一种佐剂组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及兽用生物制品技术领域的一种佐剂组合物及其制备方法和应用。所述佐剂组合物，包含丙烯酸系聚合物‑ε‑聚赖氨酸纳米颗粒；具体地，100重量份的佐剂组合物中，包含0.001‑5重量份的丙烯酸系聚合物‑ε‑聚赖氨酸纳米颗粒。该佐剂组合物中所包含的丙烯酸系聚合物‑ε‑聚赖氨酸纳米颗粒是由简单的静电作用制备而成，不具有对机体有害的蛋白质之间的交联，因此具有很高的安全性和有效性，适合作为佐剂使用，同时克服了聚丙烯酸作为佐剂使用存在的问题。另外，由该佐剂组合物和抗原形成的疫苗组合物具有很好的稳定性以供长期贮存，且可安全有效地施用于很多种受试者中。

An adjuvant composition and its preparation methods and Applications

The invention relates to a adjuvant composition in the technical field of animal use and the preparation method and application of the adjuvant composition. The adjuvant composition comprising acrylic polymer epsilon polylysine nanoparticles; specifically, the adjuvant compositions of 100 parts by weight of acrylic polymer epsilon contains 0.001 5 parts by weight of poly lysine nanoparticles. Acrylic polymer epsilon contains the adjuvant composition of poly lysine nanoparticles by electrostatic interaction was simply prepared, does not have the cross-linking between harmful proteins, so it has safety and high effectiveness, suitable for use as an adjuvant, and overcomes the defect of polyacrylic acid as an adjuvant the use of the existing problems. In addition, the vaccine composition made from the adjuvant composition and antigen has good stability for long-term storage, and is safe and effective for many kinds of subjects.

