一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法技术

一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法，属于植物病原菌检测技术领域。本发明专利技术包括以下步骤：a）病原菌的分离、鉴定和纯化；b）病原菌的接种；c）病原菌的再分离；d）病原菌的再分子鉴定。本发明专利技术水稻细菌性穗枯病病原菌的鉴定方法简单、快速、准确。

Isolation and identification of a bacterial pathogen of bacterial blight in Rice

A method for separating and identifying the pathogen of bacterial leaf blight of rice, which belongs to the field of detection of plant pathogenic bacteria. The invention comprises the following steps: a) isolation, identification and purification of pathogenic bacteria; b) inoculation of pathogenic bacteria; c) re isolation of pathogenic bacteria; d) re identification of pathogenic bacteria. The method for identification of bacterial pathogen of bacterial leaf blight of rice is simple, fast and accurate.

【技术实现步骤摘要】
一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法
本专利技术属于植物病原菌检测
，具体涉及一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法。
技术介绍
水稻是我国最重要的粮食作物之一，种植面积约4.5亿亩，占粮食总播种面积的27%；产量约2.1亿吨，占粮食总产的34.7%，且超过65%人以稻米为主食。水稻细菌性穗枯病（Bacterialpanicleblightofrice，BPBR）是新上升的世界性的重要水稻病害，主要病原菌为颖壳伯克氏菌（Burkholderiaglumae），在水稻的苗期/穗期分别引起秧苗枯萎腐烂和谷粒瘪壳、变褐和腐坏，一般造成产量损失15%-20%。亚洲、非洲、北美和南美洲均有细菌性穗枯病爆发和流行的报道，在美国稻区尤为严重，最高产量损失达80%。2007年，水稻细菌性穗枯病在中国被列为检疫性病害，但近年来由于气候改变、水稻品种（组合）的更换、耕作栽培制度的变化等因素，该病目前正在中国发生和蔓延。2010年以来的调查发现，东北三省，长江流域的湘、鄂、赣、皖、江、浙及海南岛和两广的稻区均发现疑似穗枯病症状。由于水稻穗部病害，包括真菌性穗枯病，穗腐病，稻粒黑粉等都能引起细菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：a）病原菌的分离、鉴定和纯化采集水稻细菌性穗枯病疑似样品，利用组织分离法选择褐化腐坏谷粒，依次使用酒精溶液和次氯酸钠表面消毒，无菌水冲洗，谷粒细化溢菌，无菌接种环蘸取菌液在NA培养基平板上划线，置于恒温恒湿培养箱培养；挑取不同形态的单菌落，利用

【技术特征摘要】
1.一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：a）病原菌的分离、鉴定和纯化采集水稻细菌性穗枯病疑似样品，利用组织分离法选择褐化腐坏谷粒，依次使用酒精溶液和次氯酸钠表面消毒，无菌水冲洗，谷粒细化溢菌，无菌接种环蘸取菌液在NA培养基平板上划线，置于恒温恒湿培养箱培养；挑取不同形态的单菌落，利用Burkholderia通用引物BGGF/BGGR和B.glumae特异引物BGSF/BGSR，进行两次菌落PCR反应，获得目标片段的单菌落扩大培养，保存菌液；b）病原菌的接种选取生长约3周的健康水稻幼苗，放入加有步骤a）分离纯化的病原菌液的植物营养液中浸根，在恒温恒湿培养箱中，观察幼苗的生长状况，并以没有加病原菌液的植物营养液中生长的水稻幼苗为对照；c）病原菌的再分离待病害症状稳定后，采集病样，再在NA培养基分离病原菌，获取与原分离物一致的分离物；d）病原菌的再分子鉴定将步骤c）获取的分离物，挑取单菌落，利用B.glumae的特异性引物BGSF/BGSR，进行菌落PCR,扩增目的片段，对扩增产物进行测序；将获得序列与Genbank中已有序列进行比对，获得分离物种属信息。2.如权利要求1所述的一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法，其特征在于所述的步骤a）中酒精溶液为70%酒精水溶液，所述次氯酸钠溶液为1%的次氯酸钠水溶液。3.如权利要求1所述的一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法，其特征在于所述的步骤a）中恒温恒湿培养箱培养条件为温度30℃，湿度80%，培养24h。4.如权利要求1所述的一种水稻细菌性穗枯病病原菌的分离鉴定方法，其特征在于所述的步骤a）中Burkholderia通用引物BGGF的序列如SEQIDNo.1所示，BGGR的序列如SEQIDNo.2所示；B.glumae特异引物BGSF的序列如SEQIDNo.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯雨萱，黄世文，徐以华，
申请(专利权)人：中国水稻研究所，
类型：发明
国别省市：浙江,33