血清型交叉反应性登革热中和抗体和其用途制造技术

本发明专利技术公开了结合登革热病毒表位的分离的抗体、或其抗原结合片段、以及含有它们的试剂盒、含有它们的组合物、和包含它们的被动疫苗，在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能够比结合登革热病毒表面糖蛋白更好地结合全登革热病毒颗粒。还公开了使用所述抗体或其抗原结合片段的方法、编码它们的核酸、表达所述核酸的载体、产生它们的宿主、以及制造它们的方法。

Serotype cross reacting dengue fever, antibody and its use

The present invention discloses antibodies, or antigen binding fragments thereof, with the separation of dengue virus epitope and kits containing them, compositions containing them, and a passive vaccine containing them, in one embodiment, fragment ratio combined with dengue virus surface glycoprotein can better combine the combination of dengue virus particles antibody or antigen. Methods for the use of the antibodies or their antigen binding fragments, nucleic acids encoding them, vectors for expressing the nucleic acids, host producing them, and methods of making them are also disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】血清型交叉反应性登革热中和抗体和其用途对相关申请的交叉引用本申请要求2015年3月17日提交的新加坡专利申请号10201502068V的优先权益，该新加坡专利申请的内容在此以引用的方式整体并入本文用于所有目的。
本专利技术涉及一种用于医学目的的制剂或制剂的特定治疗活性。具体来说，本专利技术涉及结合登革热病毒(或DENV)的抗体和其它药剂、以及使用所述抗体或其它药剂治疗疾病的方法。
技术介绍
登革热是世界上最常见的节肢动物传播的病毒性疾病。引起登革热的病毒(即DENV)可以被分成四种不同的感染性血清型，如DENV-1、DENV-2、DENV-3、以及DENV-4。登革热感染的症状包括发热、肌肉疼痛、头痛、低血小板数和低白细胞数、凝血病、出血以及血管渗漏，这可能导致登革热休克综合征。当人在先前的登革热感染之后暴露于登革热病毒时，抗病毒抗体可以增强病毒向宿主细胞中的摄取并且所述患者处于产生登革热的严重形式的更高风险之中。然而，登革热的严重形式也可能在首次感染期间发生。虽然是最常见的节肢动物传播的病毒性疾病，但是迄今为止，仍没有用于登革热的药物。关于登革热的方法主要是针对预防感染和/或治疗以缓解症状。因此，需要提供能够中和和/或结合至少一种登革热血清型的药剂。
技术实现思路
在一个方面，提供了一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)如SEQIDNO:3所示的CDRH1、或源于其的与SEQIDNO:3具有至少70％的序列同一性的CDRH1序列；(b)如SEQIDNO:4所示的CDRH2、或源于其的与SEQIDNO:4具有至少70％的序列同一性的CDRH2序列；(c)如SEQIDNO:5所示的CDRH3、或源于其的与SEQIDNO:5具有至少70％的序列同一性的CDRH3序列；或一种抗体、或其抗原结合片段。在另一个方面，提供了一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)如SEQIDNO:6所示的CDRL1、或源于其的与SEQIDNO:6具有至少70％的序列同一性的CDRL1序列；(b)如SEQIDNO:7所示的CDRL2、或源于其的与SEQIDNO:7具有至少70％的序列同一性的CDRL2序列；(c)如SEQIDNO:8所示的CDRL3、或源于其的与SEQIDNO:8具有至少70％的序列同一性的CDRL3序列；或一种抗体、或其抗原结合片段。在又另一个方面，提供了一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)如SEQIDNO:3所示的CDRH1、或与其有1个或2个氨基酸不同的CDRH1序列；(b)如SEQIDNO:4所示的CDRH2、或与其有1个或2个氨基酸不同的CDRH2序列；(c)如SEQIDNO:5所示的CDRH3、或与其有1个或2个氨基酸不同的CDRH3序列；和/或至少一个轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)如SEQIDNO:6所示的CDRL1、或与其有1个或2个氨基酸不同的CDRL1序列；(b)如SEQIDNO:7所示的CDRL2、或与其有1个或2个氨基酸不同的CDRL2序列；(c)如SEQIDNO:8所示的CDRL3、或与其有1个或2个氨基酸不同的CDRL3序列；或一种抗体、或其抗原结合片段，其识别全登革热病毒颗粒。