【技术实现步骤摘要】
一种佐剂组合物及其制备方法和应用
本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种佐剂组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
佐剂是用于产生抗原性增加的疫苗或用于通过增加对抗原的非特异性免疫反应从而达到治疗和预防的材料。在抗原水平低时，佐剂用来在较长时间内维持针对抗原的强烈且快速的免疫反应，这些佐剂可以用于疫苗的制备。佐剂能够使用特殊抗原或者能够改变抗原的水平，从而调节针对抗原的免疫反应或者控制针对抗原的抗体类型和亚类。另外，佐剂还可以用以增强免疫反应，特别是对免疫不成熟或衰老的人，提高粘膜免疫性的诱导。大部分佐剂是通过反复实验在天然材料中发现的。在1925年世界范围内对佐剂的第一次报道中，Ramon(法国)报道，食品中使用的木薯淀粉(Casaba)与白喉和破伤风类毒素混合，将有效地增加抗原特异性抗体的产生。接着发现了铝佐剂的免疫增强作用，并开发了作为免疫调节剂的包含失活的灭活分枝杆菌的有效乳液型佐剂。聚丙烯酸作为佐剂在兽用疫苗中使用时，聚丙烯酸本身在生理环境下带负电荷，难以吸附带负电荷的抗原。另外聚丙烯酸在氯化钠溶液中发生沉淀，也影响了其作为佐剂的使用。现有技术普遍采用的技术方案是：在聚丙烯酸中添加其他佐剂和免疫增强剂形成复合佐剂使用。现有技术缺少既能增强聚丙烯酸的佐剂免疫效果和适用抗原范围，又能提高聚丙烯酸溶液的稳定性，制备简单且不产生副作用的佐剂组合物。ε-聚赖氨酸，由人体必需氨基酸L-赖氨酸的ε-氨基与另一L-赖氨酸的α-羧基形成ε-酰胺键连接而成的。现有技术没有其有佐剂作用的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种佐剂组合物，该佐剂组合物具有很高的安全性和有效性，由其和抗原形成的疫苗组合物具有很好的稳定性以供长期贮存，且可安全有效地施用于很多种受试者中。为此，本专利技术第一方面提供了一种佐剂组合物，其包含丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。在本专利技术的一些实施方式中，100重量份的佐剂组合物中，包含0.001-5重量(干重)份的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。优选地，100重量份的佐剂组合物中，包含0.01-3重量(干重)份的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。进一步优选地，100重量份的佐剂组合物中，包含0.45-1重量(干重)份的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。更进一步优选地，100重量份的佐剂组合物中，包含0.55-1重量(干重)份的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。最优选地，100重量份的佐剂组合物中，包含0.6-0.75重量(干重)份的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。当100重量份的佐剂组合物中包含的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒小于0.001重量份时，该佐剂组合物将不具有产生抗体的能力；当包含的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒大于5重量份时，该佐剂组合物的粘度将大大增加。本专利技术中，佐剂组合物中丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒的重量份数，均为佐剂组合物中丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒的干重。所述佐剂组合物的纳米颗粒可以分散在水或含水的电解质溶液中。本专利技术中，所述丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒由丙烯酸系聚合物羧基反应基团的负电荷与ε-聚赖氨酸氨基反应基团质子化的正电荷的之间的静电相互作用，形成离子键制备而成。在本专利技术的一些具体实施方式中，所述丙烯酸系聚合物与ε-聚赖氨酸的质量比为(1-10):1。在本专利技术的另一些具体实施方式中，所述丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒的粒径为200nm-1500nm。在本专利技术的一些实施方式中，所述丙烯酸系聚合物选自聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚(丙烯酸-co-甲基丙烯酸)和聚(丙烯酸-co-丙烯酰胺)中的一种或多种。但是，本专利技术所述的丙烯酸系聚合物不限于此，还可以为聚甲基丙烯酸酯(优选为聚丙烯酸的烷基酯)、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚丙烯腈、聚(丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸丁酯)，这些化合物均为阴离子化合物，化合物中的羧基只是部分被取代，羧基依然存在。丙烯酸系聚合物在水中可膨胀至多达其原始体积的1000倍及其原始直径的10倍，以在暴露于pH环境高于羧酸化物基团的pKa时形成凝胶。在较羧酸化物基团的pKa更高的pH下，该羧酸化物基团离子化，导致负电荷基团间的排斥，使聚合物的体积膨胀增加。在本专利技术的一些优选实施方式中，所述丙烯酸系聚合物为聚丙烯酸，其平均当量为76，由平均直径约0.2-6.0μm的初始聚合物颗粒制得。进一步优选地，所述聚丙烯酸为市售的卡波姆(商品名)，它在所属
中通常还指与聚烯丙基蔗糖交联的丙烯酸的水溶性聚合物。在本专利技术的一些具体实施例中，所述的聚丙烯酸为市售的卡波姆934P(商品名)。本专利技术中，所述ε-聚赖氨酸的相对分子质量为1000kDa-15000kDa。若ε-聚赖氨酸的相对分子质量小于1000kDa，其免疫增强作用将较低；若ε-聚赖氨酸的相对分子质量大于15,000kDa，由其形成的佐剂组合物的粘度将大大增加。本专利技术第二方面提供了一种如本专利技术第一方面所述佐剂组合物的制备方法，其包括：将丙烯酸系聚合物溶液与ε-聚赖氨酸溶液在搅拌条件下混合，获得佐剂组合物。在本专利技术的一些实施方式中，所述丙烯酸系聚合物溶液与ε-聚赖氨酸溶液的pH值均为6.9-7.5；优选地，所述丙烯酸系聚合物溶液与ε-聚赖氨酸溶液的pH值为7.2。溶液的pH值过低会造成析出的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒的粒径过大；pH值过高会造成析出的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒较少。本专利技术中，溶解丙烯酸系聚合物及ε-聚赖氨酸的溶液优选为NaCl溶液；具体地，所述NaCl溶液的浓度为0.85％。在本专利技术的另一些实施方式中，所述丙烯酸系聚合物溶液与ε-聚赖氨酸溶液的质量比为(1-10):1。本专利技术第三方面提供了一种疫苗组合物，其包括本专利技术第一方面所述的佐剂组合物或本专利技术第二方面所述方法制备的佐剂组合物和免疫有效量的抗原。用语“免疫有效量”又称免疫保护量或产生免疫应答的有效量，为可在接受者体内有效诱导免疫原性应答的量。所述免疫应答可能足以用于诊断目的或其它试验，或可能适合用于预防疾病的征兆或症状，包括由病原体引起的感染所造成的不利的健康结果或其并发症。体液免疫力或由细胞介导的免疫力或此二者均可被诱导。动物对免疫原性组合物的免疫应答可通过例如测量抗体效价、淋巴细胞增殖分析而间接评估，或在以野生型毒株攻击后通过监测征兆或症状来直接评估，而该由疫苗提供的保护性免疫力可通过测量例如受试者的临床征兆如死亡率、发病率的减少、温度数值、受试者总体生理状况及总体健康和表现来评估。所述免疫应答可包括但不限于诱导细胞性和/或体液免疫力。用语“抗原”又称免疫原，是指任何刺激免疫应答的物质，是一种能够被抗体结合的分子，还能够诱导产生B-和/或T-细胞的体液免疫应答和/或细胞免疫应答，还具有一个或多个表位(B-和T-表位)。所述抗原为个别的或其任何组合的病毒(灭活的病毒、减毒及经修饰的活病毒)、细菌、寄生虫、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、重组蛋白质、合成的肽、蛋白质提取物、细胞(包括肿瘤细胞)、组织、碳水化合物(例如，多糖)、脂肪酸、磷壁酸(teichiocacid)、肽聚糖、脂质和糖脂。可作为抗原使用的病毒包括但不限于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种佐剂组合物，其包含丙烯酸系聚合物‑ε‑聚赖氨酸纳米颗粒。

【技术特征摘要】
1.一种佐剂组合物，其包含丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的佐剂组合物，其特征在于，100重量份的佐剂组合物中，包含0.001-5重量份的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒；优选地包含0.01-3重量份的丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒。3.根据权利要求1或2所述的佐剂组合物，其特征在于，所述丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒由丙烯酸系聚合物与ε-聚赖氨酸通过离子键合制备而成；优选地，所述丙烯酸系聚合物与ε-聚赖氨酸的质量比为(1-10):1；进一步优选地，所述丙烯酸系聚合物-ε-聚赖氨酸纳米颗粒的粒径为200-1500nm。4.根据权利要求3所述的佐剂组合物，其特征在于，所述丙烯酸系聚合物选自聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚(丙烯酸-co-甲基丙烯酸)和聚(丙烯酸-co-丙烯酰胺)中的一种或多种；优选地，所述丙烯酸系聚合物选自聚丙烯酸；进一步优选地，所述聚丙烯酸为市售的卡波姆。5.根据权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，刘永梅，张许科，
申请(专利权)人：洛阳赛威生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41