一种巨大戟醇的快速鉴别方法技术

本发明专利技术属于天然药物化学技术领域，具体涉及一种巨大戟醇快速鉴别方法；依次包括如下步骤：1）将续随子醇提液回收溶剂后的上层部分进行碱水解、中和、萃取，挥干溶剂后加甲醇溶解；2）取上清液照薄层色谱法实验，以石油醚（60℃~90℃）‑乙酸乙酯为展开剂，展开；3）取出薄层板，吹干，喷以显色剂显色，加热至条带清晰；4）将薄层板置于365nm下进行观察，可见巨大戟醇为浅蓝色斑点，其他物质为橙黄色、青色、粉红色斑点。本发明专利技术具有高效、简便、准确、可靠的优点，填补了巨大戟醇特异性快速检测鉴别方法的空白，可用于巨大戟醇的快速检测。

A rapid identification method for the alcohols of the giant Halberd

The invention belongs to the field of natural medicine chemistry technology, in particular to a rapid identification of ingenol method; the method comprises the following steps: 1) the lathyrol provided upper part of liquid solvent recovery after alkaline hydrolysis, neutralization, extraction, volatile solvent and dissolved in methanol; 2) supernatant thin-layer chromatography experiment with petroleum ether (60 DEG ~90 DEG) ethyl acetate as the agent, 3); remove the thin layer plate, drying, spray with chromogenic reagent, heating to clear bands; 4) the thin plate is arranged on the 365nm under observation, visible ingenol shallow blue spots, other substances orange yellow, blue, pink. The invention has the advantages of high efficiency, simplicity, accuracy and reliability, and fills the blank of the rapid detection and identification method of huge halberol, and can be used for rapid detection of large halberol.