在又另一个方面，提供了一种组合物，所述组合物包含如本文所述的分离的抗体、或其抗原结合片段。在又另一个方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括如本文所述的分离的抗体。在又另一个方面，存在抗至少一种登革热病毒血清型的被动疫苗，所述被动疫苗包含如本文所述的分离的抗体、或如本文所述的组合物、或如本文所述的试剂盒。在又另一个方面，提供了一种治疗受试者的登革热病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所述的分离的抗体、或其抗原结合片段、或如本文所述的组合物、或如本文所述的疫苗。在又另一个方面，提供了如本文所述的抗体、或其抗原结合片段、或如本文所述的组合物、或如本文所述的试剂盒、或如本文所述的疫苗在制造用于治疗受试者的登革热病毒感染的药物中的用途。在又另一个方面，提供了一种用于检测样品中的至少一种登革热病毒血清型的方法。在一个实施例中，所述方法包括：(a)将所述样品与如本文所述的分离的抗体、或如本文所述的试剂盒中的至少一种一起孵育；以及(b)检测所述抗体-登革热病毒复合物，其中所述复合物的存在或不存在表明所述样品中登革热病毒的存在或不存在。在又另一个方面，提供了一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子选自由以下各项组成的组：(a)编码如本文所述的分离的抗体或其抗体片段的核酸序列；(b)如SEQIDNO:1和2所示的核酸序列；(c)与(a)或(b)中的序列中的任一个互补的核酸；以及(d)能够在严格条件下与(a)、(b)、或(c)杂交的核酸序列。在又另一个方面，提供了一种载体，所述载体包含如本文所述的核酸序列。在又另一个方面，提供了一种用如本文所述的载体转化的宿主。在又另一个方面，提供了一种制备如本文所述的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括从如本文所述的宿主获得所述抗体的步骤。附图说明在结合非限制性实施例和附图考虑时，通过参考详细说明将更好地理解本专利技术，其中：图1示出了针对UV灭活的DENV-1、DENV-2、DENV-3以及DENV-4进行mAb初始筛选的条形图。3C-H5L1抗体克隆(用箭头指出)显示与灭活的登革热病毒颗粒的低结合，且不论血清型(与x轴相邻的底部条柱)。3C-H5L1抗体的表达水平是高的(灰色条柱-顶部条柱)，如在以ng/ml为单位的IgG1的总浓度(右侧y轴)中所看到。因此，图1示出了3C-H5L1抗体的初始表征。图2示出了显示如通过ELISA所测定的各种抗体克隆在活病毒颗粒上的结合能力的条形图。不同的病毒颗粒按降序示出，其中2641Y08(最上面的条柱)是DENV-4病毒颗粒，4141(从顶部起第二个条柱)是DENV-3病毒颗粒，TSV01(从顶部起第三个条柱)是DENV-2病毒颗粒，并且167(底部条柱)是DENV-1病毒颗粒。3CH5L1抗体的结合特征用箭头突出显示。因此，图2示出了当病毒没有被灭活时，3CH5L1与登革热病毒的所有四种血清型结合。图3示出了显示如通过ELISA所测定的各种抗体克隆对重组E蛋白的结合能力的条形图。如由指向下的箭头所突出显示，3CH5L1与所有4种DENV血清型的重组E蛋白的结合均是非常弱的。因此，图3(以及图1和图2)示出了3CH5L1抗体的表位在全病毒颗粒上更显著地显示，特别是在存活时。图4示出了显示用BHK-21细胞(即成纤维细胞)对3CH5L1抗体进行的空斑减少中和测定/测试(PRNT)的结果的曲线图。所使用的病毒株是DENV-1167、DENV-2TSV01、DENV-3VN32/96以及DENV-42641Y08。图4示出了针对所有四种血清型的强效的体外中和能力，其中DENV2是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)SEQ ID NO:3所示的CDRH1、或源于其的与SEQ ID NO:3具有至少70％的序列同一性的CDRH1序列；(b)SEQ ID NO:4所示的CDRH2、或源于其的与SEQ ID NO:4具有至少70％的序列同一性的CDRH2序列；(c)SEQ ID NO:5所示的CDRH3、或源于其的与SEQ ID NO:5具有至少70％的序列同一性的CDRH3序列；或抗体、或其抗原结合片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.17 SG 10201502068V1.