有许多针对牛乳腺炎的细菌检测试剂盒，可用于鉴别导致农场感染的细菌的类型。例如，“TheOvernighter”(WO2007/032691)描述了微生物学生长装置和容器。所述生长基质基于琼脂培养基(凝胶类型)，细菌鉴别通过比色改变本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对得自人或非人动物的生物样品进行抗微生物剂敏感性试验的方法，其中所述人或非人动物可能被一或多种导致感染的细菌感染或者处于被一或多种导致感染的细菌感染的危险中，所述方法包括：(i)提供包含得自人或非人动物的生物样品及敏感性培养基的反应混合物，所述敏感性培养基包含生长培养基、抗微生物剂、基于颜色的pH指示剂及稳定剂；及(ii)通过观测当所述样品与所述敏感性培养基混合时的颜色变化确定所述样品中所述一或多种细菌对于所述抗微生物剂的敏感性，其中，所述反应混合物中存在的所述pH指示剂的量，如果不是存在所述稳定剂，足以抑制所述一或多种导致感染的细菌的生长。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.27 AU 20159006951.一种对得自人或非人动物的生物样品进行抗微生物剂敏感性试验的方法，其中所述人或非人动物可能被一或多种导致感染的细菌感染或者处于被一或多种导致感染的细菌感染的危险中，所述方法包括：(i)提供包含得自人或非人动物的生物样品及敏感性培养基的反应混合物，所述敏感性培养基包含生长培养基、抗微生物剂、基于颜色的pH指示剂及稳定剂；及(ii)通过观测当所述样品与所述敏感性培养基混合时的颜色变化确定所述样品中所述一或多种细菌对于所述抗微生物剂的敏感性，其中，所述反应混合物中存在的所述pH指示剂的量，如果不是存在所述稳定剂，足以抑制所述一或多种导致感染的细菌的生长。2.权利要求1的方法，其中当所述细菌是革兰氏阳性细菌时，所述稳定剂包含乳源蛋白或者乳源蛋白提取物。3.权利要求2的方法，其中所述乳源蛋白或者乳源蛋白提取物包括选自如下的一或多种：α-酪蛋白、β-酪蛋白(包括A1、A2、A3、B、C、D、E和F变体的一或多种)、酪蛋白钠(例如包括α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白)、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、乳清蛋白、乳白蛋白、乳铁蛋白、乳或乳粉，及其组合。4.权利要求1-3任一项的方法，其中当所述细菌是革兰氏阴性菌时，所述稳定剂包括碳水化合物。5.权利要求4的方法，其中所述碳水化合物选自葡萄糖、甘露醇、乳糖、海藻糖和蔗糖。6.权利要求1的方法，其中所述方法包括鉴别所述样品中的革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌，及所述稳定剂是乳。7.权利要求1-6任一项的方法，其中所述生物样品选自乳、子宫液体样品、全血样品、血浆、血清、卵巢滤泡液样品、精液样品、脑脊液、唾液、痰液、尿液、胸腔积液、间隙液、滑液、淋巴液和泪液。8.权利要求1-7任一项的方法，其中当所述生物样品是乳时，不需要所述反应混合物包含稳定剂。9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述基于颜色的pH指示剂选自酚红、溴甲酚紫和溴百里酚蓝。10.权利要求1-9任一项的方法，其中所述基于颜色的pH指示剂是酚红。11.权利要求10的方法，其中酚红的存在量是所述反应混合物的0.0035％-0.30％。12.权利要求1-11任一项的方法，其中所述敏感性培养基包含选自胰蛋白酶大豆肉汤、MuellerHinton肉汤的一或多种生长培养基。13.权利要求1-12任一项的方法，其中所述感染是乳腺炎或者子宫炎。14.权利要求10的方法，其中所述乳腺炎或者子宫炎是牛乳腺炎或者牛子宫炎，及其中所述导致牛乳腺炎或者牛子宫炎的细菌选自如下一或多种属：链球菌属、葡萄球菌属和革兰氏阴性菌。15.鉴别人或非人动物样品中D群链球菌的存在的方法，其中所述人或非人动物可能被D群链球菌感染或者处于被D群链球菌感染的危险中，所述方法包括：(i)提供包含得自人或非人动物的生物样品及鉴别培养基的反应混合物，所述鉴别培养基包含七叶苷、柠檬酸铁和稳定剂；及(ii)鉴别D群链球菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：O·博克，
申请(专利权)人：马斯塔普莱克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：新西兰,NZ