【技术实现步骤摘要】
一种巨大戟醇的快速鉴别方法
本专利技术属于天然药物化学鉴别
，具体涉及巨大戟醇的高效薄层色谱快速鉴别方法。
技术介绍
1968年巨大戟醇（Ingenol）首次从大戟科植物E.ingens中分离得到，具有独特高张力5/7/7/3四环母核，通过与蛋白激酶C相互作用，产生抗癌、抗艾滋病毒等药理活性。2012年，由LEO制药公司研发的巨大戟醇甲基丁烯酸酯凝胶（Ingenolmebutate，药品名Picato）获美国FDA批准上，成为首个用于治疗日光性角化病（actinickeratosis）的凝胶制剂。此外巨大戟醇甲基丁烯酸酯还可用于基底细胞癌治疗，正在进行Ⅱ期临床试验。生产上巨大戟醇甲基丁烯酸酯是以巨大戟醇为原料半合成得到，得率为62%。然而，巨大戟醇仅在续随子（Euphorbialathryis）等少数大戟属植物中分布，从续随子种子中分离的得率为275mg，比直接从植物中分离青蒿素的得率（5000mg）低近20倍。2013年LEO制药公司联合美国斯克里普斯研究所（TheScrippsResearchInstitute）PhilS.Baran研究团队开发了巨大戟醇14步全合成方法。因此，建立一种快速鉴别巨大戟醇的方法并能够应用于巨大戟醇分离、纯化以及合成等工业化生产中，有利于巨大戟醇的快速识别和检测。目前巨大戟醇的检测主要采用高效液相色谱法结合蒸发光散射检测器对巨大戟醇进行定性和定量分析。由于续随子中成分繁多且结构复杂，不同的化合物可能具有相同或相近的保留特征，易造成定性结果错误。此外，液相色谱分析时间较长，有机流动相消耗量大，易造成检测费用高，不适合巨大戟醇快速检测和鉴别。因此开发高效、简便、准确、可靠的巨大戟醇快速鉴别方法具有重要意义。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的在于提供一种巨大戟醇的高效薄层色谱的鉴别方法。专利技术是通过如下技术方案实现的：一种巨大戟醇快速鉴别方法，所述测定方法包括如下步骤：1）取巨大戟醇标准品于容量瓶中，加入溶剂使其溶解、定容。作为对照品溶液。2）取续随子种子粉碎，乙醇回流提取，回收溶剂并静置分层，取少量上层物质用石油醚（60℃~90℃）溶解，乙腈萃取2次，合并并回收乙腈，加入适当甲醇溶解并调pH值至碱性，室温搅拌后，用酸调pH值至中性，回收溶剂，然后用乙酸乙酯进行萃取，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，加入溶剂使其溶解均匀，作为供试品溶液。3）吸取上述对照品和供试品溶液，点于同一GF254硅胶板上，以石油醚（60℃~90℃）-乙酸乙酯为展开剂，展开、取出、吹干、喷显色剂，加热至斑点清晰，置于365nm下观察，对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇可见亮浅蓝色斑点，其他物质显橙黄色、青色和粉红色斑点。其中，所述步骤1）中的溶剂为甲醇。较佳地，所述的展开剂为石油醚（60℃~90℃）、乙酸乙酯的混合物，他们之间的体积比为石油醚（60℃~90℃）:乙酸乙酯为3:7。较佳地，所述的显色剂为5%香草醛-浓硫酸。较佳地，调pH值至碱性采用的试剂为3%氢氧化钠的甲醇溶液。较佳地，调pH值至中性采用的试剂为1N盐酸。本专利技术的高效薄层色谱法快速鉴别巨大戟醇方法，其具有高效、简便、准确、可靠的优点，填补了巨大戟醇快速鉴别方法的空白。四、附图说明附图1本专利技术方法检测巨大戟醇的HPTLC色谱图；其中1为巨大戟醇标准品，2-6为供试品；附图2为巨大戟醇单体化合物的结构式，附图2为摘要附图；具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理解专利技术。若无特殊说明，所用试验方法为常规试验方法；所用试剂材料可通过商业途径获得。按照本专利技术所实施的优选实施例的分析检测方法如下实施例1取巨大戟醇对照品1mg于容量瓶中，加入1mL甲醇使其完全溶解，作为对照品溶液。另取续随子醇提液回收溶剂上层，调pH值至12-14，室温水解0.5h，按[0009]配成供试品溶液；照薄层色谱法实验吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5uL，分别点于同一个GF254硅胶板上，展开（以石油醚和乙酸乙酯混合物为展开剂，所述体积比石油醚:乙酸乙酯=3:7），取出吹干，喷以5%香草醛-浓硫酸溶液（香草醛5g，10%硫酸乙醇溶液100mL）显色，加热至斑点清晰，并置于365nm下进行观察；对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇显浅蓝色，其他斑点显橙黄色、青色或粉红色，具体请见图1中的1号点和2号点。实施例2取续随子醇提液回收溶剂上层调pH值至12-14，室温水解1h，按照[0009]配成供试品溶液；照薄层色谱法实验吸取上述供试品溶液各5uL，和对照品溶液点于同一个GF254硅胶板上，展开（以石油醚和乙酸乙酯混合物为展开剂，所述体积比石油醚:乙酸乙酯=3:7），取出吹干，喷以5%香草醛-浓硫酸溶液（香草醛5g，10%硫酸乙醇溶液100mL）显色，加热至斑点清晰，并置于365nm下进行观察；对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇显浅蓝色，其他斑点显橙黄色、青色或粉红色，具体请见图1中的3号点。实施例3取续随子醇提液回收溶剂上层调pH值至12-14，室温水解2h，按照[0009]配成供试品溶液；照薄层色谱法实验吸取上述供试品溶液各5uL，和对照品溶液点于同一个GF254硅胶板上，展开（以石油醚和乙酸乙酯混合物为展开剂，所述体积比石油醚:乙酸乙酯=3:7），取出吹干，喷以5%香草醛-浓硫酸溶液（香草醛5g，10%硫酸乙醇溶液100mL）显色，加热至斑点清晰，并置于365nm下进行观察；对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇显浅蓝色，其他斑点显橙黄色、青色或粉红色，具体请见图1中的4号点。实施例4取续随子醇提液回收溶剂上层调pH值至12-14，室温水解3h，按照[0009]配成供试品溶液；照薄层色谱法实验吸取上述供试品溶液各5uL，和对照品溶液点于同一个GF254硅胶板上，展开（以石油醚和乙酸乙酯混合物为展开剂，所述体积比石油醚:乙酸乙酯=3:7），取出吹干，喷以5%香草醛-浓硫酸溶液（香草醛5g，10%硫酸乙醇溶液100mL）显色，加热至斑点清晰，并置于365nm下进行观察；对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇显浅蓝色，其他斑点显橙黄色、青色或粉红色，具体见图1中的5号点。实施例5取续随子醇提液回收溶剂上层调pH值至12-14，室温水解4h，按照[0009]配成供试品溶液；照薄层色谱法实验吸取上述供试品溶液各5uL，和对照品溶液点于同一个GF254硅胶板上，展开（以石油醚和乙酸乙酯混合物为展开剂，所述体积比石油醚:乙酸乙酯=3:7），取出吹干，喷以5%香草醛-浓硫酸溶液（香草醛5g，10%硫酸乙醇溶液）显色，加热至斑点清晰，并置于365nm下进行观察；对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇显浅蓝色，其他斑点显橙黄色、青色或粉红色，具体请见图1中的6号点。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种巨大戟醇的快速鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法包括以下步骤：1）取巨大戟醇标准品于容量瓶中，加入溶剂作为对照品溶液，2）另取续随子醇提液回收溶剂后的上层物质，经碱水解、中和、萃取处理，加入溶剂使其溶解均匀，作为供试品溶液，3）吸取上述对照品和供试品溶液，点于同一GF254硅胶板上，以石油醚（60℃~90℃）‑乙酸乙酯为展开剂，展开、取出、吹干、喷显色剂显色，加热至条带清晰，放置于365nm下观察，对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇为浅蓝色斑点，其他物质显橙黄色、青色和粉红色斑点。

【技术特征摘要】
1.一种巨大戟醇的快速鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法包括以下步骤：1）取巨大戟醇标准品于容量瓶中，加入溶剂作为对照品溶液，2）另取续随子醇提液回收溶剂后的上层物质，经碱水解、中和、萃取处理，加入溶剂使其溶解均匀，作为供试品溶液，3）吸取上述对照品和供试品溶液，点于同一GF254硅胶板上，以石油醚（60℃~90℃）-乙酸乙酯为展开剂，展开、取出、吹干、喷显色剂显色，加热至条带清晰，放置于365nm下观察，对照品及供试品薄层色谱中，巨大戟醇为浅蓝色斑点，其他物质显橙黄色、青色和粉红色斑点。2.根据权利要求1所述的巨大戟醇快速鉴别方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜杉，陈雨，赵兴增，刘飞，吕慧，王鸣，冯煦，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32