一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)SEQIDNO:3所示的CDRH1、或源于其的与SEQIDNO:3具有至少70％的序列同一性的CDRH1序列；(b)SEQIDNO:4所示的CDRH2、或源于其的与SEQIDNO:4具有至少70％的序列同一性的CDRH2序列；(c)SEQIDNO:5所示的CDRH3、或源于其的与SEQIDNO:5具有至少70％的序列同一性的CDRH3序列；或抗体、或其抗原结合片段。2.一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)SEQIDNO:6所示的CDRL1、或源于其的与SEQIDNO:6具有至少70％的序列同一性的CDRL1序列；(b)SEQIDNO:7所示的CDRL2、或源于其的与SEQIDNO:7具有至少70％的序列同一性的CDRL2序列；(c)SEQIDNO:8所示的CDRL3、或源于其的与SEQIDNO:8具有至少70％的序列同一性的CDRL3序列；或抗体、或其抗原结合片段。3.如权利要求1或2所述的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)SEQIDNO:3所示的CDRH1、或源于其的与SEQIDNO:3具有至少70％的序列同一性的CDRH1序列；(b)SEQIDNO:4所示的CDRH2、或源于其的与SEQIDNO:4具有至少70％的序列同一性的CDRH2序列；(c)SEQIDNO:5所示的CDRH3、或源于其的与SEQIDNO:5具有至少70％的序列同一性的CDRH3序列；以及至少一个轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(d)SEQIDNO:6所示的CDRL1、或源于其的与SEQIDNO:6具有至少70％的序列同一性的CDRL1序列；(e)SEQIDNO:7所示的CDRL2、或源于其的与SEQIDNO:7具有至少70％的序列同一性的CDRL2序列；(f)SEQIDNO:8所示的CDRL3、或源于其的与SEQIDNO:8具有至少70％的序列同一性的CDRL3序列；或抗体、或其抗原结合片段，其识别全登革热病毒颗粒。4.一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含至少：一个重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)SEQIDNO:3所示的CDRH1、或源于其的与其有1个或2个氨基酸不同的CDRH1序列；(b)SEQIDNO:4所示的CDRH2、或源于其的与其有1个或2个氨基酸不同的CDRH2序列；(c)SEQIDNO:5所示的CDRH3、或源于其的与其有1个或2个氨基酸不同的CDRH3序列；和/或至少一个轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的至少一个CDR：(a)SEQIDNO:6所示的CDRL1、或源于其的与其有1个或2个氨基酸不同的CDRL1序列；(b)SEQIDNO:7所示的CDRL2、或源于其的与其有1个或2个氨基酸不同的CDRL2序列；(c)SEQIDNO:8所示的CDRL3、或源于其的与其有1个或2个氨基酸不同的CDRL3序列；或抗体、或其抗原结合片段，其识别全登革热病毒颗粒。5.一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的所有CDR：(a)SEQIDNO:3所示的CDRH1；(b)SEQIDNO:4所示的CDRH2；以及(c)SEQIDNO:5所示的CDRH3；所述分离的抗体、或其抗原结合片段识别全登革热病毒颗粒。6.一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的所有CDR：(a)SEQIDNO:6所示的CDRL1；(b)SEQIDNO:7所示的CDRL2；(c)SEQIDNO:8所示的CDRL3；所述分离的抗体、或其抗原结合片段识别全登革热病毒颗粒。7.一种分离的抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的所有CDR：(a)SEQIDNO:3所示的CDRH1；(b)SEQIDNO:4所示的CDRH2；(c)SEQIDNO:5所示的CDRH3；以及轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含选自由以下各项组成的组的所有CDR：(a)SEQIDNO:6所示的CDRL1；(b)SEQIDNO:7所示的CDRL2；(c)SEQIDNO:8所示的CDRL3；所述分离的抗体、或其抗原结合片段识别全登革热病毒颗粒。8.一种抗体、或其抗原结合片段...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪正一，K·芬克，P·玛卡里，R·泽斯特，许美慧，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，新加坡国立大学，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG